癌基因c-myc和K-ras在卵巢癌发生发展中的作用

目的:探讨癌基因c-myc和K-ras在卵巢癌发生发展中的作用。方法:用Moloney逆转录病毒载体先后将正常的c-myc基因和突变的K-ras基因转导入小鼠正常卵巢上皮细胞(MOSE),建立表达c-myc或(和)K-ras基因的细胞系,分别称为Myc细胞、Ras细胞、RM细胞,通过细胞增殖试验、裸鼠体内成瘤试验研究转基因后MOSE细胞生物学特性的改变。结果:用携带有c-myc和K-ras基因的重组逆转录病毒感染MOSE后,用RT-PCR和Westernblot能分别检测到有相应的c-myc或(和)K-rasmRNA转录以及蛋白的表达;Ras细胞增殖显著快于MOSE和Myc细胞(P<0·01),RM细胞显著快于Myc细胞(P<0·05);将Ras和RM细胞腹腔注射于裸鼠体内,有肿瘤形成,免疫组化结果显示瘤组织有K-ras和c-myc蛋白的表达;MOSE细胞和Myc细胞没有肿瘤形成。结论:重组逆转录病毒载体具有高转导效率,突变的K-ras可使MOSE发生恶性转化,在体内形成肿瘤;c-myc不能使MOSE发生恶性转化,但具有协同作用。

永生化正常小鼠卵巢上皮细胞系的建立

目的:探讨具有“永生化”特性的正常小鼠卵巢上皮细胞(MOSE)系建立的方法和可行性。方法:用胰酶消化法从温度敏感抗原(TsAg)转基因小鼠中分离MOSE,用4%血清培养液培养,通过细胞形态学特征的观察、细胞免疫组织化学染色检测CK-19和Vimentin来鉴别,体内成瘤实验观察有否恶性转化。结果:用胰酶消化法能迅速获得足够的MOSE,低血清(4%)培养可以有效去除可能污染的间质细胞,CK-19和Vimentin检测显示均符合上皮细胞的特性,细胞培养和体内成瘤实验均提示其符合具有“永生化”细胞的特性,没有自发发生恶性变,在体内没有成瘤能力。结论:用胰酶消化法,从转TsAg小鼠卵巢中获取的正常MOSE细胞具有“永生化”的特性,能够满足体外实验研究的需要,为卵巢癌的研究提供了可靠的细胞系。