用PCR区分两种密切相关的真菌传棒状病毒

根据已发表的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)的序列合成了寡聚核苷酸引物,用于反转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)以区分甜菜土传花叶病毒(BSBMV)和BNYVV。与BNYVV RNA1的3’-末端互补的引物在从感染BNYVV的植物抽提液中用PCR扩增一个预计大小约1056bp的产物时有效。同一引物也能指导从感染BSBMV的植株抽提液中扩增一种大约1000bp的PCR产物。如果将感染BSBMV和感染BNYVV的植株抽提液混合,该引物只能起始BNYVV的扩增。BSBMV的产物和BNYVV的产物除了存在细微的大小差异之外,还可以通过用Tha Ⅰ消化来区别,Tha Ⅰ只裂解BSBMV的产物,而不能裂解BNYVV的产物。已测定了BSBMV RT—PCR的部分序列,合成了对BSBMV专化的引物。该引物只能从感染BSBMV的植株抽提液中引导扩增一种预计大小约691.bp的PCR产物。从含BSBMV乖IBNYVV的抽提液中只能产生一种期望大小的BSBMV的PCR产物。由对BSBMV专化的引物得到的。BSBMV的PCR产物可以被Tka I消化。用BSBMV引物从几种地理起源和症状表型不同的BSBMV分离物的抽提液中扩增到的PCR产物大小相同。