丙型肝炎病毒(HCV)膜区基因在系列血清中的变异研究

目的 研究HCV基因随时间推移产生的变化。方法 利用不同HCVE2区引物对 4例病人系列血清标本进行序列测定和比较 ,并用不同方法确定HCV基因型别。结果 用不同引物扩增、测序表明 4例病人基因均为 1b和 2a型基因 ,随时间推移发生型别转换 ,推测与混合感染有关 ,在 2型转换期有 1b/ 2a混合感染现象。同一病人同型HCV膜区基因随时间推移有核苷酸和氨基酸改变 ,但变异程度相对较小 ,但有一定规律性 ,表现为在膜区高变区有些氨基酸位点较保守 ,所测的两型HCV保守位点相同 ,在同一位点的氨基酸变化趋于相同。结论 本研究结果提示HCV基因变化是多层次的 ,首先是不同基因型变化 ,其次是基因本身序列变化 ,且变化具有一定规律性。

不同地区HCV感染病人同一基因型(1b)膜区(E_2)序列比较和分析

用采自中国河南省 (HN)、河北省 (HB)及瑞典 (SW )HCV感染者的血清标本 ,研究不同地区HCV感染病人同一基因型 (1b)膜区 (E2 )基因变化。利用RT—PCR对HCV膜区基因扩增并测定序列。结果显示不同地区分离的同一基因型HCV膜区序列各异 ,相同地域基因同源性较高。变化最大的区域是HVR区 ,核苷酸变化导致了氨基酸序列改变。

不同基因型HCV膜区(E2)基因克隆及亲、疏水性分析

目的 研究丙型肝炎病毒 (HCV)不同基因型膜区序列变异及其变异规律。方法 克隆不同基因型HCV的膜区基因 ,序列测定 ,核苷酸和氨基酸序列比较和分析。结果 不同基因型膜区基因相似性不同 ,从同一血清样本获得的不同克隆间 ,其同源性核苷酸大于 99.2 % ,氨基酸大于99 .9%。相同亚型核苷酸和氨基酸同源性大于 80 %。同型基因核苷酸和氨基酸同源性分别为 (6 3.9～ 75 .0 ) %和 (6 4.9～ 72 .8) %。异型基因同源性核苷酸为 (5 9.4～ 6 7.0 ) % ,氨基酸为 (5 6 .5～ 6 6 .3) %。氨基酸序列变化在某些部位有一定保守性。不同基因HCV高变区 (HVR)的亲水性和疏水性变化小于其下游 3′端区域。结论 HCV基因变化可能有一定规律性。

丙型肝炎病毒基因分型及核心区序列同源性分析

目的 研究不同地区丙型肝炎病毒 (HCV)基因型构成及基因变异。方法 HCV感染者血清 6 4份分别采自中国河南省 (2 5份 )和河北省 (18份 ) ,以及瑞典 (11份 )和德国 (10份 ) ,分别进行HCVRNA和基因型检测 ,对 11株HCV分离株核心区基因序列进行测定 ,并用软件分析各地域HCV核心区基因序列的同源性。结果 从中国两省和欧洲两国分离的HCV基因型构成不同 ,在我国血清标本中发现 1b和 2a亚型 ,在瑞典和德国标本中还发现 1a、2c和 3a亚型。在同一地区分离的同一基因型HCV核心区序列的同源性高于不同地区。结论 HCV基因型的构成与地域有关 。

从四例丙肝患者系列血清标本分析HCV基因的变异

目的 研究丙型肝炎病人系列血清标本的丙型肝炎病毒 (HCV)基因型变化及HCV膜区基因变异和“准种”现象。方法 对 4例因献血感染HCV病人的系列血标本 ,用特异性引物PCR扩增检测 ,5′ NCR和核心区测序确定HCV基因型 ,并对标本膜区基因进行克隆 ,每个标本随机选择 5～9个克隆进行测序分析。结果 发现随着时间推移 ,存在HCV基因型的转换现象。在 2种HCV基因型转换期存在混合感染。所有测定序列均为 1b或 2a或 1b +2a基因型。对从部分血样中获得的 5～9个克隆测序表明 ,在不同克隆间虽然存在一定的核苷酸差异 ,但在 5 70nt长度的序列中 ,仅有 0 8～4 5 6个核苷酸差异。结论 HCV基因变化是多层次的。同一病人可混合感染不同基因型HCV ,HCV膜区基因有随时间而发生变异现象。但在本研究的标本中 ,通过对同一标本基因多个克隆的序列测定 ,未见明显的“准种”现象。