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含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建
被引量:
2
1
作者
郭超
alexander endler
+2 位作者
张敬
石红军
张军
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2008年第1期17-20,共4页
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启...
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。
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关键词
红色荧光蛋白
DsRed2
RNA干扰
U6启动子
下载PDF
职称材料
题名
含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建
被引量:
2
1
作者
郭超
alexander endler
张敬
石红军
张军
机构
同济大学基础医学院生物教研室
同济大学生命科学与技术学院
出处
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2008年第1期17-20,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30570690)
文摘
目的构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰质粒载体pDsRed2-SilencerU6,便于利用荧光显微镜、FACS等实验技术开展RNA干扰研究。方法质粒pDsRed2-N1中DsRed2蛋白的编码基因BbsⅠ酶切位点无意突变后,破坏pDsRed2-N1多克隆位点,PCR扩增CMV启动子、DsRed2蛋白基因片段并将其克隆至RNA干扰载体pSilencerU6,得到pDsRed2-SilencerU6质粒,利用脂质体转染技术将其转染HEK293T细胞,荧光显微镜、FACS检测转染效率。结果DsRed2蛋白编码基因序列BbsⅠ点突变正确,成功构建pDsRed2-SilencerU6载体,其在HEK293T细胞中可显著表达红色荧光蛋白,利用脂质体转染技术,转染效率达70.61%。结论成功构建含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6并在哺乳动物细胞中表达,为今后开展RNA干扰研究提供了基础。
关键词
红色荧光蛋白
DsRed2
RNA干扰
U6启动子
Keywords
red fluorescent protein
DsRed2
RNA interference
U6 promoter
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
含红色荧光蛋白DsRed2的RNA干扰载体pDsRed2-SilencerU6构建
郭超
alexander endler
张敬
石红军
张军
《同济大学学报(医学版)》
CAS
2008
2
下载PDF
职称材料
已选择
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参考文献
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