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褪黑素联合纳洛酮对肝内胆汁淤积的作用及机制研究 被引量:2
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作者 毕华 郑晓明 +2 位作者 马鑫 王永欣 崔晓燕 《中国医药科学》 2023年第13期30-34,共5页
目的应用生物信息学研究方法探讨纳洛酮联合褪黑素治疗胆汁淤积的作用及机制,并采用动物实验进行初步验证。方法通过Drugbank、DisGeNET、String、DAVID网络资源和Cytoscape软件,获得褪黑素、纳洛酮及胆汁淤积疾病相关基因,获得药物与... 目的应用生物信息学研究方法探讨纳洛酮联合褪黑素治疗胆汁淤积的作用及机制,并采用动物实验进行初步验证。方法通过Drugbank、DisGeNET、String、DAVID网络资源和Cytoscape软件,获得褪黑素、纳洛酮及胆汁淤积疾病相关基因,获得药物与疾病靶基因交集,利用DAVID对交集靶点基因进行功能富集分析。动物实验采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导胆汁淤积大鼠模型。进行肝脏功能相关的血清生化指标检测及病理学研究。结果获得药物和疾病交集靶点22个。主要富集于磷脂酰肌醇3-激酶信号、信号转导等通路。动物实验结果显示,纳洛酮联合褪黑素可明显改善模型组大鼠生化指标、肝脏病理变化,提高肝脏EGFR蛋白表达水平。结论纳洛酮联合褪黑素可通过调节EGFR、ERBB2等靶点,调控分子功能和疾病相关通路,实现改善胆汁淤积的作用。 展开更多
关键词 生物信息学 相互作用网络 关键基因 胆汁淤积 纳洛酮 褪黑素
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重组蛋白溶液pH测定的能力验证结果分析 被引量:2
2
作者 丁有学 秦玺 +4 位作者 张河战 赵萌 毕华 史新昌 饶春明 《中国药师》 CAS 2019年第9期1722-1724,共3页
目的:评价国内药品检测实验室重组蛋白制品p H测定检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备p H测定样品,以《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0631方法为检测方法,组织全国相关实验室对该样品进行p H测定检验检测,汇总结果... 目的:评价国内药品检测实验室重组蛋白制品p H测定检验检测能力。方法:模拟重组蛋白制品设计并制备p H测定样品,以《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0631方法为检测方法,组织全国相关实验室对该样品进行p H测定检验检测,汇总结果后进行技术分析和统计分析,结果采用基于Robust统计量的Z比分数进行评价和报告。结果:30家实验室中,检测均数的|Z|值>3的实验室有1家(3.3%);全部检测值的|Z|值>3的有3家。总体而言,多数实验室(27家)检测结果良好。结论:多数实验室的重组蛋白溶液p H测定的能力验证结果令人满意,可以准确的给出检测值,并且与其他实验室的数据基本保持一致,本次p H测定的能力验证为重组蛋白制品检验能力的普及奠定基础。 展开更多
关键词 重组蛋白溶液 能力验证 PH 技术分析
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RP-HPLC法测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸的含量 被引量:1
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作者 于雷 陶磊 +2 位作者 毕华 李响 饶春明 《中国医药导报》 CAS 2019年第6期109-112,共4页
目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mm... 目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/L磷酸二氢钾-1.1 mmol/L磷酸氢二钾-10%甲醇为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.43 mL/min。结果对照品和3批原液中IsoAsp含量相近(0.30~0.32 mol/mol sCD95-Fc),3批成品中IsoAsp含量明显增高(0.51~0.53 mol/mol sCD95-Fc);25℃和37℃处理24 h后成品中IsoAsp含量无明显变化,60℃处理后明显增加。结论该法适用于可溶性CD95-Fc融合蛋白中IsoAsp含量检测,高温处理可加快样品中IsoAsp生成。 展开更多
关键词 可溶性CD95-Fc 异天冬氨酸 脱酰胺修饰 反相高效液相色谱
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血管内皮生长因子抑制剂结合活性试验两种结果分析方法比较
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作者 毕华 李永红 +4 位作者 范文红 陶磊 裴德宁 丁有学 饶春明 《中国药事》 CAS 2019年第7期813-818,共6页
目的:对血管内皮生长因子抑制剂(VEGF Trap)结合活性试验两种结果分析方法进行比较,以考察两者的差异。方法:采用固定剂量的VEGF与系列稀释的VEGF Trap处理之后,检测未结合的VEGF的量,分别以未结合的VEGF量对VEGF Trap浓度梯度和未结合... 目的:对血管内皮生长因子抑制剂(VEGF Trap)结合活性试验两种结果分析方法进行比较,以考察两者的差异。方法:采用固定剂量的VEGF与系列稀释的VEGF Trap处理之后,检测未结合的VEGF的量,分别以未结合的VEGF量对VEGF Trap浓度梯度和未结合的VEGF检测板的OD值对VEGF Trap浓度梯度进行四参数方程拟合,两种方法计算该产品的结合活性。结果:两种方法均满足试验有效性条件,且血管内皮生长因子抑制剂供试品和标准品的半数抑制浓度(IC50)均分别为3.68和3.6pmoL·L-1,供试品的结合活性为102%。结论:证明了两种分析方法得到的结果完全一致。为同类产品结合活性计算方法的选择提供借鉴。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子抑制剂 结合活性 半数抑制浓度 四参数方程
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社会支持对乳腺癌患者CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞的影响
5
作者 王艳梅 闫美宏 +1 位作者 毕华 吴博 《延安大学学报(医学科学版)》 2022年第1期24-27,共4页
目的分析社会支持对乳腺癌患者免疫抑制的影响以及对乳腺癌患者生存的意义。方法收集2019年11月至2020年1月延安大学附属医院甲乳外科经手术及病理学检查证实的乳腺癌根治术患者76例作为研究组,收集同期体检的健康人群76例作为对照组。... 目的分析社会支持对乳腺癌患者免疫抑制的影响以及对乳腺癌患者生存的意义。方法收集2019年11月至2020年1月延安大学附属医院甲乳外科经手术及病理学检查证实的乳腺癌根治术患者76例作为研究组,收集同期体检的健康人群76例作为对照组。采用流式细胞术检测两组人群外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞。同时应用社会支持量表分析不同社会支持水平对乳腺癌患者免疫抑制的影响。结果研究组外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞数量手术前后均较对照组高,术前较术后高,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组领悟社会支持量表评分较高的患者外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T细胞较低,领悟社会支持量表评分最高组与最低组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌患者大多存在一定程度免疫抑制,手术治疗可提高其免疫功能,且随着社会支持越高,其免疫抑制程度越轻。 展开更多
关键词 乳腺癌 调节性T细胞 免疫抑制 社会支持
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气相色谱法测定恩曲他滨中5种有机溶剂残留量 被引量:3
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作者 王春霞 徐艳梅 +3 位作者 盖成 苗会娟 毕华 高燕霞 《化学分析计量》 CAS 2022年第6期36-40,共5页
建立恩曲他滨原料药中5种有机溶剂残留量的气相色谱测定方法。以10%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶解介质,采用气相色谱顶空进样法测定恩曲他滨中的甲醇、乙醇、四氢呋喃、苯;采用气相色谱直接进样法,测定恩曲他滨中的正己烷。在选定的仪器... 建立恩曲他滨原料药中5种有机溶剂残留量的气相色谱测定方法。以10%N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶解介质,采用气相色谱顶空进样法测定恩曲他滨中的甲醇、乙醇、四氢呋喃、苯;采用气相色谱直接进样法,测定恩曲他滨中的正己烷。在选定的仪器工作条件下,甲醇、乙醇、四氢呋喃、苯、正己烷5种残留溶剂完全分离,在所考察的浓度范围内4种有机溶剂的质量浓度与色谱峰面积具有良好的线性,线性相关系数为0.9994~0.9999,检出限为0.4~1.4 ng/mL,平均回收率为98.4%~99.0%,测定值的相对标准偏差均小于1.0%(n=9)。正己烷的质量浓度在0.01159~0.1159 mg/mL范围内与色谱峰面积具有良好的线性,线性相关系数为0.9999,样品加标回收率为97.9%,测定值的相对标准偏差小于1.0%(n=9),检出限为8.7 ng/mL。这两种方法灵敏度、准确度均达到溶剂残留量的检测要求,可用于恩曲他滨原料药中5种残留溶剂的检测与分析。 展开更多
关键词 恩曲他滨 残留溶剂 气相色谱法 顶空进样 直接进样
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高效液相色谱法测定柠檬酸三甲酯含量及有关物质 被引量:1
7
作者 张冬 王强 +2 位作者 毕华 靳玲 高燕霞 《中国药业》 CAS 2022年第17期73-76,共4页
目的 建立测定自制柠檬酸三甲酯含量及有关物质的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为25 mmol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至2.5)-乙腈(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为... 目的 建立测定自制柠檬酸三甲酯含量及有关物质的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为25 mmol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至2.5)-乙腈(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为214 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果 柠檬酸三甲酯质量浓度在1.3~53.2μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8,n=5);检测限为13 ng,定量限为26 ng;精密度和稳定性试验的RSD均小于2.0%;平均加样回收率为99.98%,RSD为0.54%(n=9);3批自制样品中柠檬酸三甲酯的平均含量为98.71%。自制柠檬酸三甲酯经强酸、强碱、高温、氧化、强光照射破坏后,柠檬酸三甲酯峰与有关物质柠檬酸、杂质a、杂质b、杂质c的色谱峰均可实现有效分离;上述有关物质均被检出,含量分别为0.21%~0.22%,0.01%,0.06%~0.07%,0.03%~0.04%。结论 该方法专属性强、准确度高,可用于柠檬酸三甲酯的含量测定和有关物质分析。 展开更多
关键词 柠檬酸三甲酯 高效液相色谱法 含量测定 有关物质
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壳聚糖交联改性及其衍生物的研究进展 被引量:8
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作者 朱金禹 毕华 +2 位作者 张雪峰 闫美宏 樊晓霞 《延安大学学报(自然科学版)》 2019年第3期55-59,共5页
壳聚糖具有抗菌、止血、生物降解、生物相容性等特点,还能够促进伤口愈合。但壳聚糖力学性能较差,且仅能溶于有机酸或无机酸溶液。针对单纯壳聚糖力学性能不足的缺点和不易溶解于水的特点,本文综述了壳聚糖的化学交联改性和物理交联改... 壳聚糖具有抗菌、止血、生物降解、生物相容性等特点,还能够促进伤口愈合。但壳聚糖力学性能较差,且仅能溶于有机酸或无机酸溶液。针对单纯壳聚糖力学性能不足的缺点和不易溶解于水的特点,本文综述了壳聚糖的化学交联改性和物理交联改性增强其性能的研究进展,并对壳聚糖衍生物改善溶解性的研究进展进行论述,旨在为壳聚糖的进一步研究提供参考,更好的增强壳聚糖的各项性能,拓展其在医疗保健、卫生、污水处理等方面的用途。 展开更多
关键词 壳聚糖 化学交联 物理交联 改性
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2003-2019年广州市生活饮用水中9种金属/类金属元素监测结果分析 被引量:1
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作者 周金华 王德东 +6 位作者 黎晓彤 钟嶷 郭重山 黄仁德 毕华 孙丽丽 李琴 《环境卫生学杂志》 2021年第3期304-308,F0003,共6页
目的调查2003—2019年广州市自来水厂水源水和出厂水中9种金属/类金属元素的水平。方法依据《生活饮用水卫生规范》(2001)和《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)对2003—2019年广州市自来水厂水源水和出厂水中镉、锰、铅、砷、... 目的调查2003—2019年广州市自来水厂水源水和出厂水中9种金属/类金属元素的水平。方法依据《生活饮用水卫生规范》(2001)和《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)对2003—2019年广州市自来水厂水源水和出厂水中镉、锰、铅、砷、铁、铜、硒、锌和铬(六价)进行检测。分别采用《地表水环境质量标准》(GB 3838-2002)Ⅲ类标准和《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)对水源水和出厂水中9种金属/类金属的测定结果进行评价。采用χ^(2)检验分析不同水系、不同季度水源水和出厂水中超标金属/类金属的情况。结果广州市自来水厂的水源水中铁、锰和铅超标,合格率分别为40.66%(209/514)、64.59%(322/514)和98.83%(508/514),铁和锰的合格率有上升的趋势(χ^(2)分别为18.30和131.54,P<0.01)。出厂水中锰和铁超标,合格率分别为93.97%(483/514)和99.81%(513/514),出厂水中铁、锰和铅的合格率均高于水源水(χ^(2)分别为430.01、135.02和6.04,P<0.05)。不同水系的水源水中铁和锰的合格率存在差异,珠江广州段中铁(20.14%)和锰(12.50%)的合格率低于其它水系。不同季度水源水中铁和铅的合格率存在差异,第一季度(53.44%)和第四季度(50.40%)铁的合格率均高于第二季度(27.27%)和第三季度(31.75%),第二季度和第三季度水源水中个别水样存在铅超标情况。结论广州市自来水厂水源水中铁、锰、铅和出厂水中锰、铁超标,珠江广州段来源的水源水中铁和锰的合格率最低。今后应重点关注铁锰铅,同时水厂应根据水源水和出厂水的实时监测数据及时调整监测指标和频率。 展开更多
关键词 生活饮用水 金属 类金属 监测
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首批1型单纯疱疹病毒溶瘤活性测定国家候选标准品的研制
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作者 秦玺 胡金盼 +7 位作者 李永红 史新昌 丁有学 毕华 韩春梅 郑红梅 饶春明 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期663-670,共8页
目的:研制首批1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)溶瘤活性测定国家标准品。方法:按2020年版《中华人民共和国药典》三部相关要求,分别进行HSV-1溶瘤活性测定液体标准品和冻干标准品的制备和质量检测,并使用热加速试验进行... 目的:研制首批1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)溶瘤活性测定国家标准品。方法:按2020年版《中华人民共和国药典》三部相关要求,分别进行HSV-1溶瘤活性测定液体标准品和冻干标准品的制备和质量检测,并使用热加速试验进行稳定性考察,以U-2 OS细胞/CCK-8法分别在3家实验室对标准品的溶瘤活性进行协作标定。对比研究液体标准品和冻干标准品,选择其中更为适用的1种作为国家标准品。结果:制备的2种HSV-1溶瘤活性测定标准品的质量检测结果均符合要求,其中冻干标准品水分含量为1.09%,分装精度为0.15%。稳定性试验结果用阿伦尼乌斯公式计算,初步预测液体标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需7.7年;冻干标准品溶瘤活性在-70℃下降低10%需6.1×10^(5)年,其稳定性得到很大提高。3个实验室协作标定进行了共21次测定,液体标准品的溶瘤活性值几何均数为7.08×10^(4)U·mL^(-1),冻干标准品的溶瘤活性值几何均数为1.82×10^(4)U·支^(-1)。HSV-1标准品原液在冻干后溶瘤活性由7.08×10^(4)U·mL^(-1)下降至3.03×10^(4)U·mL^(-1),但因其溶瘤活性在预稀释100倍后仍然出现良好的S型量效关系曲线,并不影响它作为标准品使用的要求。将液体标准品作为样品,用冻干标准品作为标准品进行校准后,3家实验室结果的几何变异系数(GCV)由64.4%下降到29.2%,实验的精密度得到较大提高。结论:该批HSV-1溶瘤活性测定冻干标准品各项指标均符合相关要求,与液体标准品相比更适合作为国家标准品使用,其溶瘤活性赋值为1.82×10^(4)U·支^(-1)。 展开更多
关键词 1型单纯疱疹病毒(HSV-1) U-2 OS细胞/CCK-8法 溶瘤活性 标准品 冻干 稳定性
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Distribution characteristics of China's key cultural relic tourism resources and suggestions to its development and protection
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作者 YU Zhong-yuan LI Bo bi hua 《Ecological Economy》 2010年第4期447-456,共10页
SPSS13.0 was used to process the data of the 1-6 batch of key cultural relic conservation units promulgated by the State Administration of Cultural Heritage of China;and multi-element evaluation method was used to cal... SPSS13.0 was used to process the data of the 1-6 batch of key cultural relic conservation units promulgated by the State Administration of Cultural Heritage of China;and multi-element evaluation method was used to calculate the composite distribution index.The spatial distribution of cultural relics of provinces in China can be divided into four grades,namely:very rich areas,rich areas,poor areas and very poor areas;the article analyzes the characteristics of cultural resources in spatial and temporal distribution.The paper holds that(1)the distribution of China's cultural relic tourism resources is relatively concentrated,different sharply from region to region,with more Han nation's heritage,less relics of the ethnic minorities;(2) Henan,Hebei,Shaanxi,Shanxi Province are the main regions with heavy distribution of cultural resources;(3) relics appeared in specific time periods in China's history.Ming and Qing Dynasties,Sui,Tang and Five Dynasties,Song,Liao and Jin,the Western Han,Shang and Zhou dynasties,the New Stone Age are the major periods producing more cultural relics.This paper also analyzes relationships of the emergence of cultural relics with production technology,specific historical process,specific geographical location,political system,religion,national culture,customs,architectural styles and techniques of the traditional cultural educational system.Finally,the paper discusses the development and protection of heritage. 展开更多
关键词 国家文物局 中国文化 开发与保护 旅游资源 重点文物保护单位 特征 空间分布 贫困地区
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OROGENESIS-BASINOGENESIS IN THE LUSHAN MOUNTAIN-POYANG LAKE, NORTH JIANGXI PROVINCE,CHINA
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作者 bi hua TAN Keren and WU Qianhong(Institute of Geochemistry, Academia Sinica, Guiyang, 550002, China)(Changsha Institute of Geotectonics, Academia Sinica, Hunan, 410013, China) 《Geotectonica et Metallogenia》 1997年第Z2期43-54,共12页
Many scientists used to study orogenesis and basinogenesis separately, and thought that the Lushan Mountain-Poyang Lake, North Jiangxi province, only formed in the Quaternary. On the basis of analysis of the regional ... Many scientists used to study orogenesis and basinogenesis separately, and thought that the Lushan Mountain-Poyang Lake, North Jiangxi province, only formed in the Quaternary. On the basis of analysis of the regional deep-tectonic setting and main geological characteristics, the orogenesis-basinogenesis in the Lushan Mountain-Poyang Lake as a whole was studied, and its congenital, parturient and postnatal conditions were mainly discussed. On the above basis, four stages of orogeneis -basinogenesis in the Lushan Mountain -Poyang Lake were recognized: the presinian basic, the Sinian-Early Permain dormant, the Late Permain-Early Tertiary embryonic and the Late Tertiary-Quaternary forming stage, and the kinematic-dynamic characteristics of orogenesis-basinogenesis at each stage were discussed. 展开更多
关键词 Orogenesis-basinogenesis kinematic-dynamic characteristics Lushan Mountain-Poyang Lake
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广州市成人血脂异常与全血中砷铅等7种金属的初步关联性研究
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作者 周金华 李琴 +3 位作者 黎晓彤 黄仁德 毕华 郭重山 《环境与健康杂志》 CAS 2024年第1期44-47,共4页
目的探讨广州市成人血脂异常与全血中砷(As)和铅(Pb)等7种金属的关联性。方法采取社区招纳方法,选取广州市的成人245人,对其进行健康体检、血液检查和问卷调查。检测全血中铬(Cr)、钴(Co)、砷(As)、钼(Mo)、镉(Cd)、锑(Sb)和铅(Pb)7种... 目的探讨广州市成人血脂异常与全血中砷(As)和铅(Pb)等7种金属的关联性。方法采取社区招纳方法,选取广州市的成人245人,对其进行健康体检、血液检查和问卷调查。检测全血中铬(Cr)、钴(Co)、砷(As)、钼(Mo)、镉(Cd)、锑(Sb)和铅(Pb)7种金属水平。结果血脂异常组As和Pb的中位数分别为2.39μg/L和27.48μg/L,均高于血脂正常组的1.90μg/L和20.85μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。其他5种金属在两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。二分类logistics回归分析结果显示,未婚(OR=0.295,95%CI:0.095~0.920,P=0.035)可减少血脂异常的发生风险;年龄(OR=1.036,95%CI:1.013~1.059,P=0.002)、腰围(OR=1.025,95%CI:1.004~1.047,P=0.020)、As(OR=1.350,95%CI:1.068~1.705,P=0.012)和Pb(OR=1.031,95%CI:1.004~1.057,P=0.021)升高可增加血脂异常的发生风险。结论成人的血脂代谢异常与全血中的砷和铅浓度有关,提示需要关注成人体内的重金属水平。 展开更多
关键词 金属 血脂异常
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rAAV2-ND4注射液基因转录水平的生物学活性检测方法
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作者 秦玺 陈龙 +9 位作者 史新昌 杨靖清 潘燕群 于雷 毕华 裴德宁 安怡方 潘悦 李响 周勇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1820-1825,共6页
目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),以每孔360μL)感染HEK293T细胞(3.0×105cells·mL^(-1),每孔0.8 mL,37℃5%二氧化碳培养预培养24 h)后... 目的:建立并验证检测rAAV2-ND4注射液转录水平的生物学活性检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),以每孔360μL)感染HEK293T细胞(3.0×105cells·mL^(-1),每孔0.8 mL,37℃5%二氧化碳培养预培养24 h)后2 h,加适量培养基继续培养24 h,收集细胞;按细胞总RNA提取试剂盒操作细则提取细胞总RNA(裂解细胞、吸附、去蛋白、去杂质和洗脱);将提取后的细胞总RNA为模板,用qPCR方法分别检测ND4的mRNA Ct值和β-actin内参基因mRNA Ct值。通过同时设立rAAV2-ND4参比品进行平行检测,通过β-actin内参基因和rAAV2-ND4参比品双重校正检测rAAV2-ND4相对于其参比品的生物学活性。对所建立方法进行方法学验证,包括准确性、精密度、线性和专属性等。另考察了3批制品的批间一致性。结果:qPCR检测ND4 mRNA转录量和参比品校正的方法检测结果提示ND4 mRNA与rAAV2-ND4感染细胞滴度之间存在量效关系。经方法学验证,方法的检测值与预期值之间偏离率在100%~130%;不同时间不同人员的9次结果RSD为13.75%;rAAV2-ND4滴度在1.0×10^(10)~5.0×10^(10)vg·mL^(-1)范围内方法线性r>0.97;方法具有很好的专属性。3批rAAV-ND4检测值的RSD为9.3%。结论:初步建立了rAAV2-ND4转录水平的生物学活性检测方法。 展开更多
关键词 生物学活性 实时定量PCR 内标法 感染 检测 基因治疗
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人干扰素α2b理化对照品质控方法与质量标准研究
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作者 裴德宁 陶磊 +5 位作者 韩春梅 范文红 杨靖清 秦玺 毕华 周勇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1189-1194,共6页
目的:建立人干扰素α2b(hIFN α2b)理化对照品的质控方法与质量标准。方法:使用2020年版《中华人民共和国药典》报告基因法测定hIFN α2b理化对照品的生物学活性、福林酚法测定蛋白质含量、电泳法和高效液相色谱法测定纯度、等电聚焦电... 目的:建立人干扰素α2b(hIFN α2b)理化对照品的质控方法与质量标准。方法:使用2020年版《中华人民共和国药典》报告基因法测定hIFN α2b理化对照品的生物学活性、福林酚法测定蛋白质含量、电泳法和高效液相色谱法测定纯度、等电聚焦电泳法测定等电点、Edman降解法测定N端氨基酸序列;液质联用法测定相对分子质量,使用C4(50 mm×2.1 mm, 3.5μm)色谱柱和QTof质谱仪;液质联用法测定质量肽图和二硫键,使用C18(100 mm×2.1 mm, 1.7μm)色谱柱和QTof质谱仪;建立hIFN α2b理化对照品的质量标准;对7批由不同企业提供的理化对照品进行检测。结果:建立了hIFN α2b理化对照品的质量标准,7批hIFN α2b理化对照品的比活性为1.2×10^(8)~2.8×10^(8)IU·mg^(-1),电泳纯度均>96.0%,高效液相色谱纯度均>95.0%,等电点主区带为5.2~6.6,N端氨基酸序列为(M)CDLPQTHSLGSRRT,相对分子质量、质量肽图和二硫键测定结果均与理论值相符。结论:建立的质控方法与质量标准可以比较全面地评价hIFN α2b理化对照品的质量,各企业的理化对照品均符合质量标准的要求。 展开更多
关键词 人干扰素α2b 理化对照品 质量标准 质控方法 蛋白结构
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qPCR法用于rAAV2-ND4注射液中可复制型AAV2(rcAAV2)的检测
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作者 秦玺 陈龙 +9 位作者 杨靖清 李响 周峰 史新昌 毕华 王光裕 朱留强 安怡芳 裴德宁 周勇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2010-2016,共7页
目的:建立并验证rAAV2-ND4中可复制型AAV2(rcAAV2)的qPCR检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),每孔接种100μL)和wtAd5辅毒(6.0×10^(9)TCID50·mL^(-1),每孔接种10μL)同时感染HEK293细胞(6.0×... 目的:建立并验证rAAV2-ND4中可复制型AAV2(rcAAV2)的qPCR检测方法。方法:rAAV2-ND4样品(3.0×10^(10)vg·mL^(-1),每孔接种100μL)和wtAd5辅毒(6.0×10^(9)TCID50·mL^(-1),每孔接种10μL)同时感染HEK293细胞(6.0×105cells·mL^(-1),每孔1 mL接种至12孔板中,37℃和5%二氧化碳条件培养24 h),经过2 h感染后,更换为细胞培养基(含10%FBS的DMEM,每孔加入1 mL),继续在37℃和5%二氧化碳条件培养48 h。收集细胞并用细胞裂解液处理,细胞裂解物再经上述步骤进行1次感染和培养。收集第二次培养的细胞并加入裂解液56℃孵育30 min,之后90℃孵育10 min。处理后的细胞裂解物用qPCR方法进行rcAAV2检测,qPCR反应体系为2×T5 Fast qPCR Mix(Probe) 10μL、引物混合液0.1μL、探针1μL、50×ROX Reference Dye I 0.4μL、EASY Dilution 3.5μL、处理后的细胞裂解物5μL,qPCR扩增程序:95℃,10 min;[95℃,15 s;60℃,1 min]40个循环。对方法进行灵敏度、准确度、精密度和专属性验证。结果:所建立的检测rcAAV2的方法灵敏度可达到每10^(8)vg<1 TCID50 rcAAV;qPCR方法回收率在77.6%~91.2%;每人3次(2人)实验均得到相同结果,方法专属性良好。结论:所建立的2轮感染扩增后qPCR检测的方法可应用于rAAV2-ND4样品中rcAAV2的检测。 展开更多
关键词 可复制型AAV 实时定量PCR 检测 方法 基因治疗
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重组腺相关病毒(rAAV)基因治疗制品质控检验技术重点考量
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作者 秦玺 于雷 +4 位作者 陶磊 毕华 王光裕 史新昌 周勇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1811-1819,共9页
近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检... 近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。 展开更多
关键词 基因治疗制品 重组腺相关病毒 检验检测 通用技术要求
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TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及验证
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作者 毕华 卢宁 +7 位作者 牛林茹 王玉哲 朱香 李文慧 杨凌 赵君 周勇 梁雅丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期187-192,共6页
目的建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法采用正交试验确定捕获抗体、检测抗体最佳浓度,建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并对方法进行线性范围、特异性、检测限、定量限、准确性、重复性验证;采用建立的方... 目的建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证。方法采用正交试验确定捕获抗体、检测抗体最佳浓度,建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法,并对方法进行线性范围、特异性、检测限、定量限、准确性、重复性验证;采用建立的方法检测多种生物制品,验证方法的适用性。结果选定捕获抗体用3μg/mL浓度包板,检测抗体稀释15000倍建立TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法。该方法线性范围为0.41~40.00 ng/mL,检测限为0.258 ng/mL,定量限为0.5 ng/mL;检测标准品、样品时,测量偏差小于5%;重复性验证CV<5%;不同类型样品加标回收率在80%~120%之间。结论建立的TrypLE双抗体夹心定量ELISA检测方法特异性、准确性、重复性良好,可准确、有效、快捷地检测各种类型生物制品中TrypLE的残留量。 展开更多
关键词 双抗体夹心ELISA TrypLE 定量检测
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rAAV5基因组滴度测定的数字PCR方法研究
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作者 郑红梅 秦玺 +7 位作者 李永红 于雷 毕华 饶春明 朱留强 杨靖清 史新昌 周勇 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1826-1832,共7页
目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理r AAV5样品,用微滴数字PCR... 目的:建立并验证重组5型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus type 5,rAAV5)基因组滴度测定的数字PCR方法,并对微滴数字PCR方法和芯片数字PCR方法进行比较。方法:分别用不同浓度的SDS和EDTA前处理r AAV5样品,用微滴数字PCR测其基因组滴度,对病毒样品前处理试剂进行优化;在其他试验条件不变的情况下,分别设置微滴数字PCR的退火温度为60、58、54、52℃,以WPRE引物扩增,比较扩增效果,对数字PCR的退火温度进行优化;分别采用微滴数字PCR和芯片数字PCR测定rAAV5的基因组滴度并比较。结果:终浓度为1%SDS和62.5 mmol·L^(-1)EDTA按1∶1(v/v)的比例混合后前处理rAAV5,测定的基因组拷贝数较高,前处理液裂解效果较好;当退火温度为54℃时,微滴数字PCR中阳性微滴和阴性微滴分离效果最好,扩增特异性最强;2种测定结果的试验室内精密度和回收率接近,测定同一裂解样本的结果较为接近(在1个数量级)。结论:初步建立了数字PCR方法并验证,为后续的进一步验证奠定基础。 展开更多
关键词 重组5型腺相关病毒 基因组滴度 微滴数字PCR 芯片数字PCR 基因治疗
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2008—2015年广州市市政水源水质状况分析 被引量:7
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作者 黄仁德 李琴 +4 位作者 钟嶷 王德东 毕华 黎晓彤 孙丽丽 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期330-333,共4页
目的了解"西江引水工程"对广州市市政水源水水质的影响。方法收集和整理分析2008—2015年广州市市政水厂水源水监测结果。结果 2008—2015年市政水源水项次合格率呈上升趋势,不合格项目数减少,耗氧量、氨氮浓度降低,2015年项... 目的了解"西江引水工程"对广州市市政水源水水质的影响。方法收集和整理分析2008—2015年广州市市政水厂水源水监测结果。结果 2008—2015年市政水源水项次合格率呈上升趋势,不合格项目数减少,耗氧量、氨氮浓度降低,2015年项次合格率达97.1%(761/784),主要不合格项目为耐热大肠菌群和铁。NZ水厂的水源水项次合格率最高为95.4%(855/896),SX水厂的水源水项次合格率最低为88.7%(298/336)。不同水源水项次合格率高低依次为西江>北江>东江>其它;西江水源水的项次合格率最高为96.1%(2 153/2 240)。结论 "西江引水工程"极大地提高了广州市市政水源水的水质和城市供水保障能力。 展开更多
关键词 西江引水工程 水源水 卫生调查
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