组织工程化人工神经实验研究

目的 研究组织工程化人工神经修复大鼠2.5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 21只2月龄Lewis lw雌性大鼠随机分成三个神经移植组,每组7只。A组:种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管,即组织工程化人工神经。B组:无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管。C组:自体神经移植组。术后六个月,进行系列神经电生理监测,神经肌肉组织学观察,S-100和神经微丝蛋白(Neurofilament)免疫组化染色,轴突计数等检查。结果 在A组和C组移植神经上均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位(CMAP),再生轴突已通过移植神经全长,远端肌肉轻度萎缩。而B组中没有或仅记录到极小波幅的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 初步结果显示:组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。

组织工程化人工神经修复长段神经缺损实验的初步报告

目的 研究组织工程化人工神经修复大鼠 2 .5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 90只 2个月月龄的Lewis 1W雌性大鼠 ,按手术先后顺序随机分成 3个神经移植组 ,每组 3 0只。A组 :用种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管桥接 ,即组织工程化人工神经组。B组 :用无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管桥接 ,即对照组。C组 :自体神经移植组。术后 6个月 ,进行神经电生理监测 ,神经肌肉组织学观察 ;用S 10 0和神经微丝蛋白免疫组化染色后 ,行轴突计数等检测。结果 完成对 2 1只大鼠 (每组 7只 )的实验评估。从A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位 (CMAP) ,再生轴突已通过移植段神经全长 ,远端肌肉轻度萎缩。B组中则没有或仅记录到波幅很低的CMAP ,移植神经远端结缔纤维组织增生 ,再生轴突罕见 ,所支配肌肉明显萎缩。结论 组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。

组织工程化人工神经内部支架及其生物相容性研究

目的 研制组织工程化人工神经内生长雪旺细胞的内部支架结构。方法 用 6 0的生物可吸收Vicryl 或PDS 纤维 ,在硅胶圈上编织成三维立体网架 ,经Matrigel蛋白胶涂层 ,与 10 6/ml新生或成年鼠雪旺细胞共同培养 3d。Live/Dead荧光染色和扫描电镜观察细胞贴附情况。将 10根经Matrigel蛋白胶涂层的Vicryl 或PDS 纤维 ,植入 1.5cm长的胶原神经管内 ,然后将其桥接于Lewis鼠坐骨神经缺损处。术后 5周取材作组织学和透射电镜观察。结果 在三维立体网架上 ,雪旺细胞沿纤维纵轴贴附伸展 ,并围绕纤维形成多条细胞链。荧光染色显示在纤维上有纵行的活细胞带 ,并见到多层重叠现象。组织工程化人工神经在体内 5周 ,含有涂层纤维的胶原神经管表面为有丰富的新生血管的软组织所取代。神经束已沿生物纤维越过神经管中点。结论 培养的雪旺细胞在纤维网架上贴附生长 ,类似瓦勒变性后形成的“Bungner”带 ,被认为是合适的人工神经内部支架结构。实验结果表明 ,种植纤维的胶原神经管体 。

无血清法培养新生和成年雪旺细胞

目的 探索应用“M”无血清培养液培养新生和成年鼠雪旺细胞的可行性。方法 取新生(出生 1～ 3d)和成年 (3～ 4个月 )Lewis鼠的坐骨神经 ,分别经差速贴壁法和 3周体外变性法获取雪旺细胞 ,然后采用“M”无血清培养液培养 1周。用S 10 0和 5 溴化鸟嘧啶 (BrdU)免疫组化法分别鉴定雪旺细胞的纯度和增殖率。结果 新生和成年鼠雪旺细胞培养后 1周 ,其纯度分别达 95 %和 93% ,增殖率分别达 73.8%和 38.3%。大多数污染的成纤维细胞处于DNA合成静止期。结论 应用“M”无血清培养液简化了雪旺细胞的培养技术 ,有效地控制了成纤维细胞的污染。