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家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能
1
作者
张轶岭
李俊昊
+2 位作者
宁嘉兴
bismark kyei
沈中元
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期727-734,共8页
【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能,为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre 3,构建原核表达载体pET28a-NbTre 3;经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia...
【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能,为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre 3,构建原核表达载体pET28a-NbTre 3;经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia coli中表达重组蛋白NbTre3,Western blot检测目的蛋白;Ni柱亲和层析法对重组蛋白NbTre3进行纯化,用获得的NbTre3免疫新西兰兔制备多克隆抗体;利用间接免疫荧光技术对成熟家蚕微孢子虫中的NbTre3进行定位;qRT-PCR检测家蚕微孢子虫感染家蚕5龄起蚕后不同时间中肠中NbTre 3的转录水平;通过分别注射siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3进行RNAi,qRT-PCR检测RNAi后不同时间感染家蚕微孢子虫的家蚕5龄起蚕中肠中NbTre 3和16S rRNA的转录水平。【结果】成功纯化并获得重组目的蛋白NbTre3,大小约为34 kD。免疫新西兰兔后,收集血清,纯化获得NbTre3多克隆抗体,经Western blot鉴定正确。间接免疫荧光结果显示NbTre3主要分布在成熟家蚕微孢子虫孢原质中。qRT-PCR结果表明,家蚕微孢子虫感染后6 h时家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3的表达量最高;siRNA抑制NbTre 3的表达后,家蚕微孢子虫16S rRNA的转录水平没有明显的变化。【结论】结果提示NbTre3可能在家蚕微孢子虫感染初期的发芽过程中发挥重要的作用。
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关键词
家蚕微孢子虫
海藻糖酶
原核表达
RNA干扰
QRT-PCR
下载PDF
职称材料
家蚕微孢子虫己糖激酶基因的克隆及序列结构分析和原核表达
被引量:
1
2
作者
陈红丽
彭祥然
+6 位作者
李孝良
bismark kyei
尚瑞沙
齐静茹
张轶岭
徐莉
沈中元
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期70-76,共7页
己糖激酶(hexokinase,HXK)是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝(NBO_1320g0001,NBO_27g0008)。根...
己糖激酶(hexokinase,HXK)是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝(NBO_1320g0001,NBO_27g0008)。根据其中的一个基因拷贝(NBO_27g0008)序列设计特异性引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板成功克隆了该基因,命名为Nb HXK-1。该基因大小为894 bp,包含完整的ORF,编码297个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为34.241 k D,等电点(p I)为5.26,蛋白质的氨基酸序列有31个磷酸化位点和4个潜在的N-糖基化位点,无跨膜结构域,有信号肽,二级结构主要由α螺旋(54.55%)、延伸片段(17.80%)和无规则卷曲(27.61%)组成。系统进化分析显示Nb HXK-1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)己糖激酶(Nc HXK)氨基酸序列的亲缘关系较近。将Nb HXK-1基因插入原核表达载体p ET-28a(+)并转化BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达后经蛋白质串联质谱鉴定和Western blot分析显示,获得了与预期大小一致的约35 k D的重组Nb HXK-1蛋白,为进一步阐明Nb HXK-1的生物学功能奠定了基础。
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关键词
家蚕微孢子虫
己糖激酶
基因克隆
序列特征
原核表达
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职称材料
题名
家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能
1
作者
张轶岭
李俊昊
宁嘉兴
bismark kyei
沈中元
机构
江苏科技大学生物技术学院
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期727-734,共8页
基金
江苏省自然科学基金项目(BK20160364)
现代农业产业技术体系建设专项(CARS-18)。
文摘
【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能,为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre 3,构建原核表达载体pET28a-NbTre 3;经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia coli中表达重组蛋白NbTre3,Western blot检测目的蛋白;Ni柱亲和层析法对重组蛋白NbTre3进行纯化,用获得的NbTre3免疫新西兰兔制备多克隆抗体;利用间接免疫荧光技术对成熟家蚕微孢子虫中的NbTre3进行定位;qRT-PCR检测家蚕微孢子虫感染家蚕5龄起蚕后不同时间中肠中NbTre 3的转录水平;通过分别注射siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3进行RNAi,qRT-PCR检测RNAi后不同时间感染家蚕微孢子虫的家蚕5龄起蚕中肠中NbTre 3和16S rRNA的转录水平。【结果】成功纯化并获得重组目的蛋白NbTre3,大小约为34 kD。免疫新西兰兔后,收集血清,纯化获得NbTre3多克隆抗体,经Western blot鉴定正确。间接免疫荧光结果显示NbTre3主要分布在成熟家蚕微孢子虫孢原质中。qRT-PCR结果表明,家蚕微孢子虫感染后6 h时家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3的表达量最高;siRNA抑制NbTre 3的表达后,家蚕微孢子虫16S rRNA的转录水平没有明显的变化。【结论】结果提示NbTre3可能在家蚕微孢子虫感染初期的发芽过程中发挥重要的作用。
关键词
家蚕微孢子虫
海藻糖酶
原核表达
RNA干扰
QRT-PCR
Keywords
Nosema bombycis
trehalase
prokaryotic expression
RNA interference
qRT-PCR
分类号
Q965.8 [生物学—昆虫学]
下载PDF
职称材料
题名
家蚕微孢子虫己糖激酶基因的克隆及序列结构分析和原核表达
被引量:
1
2
作者
陈红丽
彭祥然
李孝良
bismark kyei
尚瑞沙
齐静茹
张轶岭
徐莉
沈中元
机构
江苏科技大学生物技术学院
中国农业科学院蚕业研究所
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期70-76,共7页
基金
现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-18)
文摘
己糖激酶(hexokinase,HXK)是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝(NBO_1320g0001,NBO_27g0008)。根据其中的一个基因拷贝(NBO_27g0008)序列设计特异性引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板成功克隆了该基因,命名为Nb HXK-1。该基因大小为894 bp,包含完整的ORF,编码297个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为34.241 k D,等电点(p I)为5.26,蛋白质的氨基酸序列有31个磷酸化位点和4个潜在的N-糖基化位点,无跨膜结构域,有信号肽,二级结构主要由α螺旋(54.55%)、延伸片段(17.80%)和无规则卷曲(27.61%)组成。系统进化分析显示Nb HXK-1与东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)己糖激酶(Nc HXK)氨基酸序列的亲缘关系较近。将Nb HXK-1基因插入原核表达载体p ET-28a(+)并转化BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达后经蛋白质串联质谱鉴定和Western blot分析显示,获得了与预期大小一致的约35 k D的重组Nb HXK-1蛋白,为进一步阐明Nb HXK-1的生物学功能奠定了基础。
关键词
家蚕微孢子虫
己糖激酶
基因克隆
序列特征
原核表达
Keywords
Nosema bombycis
Hexokinase
Gene cloning
Sequence features
Prokaryotic expression
分类号
Q959.115.92 [生物学—动物学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能
张轶岭
李俊昊
宁嘉兴
bismark kyei
沈中元
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
下载PDF
职称材料
2
家蚕微孢子虫己糖激酶基因的克隆及序列结构分析和原核表达
陈红丽
彭祥然
李孝良
bismark kyei
尚瑞沙
齐静茹
张轶岭
徐莉
沈中元
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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职称材料
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