谷氨酸棒杆菌基因缺失菌株的定点构建

通过目标基因内部缺失片段的获得以及DNA重组交换等技术的有效运用 ,在氨基酸工业重要生产菌谷氨酸棒杆菌中 ,成功地定点构建了两个目标研究基因的单基因缺失菌株和双基因缺失菌株 ,并通过了PCR和测序等方法的分析验证。

转座子挽救法对转座子突变菌株中插入位点的定位分析

为寻找谷氨酸棒杆菌转座子插入突变菌株中的转座子插入位点 ,采用了转座子挽救法对转座子及其插入位点附近的序列进行分离 ,并测定插入位点相邻DNA序列 ,获得了三个转座子插入位点DNA序列 ,其中一个是柠檬酸合成酶基因 ,另两个为目前未知基因 ,暂命名为orfA和orfB。该方法简便易行 。

谷氨酸棒状杆菌在乙酸盐和葡萄糖基质上的蓝白生长筛选(英文)

在谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢调控关键酶—异柠檬酸裂解酶 ace A基因两段启动子区域后面组装了无启动子的β-半乳糖苷酶报道基因 ,并且带上四环素抗性标记基因构建了两个检测质粒 p ROH7和 p ROHO.通过该两个质粒转化了谷氨酸棒状杆菌野生型菌株 Corynebacterium glutamicum ACTT14 75 2 ,分别获得了含有两个检测质粒的两种谷氨酸棒状杆菌 ,由此建立了谷氨酸棒状杆菌在乙酸盐和葡萄糖基质上的两个蓝白生长筛选系统 .结果显示当两种菌株生长在含有葡萄糖的基本培养基上时呈现白色菌落 ,而生长在含有乙酸盐的基本培养基上时呈现蓝色菌落 ;其中菌落颜色还随菌株中检测质粒p ROH7和 p ROHO的不同而呈现淡蓝色和深蓝色的变化 .含有检测质粒 p ROH7和 p ROHO菌落的颜色变化反映了细胞在葡萄糖和乙酸盐不同和碳源上的调控状态 。