氧化型α1-抗胰蛋白酶对HBE细胞释放炎症因子的影响

目的:探讨氧化型α1-抗胰蛋白酶(Ox-AT)对体外培养人支气管上皮(HBE)细胞炎症因子白细胞介素8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)释放的影响及可能机制。方法:从人血浆中分离纯化获得天然构型AT(N-AT),加入氧化剂获得Ox-AT;用不同浓度N-AT和Ox-AT分别作用于体外培养的HBE细胞,用ELISA方法检测不同时段培养上清液中IL-8和MCP-1的含量,同时观察NF-κB抑制剂Bay11-7082对Ox-AT引起HBE细胞炎症因子释放的影响。结果:Ox-AT可促进HBE细胞释放IL-8和MCP-1,其促进作用与Ox-AT的浓度及作用时间呈正相关;用0.5 g/L Ox-AT孵育HBE细胞4、10和24 h,其促进HBE细胞分泌IL-8和MCP-1的作用与10μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)的作用基本一致,而N-AT无刺激HBE细胞分泌IL-8和MCP-1的作用;Ox-AT能显著增加NF-κB活性;Ox-AT的促炎症作用能被NF-κB抑制剂Bay11-7082抑制。结论:Ox-AT是人正常支气管上皮细胞的强致炎因子,机制可能与NF-κB信号通路激活有关。

氧化型α1抗胰蛋白酶定量检测试剂盒研制及对吸烟男性的检测分析

目的介绍一种血清氧化型α1抗胰蛋白酶(Ox-AT)的定量检测方法,并分析吸烟男性血清Ox-AT的表达水平。方法构建一种以Ox-AT特异性单抗为检测抗体的双抗夹心ELISA法,用纯化的Ox-AT作为标准品定量;分析我国吸烟与非吸烟男性血清中Ox-AT的水平。结果所建立的双抗夹心ELISA试剂盒检测限为2.58μg/L,在0～500μg/L浓度范围内R2值0.995 5,批间差为11.27%,准确度为88.19%,试剂盒4℃保质期超过6个月;对20对吸烟与非吸烟男性血清Ox-AT进行检测,吸烟组为55.43±49.94μg/L,显著高于非吸烟对照组的11.01±12.15μg/L(P<0.001),两组间α1-AT无显著差异。结论所建立的ELISA法能用于血清Ox-AT的定量检测;血清Ox-AT可能比α1-AT更适合作为我国COPD的评价指标。