溶血卵磷酯对人内皮细胞CD73的调节

【目的】探讨溶血卵磷脂(LPC)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)胞外5′-外核苷酸酶CD73的调节作用。【方法】将已汇聚HUVEC的细胞培养皿分为3组:①对照组:培养皿中仅加入乙烯-单磷酸腺苷(eAMP,5μmol/L);②LPC组:培养皿中在加入eAMP(5μmol/L)前加入LPC10μmol/L;③AOPCP组:培养皿中加入eAMP(5μmol/L)前加入胞外5′-外核苷酸酶抑制剂α,β-甲基腺苷-5′-二磷酸(AOPCP,50μmol/L)及LPC10μmol/L。在试验第15、30、45min时以高性能液相色谱仪(HPLC)测定各培养皿中乙烯-腺苷(eAD)含量。【结果】在上述3个时间点LPC组eAD生成较对照组显著增高(P<0.05),而AOPCP组较对照组显著减少(P<0.001)。【结论】①HUVEC细胞外存在腺苷分泌;②采用eAMP的细胞培养皿试验模型可很好地观察CD73活性,可用于CD73活性研究;③LPC可兴奋HUVEC细胞外5′-核苷酸酶,增加腺苷的分泌。

人血管内皮细胞中腺苷代谢的定量研究

目的:通过对人脐静脉内皮细胞腺苷分泌进行定性及定量研究,了解人类血管内皮细胞的腺苷代谢及机制。方法:收集并测定不同干预下细胞柱流出液中分离的人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷量。结果:在无干预、抑制腺苷激酶及去氨酶、抑制细胞膜腺苷转运情况下,人脐静脉内皮细胞腺苷分泌率分别为13.5±7.1 pmol.min-1.mg?-1、32.5±14.2 pmol.min-1.mg-1和20.8±15.7 pmol.min-1.mg-1。结论:人类血管内皮细胞内腺苷合成高于胞外,而细胞膜腺苷转运被抑制后的腺苷分泌率反而高于生理状态下分泌率,则表明腺苷在胞内分解代谢非常迅速,使部分腺苷反由胞外扩散入胞内。

人内皮细胞表面腺苷浓度测定

[目的]通过外源性腺苷输入法,测定人脐静脉内皮细胞表面腺苷浓度,进一步了解人类血管内皮细胞的腺苷代谢。[方法]建立细胞柱模型,分别以不同浓度的外源性腺苷注入细胞柱中,并收集各时相内细胞柱流出液中分离的人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷,以高性能液相色谱仪(HPLC)测量其所分泌腺苷的量。[结果]生理状态下人脐静脉内皮细胞分泌的腺苷浓度为(14.4±4.9)nmol/L,细胞表面腺苷浓度为(23.8±8.1)nmol/L,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]人类血管内皮细胞是人体内腺苷分泌的主要场所之一,在生理状态下的腺苷分泌率可较好地反映细胞表面腺苷的浓度;外源性腺苷输入法可用于定量测量细胞分泌物质在细胞表面的浓度。