苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D的表达调控

利用PCR扩增基因cry1D启动子及上游区片段 ,在测序的基础上构建含cry1D lacZ融合基因穿梭质粒 ,导入不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中 ,并以cry1Ab lacZ融合基因为对照测定 β 半乳糖苷酶活性 ,检测启动子上游区的作用。结果表明 ,cry1D lacZ和cry1Ab lacZ融合基因在不同遗传背景的菌株中表达完全不同 ,也许一些宿主专一性的因子参与了转录调控 ;而在同一菌株中Ccry1D lacZ和cry1Ab lacZ的表达差异是由于上游区的不同以及竞争有限的σ因子所致。利用PCR定点诱变技术突变其SD序列GGGGA为GGAGG后 ,cry1D lacZ融合基因的表达提高了 1 0～ 1 6倍。表明GGAGG是苏云金芽胞杆菌合适的SD序列 。

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D和cry1 Ab mRNA含量及稳定性研究

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种菌株HD 1 3 3含有代表性的三种cry1类基因cry1Ab,cry1C和cry1D ,它们的表达量却明显不同。通过Northern杂交检测了菌株HD 1 3 3中基因cry1D和cry1Ab的mRNA含量及其稳定性。结果表明 :基因cry1DmRNA的形成比基因cry1Ab的mR NA滞后 3h ,且基因cry1D形成mRNA的量很低 ,产生过程很平稳 ,在芽胞形成中期比cry1AbmRNA低 3 7倍 ;cry1AbmRNA含量在芽胞形成前期高于后期 ,在后期仍能大量持续稳定地转录。cry1DmRNA的半衰期为 1 8min,而cry1AbmRNA的半衰期为 1 4min。尽管cry1DmRNA比cry1AbmRNA的半衰期更长 。