SFTS病毒感染脾脏网状成纤维细胞系的建立

目的分离、纯化、培养和永生化小鼠脾脏原代网状成纤维细胞（fibroblastic reticular cells, FRCs），筛选和鉴定永生化的FRCs克隆，证明永生化FRCs可用于SFTS病毒（SFTSV）体外感染研究。方法使用磁珠和流式细胞分选等技术分离、纯化和培养小鼠脾脏FRCs；使用SV40永生化FRCs，筛选单克隆并培养50代以上，使用转录组测序（RNA Sequencing, RNA-seq）和激光共聚焦技术对原代和永生化的FRCs进行比较和鉴定；用SFTSV体外感染的永生化的FRCs。结果成功得到4个永生化的FRCs克隆；鉴定结果显示Clone02符合FRCs表型，且纯度均达到了99%；转录组测序相关性分析显示Clone02细胞株基因表达与原代FRCs接近；基因表达分析和激光共聚焦实验证实Clone02的表型和原代FRCs相同；SFTSV在MOI值0.5的条件下即可成功感染Clone02细胞。 结论永生化的FRCs Clone02细胞保持了原代细胞的形态学、免疫学特征，与原代FRCs基因表达谱接近，可被SFTSV体外感染，是一个新的有潜力的SFTSV体外研究的细胞平台。