DOTAP脂质体介导VEGF基因转染人脂肪干细胞及目的基因的表达

目的：研究脂质体介导的血管内皮生长因子（VEGF）基因转染人脂肪干细胞（hASCs）及VEGF的表达。方法：胶原酶消化吸脂术脂肪,收获细胞沉淀,培养至第4代时利用流式细胞术检测细胞表型,并诱导其成脂成骨分化,鉴定为hASCs。转染组利用DOTAP脂质体将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,对照组为脂质体空载。免疫荧光染色检测hASCs内VEGF的表达,ELISA检测上清液中VEGF浓度的变化。结果：1ml吸脂术脂肪可得到（4.38±0.21）×10^5个细胞,第4代时hASCs高表达CD90（81.49%）,低表达CD19（6.37%）、CD31（14.91%）、CD34（17.56%）和CD45（15.39%）,诱导分化后油红O和茜素红染色均呈阳性。分光光度计显示质粒DNA浓度为595ng/μl。转染组hASCs表达GFP和VEGF,转染效率为（43.69±18.53）%;对照组不表达GFP,但表达较低的VEGF。转染组VEGF的光密度是对照组的2.13倍,其上清液中的VEGF浓度随时间显著上升,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：DOTAP脂质体可成功将pIRES2-EGFP-VEGF质粒转入hASCs,转染后的VEGF表达和分泌水平显著提高。