花青素抗氧化损伤及细胞凋亡的作用研究

目的:探索花青素对H2O2引起的Huh7细胞氧化应激、细胞凋亡的作用及其机制。方法:对H2O2和花青素干预培养的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量,免疫印迹测定Akt、磷酸化激活的c-Jun蛋白水平。结果:H2O20.8mmol/L孵育1小时可显著诱导Huh7细胞损伤,细胞活力下降到(49.27±3.2)%,ROS生成量是未处理细胞的3.56倍。细胞经花青素50μmol/L与H2O2共孵育后,细胞存活率提高到(81.2±2.34)%;花青素能显著抑制H2O2引起的Huh7细胞ROS生成,ROS生成下降74%(P<0.01)。花青素抑制H2O2引起Huh7细胞死亡和ROS生成的效应随剂量增加而加强。花青素抑制H2O2激发Huh7细胞磷酸化c-Jun表达,提高细胞Akt水平。结论:花青素抑制H2O2引起的Huh7细胞氧化应激损伤所导致的细胞死亡,其作用机制在于减少细胞内活性氧生成,抑制H2O2激活磷酸化c-Jun,提高细胞Akt水平。

表儿茶素对H_2O_2引起的Huh7细胞氧化应激的作用

目的:探索表儿茶素对H2O2引起的Huh7细胞氧化应激的作用及其机制。方法:对H2O2和表儿茶素干预培养的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞存活率,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量,免疫印迹测定丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt),增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA),磷酸化应激激活的c-Jun蛋白水平。结果:0.8mmol/LH2O2孵育1h可诱导显著Huh7细胞损伤,细胞存活率下降到(40±3.2)%,ROS生成量比未处理细胞多5.4倍。细胞经150μmol/L表儿茶素与H2O2共孵育后,细胞存活率提高到(94.5±9.84)%;表儿茶素能显著抑制H2O2引起的Huh7细胞ROS生成,ROS生成下降60%(P<0.01)。表儿茶素抑制H2O2引起Huh7细胞死亡和ROS生成随剂量增加抑制作用加强。表儿茶素抑制H2O2激发Huh7细胞磷酸化c-Jun表达,提高细胞Akt、PCNA水平。结论:表儿茶素抑制H2O2引起的Huh7细胞氧化应激损伤而导致的细胞死亡,其作用机制是通过减少细胞内活性氧生成,抑制H2O2激活磷酸化c-Jun,提高细胞Akt,PCNA水平。

冰冻葡萄粉及其多酚化合物抗凋亡的分子生物学机制研究

目的:探索冰冻葡萄粉抗胆酸诱导细胞凋亡的机制并调查冰冻葡萄粉中多酚化合物在此过程中的作用。方法:应用牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导Huh7细胞凋亡,同时用冰冻葡萄粉及其多酚化合物如表儿茶素、花青素、槲皮素、白藜芦醇进行干预,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量。免疫印迹法分析信号传导途径。结果:冰冻葡萄粉能显著降低TDCA诱导Huh7细胞产生的细胞内活性氧,凋亡蛋白Bax表达,并减少细胞色素C从线粒体内释放,抑制激活caspase-9,caspase-7和caspase-3。在300μg/mL浓度的冰冻葡萄粉中,4种多酚化合物只有槲皮素显示微弱保护细胞防止线粒体介导的凋亡。增加多酚化合物的剂量才能出现明显的细胞保护效应。4种多酚化合物按300μg/mL的冰冻葡萄粉中各自的含量组合能够一定程度重现冰冻葡萄粉的抗凋亡效应。结论:冰冻葡萄粉降低氧化应激和线粒体介导的凋亡,其作用机制是防止线粒体损伤,抑制TDCA诱导的活性氧生成和激活的凋亡信号传导。推测表儿茶素、花青素、槲皮素是冰冻葡萄粉抗氧化、抗线粒体途径凋亡的重要活性成分。