密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析

[目的]试验旨在优化兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)疫苗的制备策略,探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性,为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。[方法]根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因,将双VP60基因插入真核载体pFastBacTMDual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞,通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证;将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗,通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。[结果]试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示,重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示,感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光,表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示,VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右,呈现球形结构,表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性,最小免疫剂量为0.5 mL/只,免疫持续期可达210 d以上。[结论]试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白,该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。

改善肿瘤缺氧耐药的血红蛋白-紫杉醇脂质体的制备及体外评价

目的制备改善肿瘤缺氧耐药的血红蛋白-紫杉醇脂质体。方法采用薄膜法制备血红蛋白-紫杉醇脂质体,通过纳米粒度仪考察其粒径、Zeta电位、多分散系数,通过高效液相色谱仪检测其包封率,并通过体外细胞实验评价其与肿瘤细胞的相互作用。结果血红蛋白-紫杉醇脂质体的最优制备条件为:磷脂总量为36 mM,DPPC∶DOPE∶胆固醇摩尔比为7∶2∶1,紫杉醇用量为3 mg,水化介质为3 mg·mL^(-1)Hb-PBS溶液,水化温度为室温,水化时间为0.5 h;平均粒径为(189.17±8.22)nm,多分散系数为0.14±0.023,紫杉醇包封率为(58.27±2.55)%,血红蛋白含量为(0.63±0.05)mg·mL^(-1)。体外细胞实验中,血红蛋白-紫杉醇脂质体对肿瘤细胞的杀伤作用约为紫杉醇脂质体的1.5倍、被肿瘤细胞摄取量约为紫杉醇脂质体的1.2倍及ROS生成量约为紫杉醇脂质体的1.8倍。结论制备了血红蛋白-紫杉醇脂质体,通过细胞实验证明其能通过改善缺氧、增加ROS产生促进肿瘤细胞凋亡,有望为肿瘤缺氧导致的耐药抵抗提供安全有效的新方法。

冠状动脉旁路移植术后低心排血量综合征的危险因素分析及预测模型构建

目的探讨冠状动脉旁路移植术(CABG)后发生低心排血量综合征(LCOS)的危险因素并构建预测LCOS发生风险的列线图模型。方法选择2019年10月至2022年5月于河南省人民医院心脏中心行CABG手术的231例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAHD)患者为研究对象,将患者按照7:3的比例随机分为训练集(n=162)和验证集(n=69)。比较训练集与验证集患者的各项参数,以明确训练集与验证集患者的可比性。根据CABG术后是否发生LCOS,将训练集患者分为LCOS组(n=33例)和非LCOS组(n=129例),并对训练集中的样本参数进行单因素和多因素logistic回归分析,得出CABG术后发生LCOS的独立危险因素,构建CABG术后LCOS发生风险的列线图预测模型,使用受试者操作特征曲线、校准曲线和决策曲线分析评估模型的区分度、校准度和临床适用性。结果训练集和验证集患者的LCOS发生率分别为20.37%(33/162)和18.84%(13/69)。训练集和验证集患者的各项参数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。训练集中非LCOS组与LCOS组患者的年龄、心率、血尿素氮、血清肌酐、估测肾小球滤过率(eGFR)、血清N端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、血清肌钙蛋白T、左心室射血分数(LVEF)、二尖瓣反流面积、合并心肌梗死史、纽约心脏病学会分级Ⅲ~Ⅳ级占比、体外循环手术占比、手术时间、术中出血量以及术后血流动力学指标中心静脉压、肺动脉舒张压、肺动脉搏动指数(PAPI)比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,术前LVEF降低[比值比(OR)=0.891,95%置信区间(CI):0.832~0.954,P=0.001]、术前eGFR降低(OR=0.963,95%CI:0.934~0.994,P=0.018)、术前NT-proBNP升高(OR=1.001,95%CI:1.000~1.001,P=0.006)、手术时间增加(OR=1.013,95%CI:1.003~1.022,P=0.008)及术后PAPI降低(OR=0.094,95%CI:0.028~0.319,P=0.000)是CABG术后发生LCOS的独立危险因素。基于上述指标构建列线图模型。列线图模型在训练集中预测LCOS发生风险的曲线下曲积为0.931(95%CI:0.890~0.972),灵敏度为82.20%,特异度为90.90%;在验证集中预测LCOS发生风险的曲线下曲积为0.907(95%CI:0.813~1.000),灵敏度为96.40%,特异度为84.60%;说明该模型具有很高的区分度;校准曲线显示,在训练集和验证集中列线图模型的预测概率与实际发生概率具备良好的一致性(平均绝对误差分别为0.038、0.026);Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示,模型预测LCOS发生概率和实际发生概率的预测偏差均无统计学意义(χ^(2)=6.381、6.907,P>0.05),表明该模型具有良好的校准度。结论术前LVEF降低、术前eGFR降低、术前NT-proBNP升高、手术时间增加和术后PAPI降低是CABG术后CAHD患者发生LCOS的独立危险因素,基于以上5个因素建立的预测LCOS发生风险的列线图模型具有较高的区分度、良好的校准度和较好的临床适应性,可有效预测CABG术后LCOS的发生。

新兴交叉学科农业科研院所青年人才队伍建设的实践与思考——以江苏省农业科学院休闲农业研究所为例

学科交叉融合发展是当前科技发展的重要特征,文章以江苏省农业科学院休闲农业研究所为研究对象,重点阐述研究所成立5年来,在人才队伍建设过程中存在的问题和实施人才培养计划取得的实效,并从政治引领、因才施策、内培外引和文化建设等方面提出了加强新兴交叉学科青年人才队伍建设的建议,以期为新兴交叉学科农业科研院所的发展提供参考和借鉴。

猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。

基于扩展计划行为理论的大学毕业生蛰居意向影响因素研究

基于计划行为理论和社会认知职业理论,引入自尊和择业效能感,构建了扩展的大学生蛰居意向的TPB模型。对521名蛰居大学毕业生进行问卷调查和数据分析后发现,自尊和择业效能感能够显著增加态度、主观规范、知觉行为控制对于大学生蛰居意向的预测效应;在这些变量中,大学生对蛰居的主观规范和态度是预测蛰居意愿的主要变量。此外,自尊对男大学生蛰居意愿的影响显著高于女大学生。扩展的TPB模型能够揭示大学生蛰居的作用机制,为促进蛰居大学生就业提供了思路。

山西金元亭榭建筑补间铺作配置探讨

山西金元亭榭补间配置多跳出李诫《营造法式》的制式框架,出巧思奇招,表现出鲜活的生命力和创造力。基于园林建筑设计的视角,对山西17例金元亭榭从补间铺作与亭榭立面造型,补间铺作与亭榭屋架结构,补间铺作的“解构”与“重构”三个方面进行了研究,总结了山西金元亭榭补间铺作的设计思路,以期为公元10至14世纪亭榭建筑设计寻求突破。

高速列车接地系统对车体电流及过电压分布的影响分析

高速列车独特的轮轨耦合移动接地系统在其行车安全方面起到关键作用,不合理的接地设置无法有效降低车体暂态过电压幅值,会造成设备绝缘击穿,同时,窜入车体的环流会恶化车载设备、轴承的电磁环境,车载设备与人员安全也需要得到充分保障。因此,对高速列车的移动接地系统性能研究,需要兼顾接地电流与车体过电压两项重要指标进行优化改进,服务于提升动车组长期的服役性能。以吸上线区间和电分相区间的“车-所-网”供电和回流系统为例,对动车组车载设备进行参数测量,对“车-所-网”供电系统进行等值计算。基于车载关键设备的实测阻抗参数,构建“车-轨-网”牵引供电系统的等效电路模型,研究车载牵引供电系统高压侧操作过电压特性以及车体过电压的传播规律,解析列车接地系统对车轨环流及车体过电压分布的影响机制,并结合接地回流及车体过电压两方面指标,对比不同接地阻抗参数及布局方式对车体过电压与车轨环流的影响规律。最终,获得一套基于调整电阻、电感以及接地方式的平衡了电压与电流的优化方案。

教育家精神时代内涵与职业教育的弘扬路径

在建设教育强国的新征程上,如何把教育家精神融入一线教师的日常教学中,建立起教育家精神融入教师队伍建设的体制机制,是当前建设高素质、专业化、创新型教师队伍的重中之重。从理想信念、道德情操、育人智慧、躬耕态度、仁爱之心、弘道追求等角度深入理解中国特有的教育家精神内涵,结合职业教育特点,职业学校教师本着“躬耕教坛,强国有我”的使命感和责任感,可从政治品质、职业准则、职业素养、职业发展、职业境界、职业理想等方面弘扬、践行好教育家精神。

基于计算机纹理分析和支持向量机的古琴面板品质预测

本研究应用支持向量机算法,结合古琴共鸣板木材表面纹理特征,建立古琴面板质量预测模型。共收集古琴面板样品77张,采用数码相机拍摄共鸣板图像,经图像处理去除背景。提取包括连续纹理数、断裂纹理数、最长纹理值等7项纹理特征定量指标,以其中21张样品作为训练集,余下56张作为测试集。利用支持向量机结合专家打分法对训练集特征进行模型训练,并对测试集进行等级预测。结果显示,训练集和测试集的分类准确率分别达到95.23%和96.42%。两组预测等级与专家评分实际等级之间误差较小。研究表明,支持向量机算法可对古琴面板木材纹理特征进行有效分类,实现面板质量的准确预测,为乐器面板的选材提供了参考。

拱梁组合桥梁芯形区域施工受力特性研究

以拱梁组合桥梁芯形区域为研究对象,开展了该区域施工过程中的受力分析及圆盘式盘扣支架在竖向和水平不平衡荷载作用下的强度和稳定性分析,并针对芯形区域结构受力存在开裂的安全隐患这一问题,提出了增设临时拉索与圆盘式盘扣支架进行芯形区域施工的组合方案。研究结果表明:1)增加临时拉索能有效减小芯形区域上翼缘拉应力,改善上翼缘受力状态防止区域下部开裂;2)圆盘式盘扣支架与临时拉索组合施工,其中临时拉索可调节盘扣支架支撑下的区域施工应力及变形分布,其影响效果显著,且组合方案施工下的稳定性、强度及变形均在合理范围内。

指脉氧监测下的Allen试验与经典Allen试验的一致性研究

目的:探讨指脉氧监测下的Allen试验与经典Allen试验结果的一致性。方法:选取2018年3月—2019年10月于我院心脏内科住院的病人5148例,先后采用指脉氧监测下的Allen试验与经典Allen试验对病人双手进行评估。结果:与经典Allen试验相比,双侧指脉氧监测下的Allen试验用时较短(P<0.001),且阴性率更高(右手:0.68%与0.64%,P<0.001;左手:0.51%与0.45%,P<0.001)。两试验的结果存在一致性,左手5148个点中有21个点(0.41%)位于一致性界限范围以外,右手5148个点中有23个点(0.45%)位于一致性界限范围以外。对试验耗时进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,二者判读时间节点相似(右手:曲线下面积为0.781,截断点10 s;左手:曲线下面积0.833,截断点9.5 s或10.5 s)。结论:指脉氧监测下的Allen试验与经典Allen试验的判读时间节点及结果均存在一致性,但前者的判读更为直观迅速,可作为一种无创、易得、经济有效的改良方法。

推动职业教育产教融合与高质量“双师型”职教师资队伍建设

随着现代职业教育体系建设向纵深推进,我国职业教育产教融合不断转型升级。在系统分析职业教育产教融合历程和目前所处的新阶段新格局,对职业教育双师型教师队伍提出高质量建设的新要求,提出了高质量“双师型”职教师资队伍建设的五项重要举措。即加快落实“双师型”教师认定标准、实施职业学校教师学历提升计划、推进职教师资本硕一体化培养、加强“双师型”教师培训体系建设、加强兼职教师队伍建设。

中药诃子、余甘子对奶牛乳房炎病原菌体外抑制作用的研究

将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6h,蒸干水分,得到深棕色的物质,收率分别为10%和10.5%。将其用水稀释,得到本次参试的药物贮存液,采用试管法测定它们以及1:1和2:1混合物对奶牛乳房炎病原菌(金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞杆菌、产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)以及这四种等量混合菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子、余甘子对这四种病菌均有较强的抑菌作用。1:1混合时,两种药物对于金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制有拮抗作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌的等量复混菌无相互作用。2:1混合时,两种药物对于假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制无相互作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌复混菌的抑制有相加作用。

诃子等中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌体外抑制作用研究

猪呼吸系统疾病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来治疗病猪,但易产生副作用。筛选适宜中药来治疗猪呼吸系统疾病是养猪业发展的迫切需求。本研究将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂,收率分别为10.0%、10.5%、11.0%和10.0%。将诃子、余甘子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80溶液稀释,得到药物储存液,采用试管法测定诃子及其与其他中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌(A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌及副猪嗜血杆菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子对猪呼吸系统疾病病原菌有较强的抑菌作用,余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与诃子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,大多数能协同诃子抑制猪呼吸系统疾病常见病原菌,其作用强弱顺序为诃子/余甘子/多刺绿绒蒿(3∶1∶1)>诃子/余甘子/螃蟹甲(3∶1∶1)>诃子/螃蟹甲(2∶1)>诃子>诃子/多刺绿绒蒿(2∶1)>诃子/余甘子(1∶1)。这些药物组合可为猪呼吸系统疾病防治药物的研发提供参考。

基于共享理念下的省级农业科研院所实验室一体化建设实践与思考——以江苏省农业科学院休闲农业研究所为例

共享实验平台建设是提高省级农业科研院所科研水平和服务社会能力的重要基础。文章在对省级农业科研院所共享实验平台建设情况开展调研的基础上,分析了共享实验室建设的必要性和制约因素,并以江苏省农业科学院休闲农业研究所为例,重点阐述了其在共享实验平台建设方面的具体实践以及存在的问题,并从加强人才队伍建设、加快信息化建设和重视安全管理等方面提出了加强共享平台建设的对策与建议,以期为农业科研院所共享实验平台建设提供理论依据。

整合宏基因组学分析生猪养殖粪污发酵过程中耐药基因的动态变化

【目的】探究生猪养殖粪污在堆肥过程中耐药基因的消减规律。【方法】以猪粪和菌渣为发酵原料,进行有氧堆肥处理,在堆肥第1、4、8、12、16、22、29天,进行上、中、下分层多点采样,提取总DNA构建文库,经定量和检测合格后,进行宏基因组测序分析。通过宏基因组学方法对堆肥过程中耐药基因的动态变化进行分析。【结果】堆肥期间共发现613个耐药基因,分别对32类抗生素产生耐药。其中,丰度较高的抗生素分别为青霉烷类抗生素(Penam)、头孢菌素类抗生素(Cephalosporin)、氨基糖苷类抗生素(Aminoglycoside antibiotic)、磷霉素类抗生素(Fosfomycin)、糖肽类抗生素(Glycopeptide antibiotic)和四环素类抗生素(Tetracycline antibiotic),这与现实中常用的抗生素种类相吻合。分析发现耐药基因的消减出现2个峰值,第一个峰值出现在试验起始时,在第4天迅速下降,然后在第12天(对照组)和第8天(实验组)达到第二个峰值,随着细菌的自然凋亡,耐药基因的丰度又下降到低值,慢慢消减下去。【结论】在堆肥过程中,生猪养殖粪污中耐药基因丰度呈现波动式消减。

延髓背侧网状核胶质细胞活化参与大鼠咬合干扰致口颌面痛觉敏感的中枢机制

目的探讨大鼠咬合干扰去除后痛觉敏感维持模型中延髓背侧网状核(DRt)胶质细胞活化参与口颌面痛觉敏感的中枢机制。方法24只SD雄性大鼠(180~200 g)随机分为假手术组(于1%戊巴比妥钠全麻下保持开口5 min,但不粘固牙冠)、痛觉敏感维持组[实验性咬合干扰(EOI)8 d后去除干扰]、痛觉敏感维持(EOI 8 d后去除干扰)+DRt损毁组,每组8只,行为学实验动物建模后于7、10、14 d测定各组大鼠自我赏罚行为学表现。另取9只SD大鼠分为假手术组、痛觉敏感维持组(施加EOI 8 d去除EOI前)、痛觉敏感维持组6 d(施加EOI 8 d并去除EOI后6 d),每组3只,左心室灌流后取材进行DRt脑区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和大鼠小胶质细胞特异性标志物(OX-42)的免疫荧光染色,并进行半定量分析星形胶质细胞和小胶质细胞的荧光强度和荧光面积。结果EOI 10 d时,与假手术组比较,痛觉敏感维持组总摄食时间明显缩短(P<0.05),痛觉敏感维持+DRt损毁组总摄食时间虽较假手术组缩短,但差异无统计学意义(P>0.05);EOI 14 d时,与假手术组比较,痛觉敏感维持组总摄食时间仍明显缩短(P<0.05),而痛觉敏感维持+DRt损毁组差异无统计学意义(P>0.05);与痛觉敏感维持组比较,痛觉敏感维持+DRt损毁组总摄食时间明显延长(P<0.05)。免疫荧光染色半定量分析显示,与假手术组比较,痛觉敏感维持组GFAP及OX-42的荧光面积、荧光强度差异均无统计学意义(P>0.05),而痛觉敏感维持组6 d的GFAP荧光面积、荧光强度及OX-42荧光面积均明显增高(P<0.05);与痛觉敏感维持组相比,痛觉敏感维持组6 d的GFAP及OX-42的荧光面积、荧光强度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论DRt参与了大鼠EOI模型在去除咬合干扰后痛觉敏感的维持,其中DRt的星形胶质细胞和小胶质细胞活化是痛觉敏感维持的中枢机制。

整合宏基因组学分析生猪养殖粪污堆肥发酵过程中微生物群落动态变化

以猪粪和菌渣为发酵原料,进行有氧堆肥处理,在堆肥第1、4、8、12、16、22、29天,进行上、中、下分层多点采样,提取总DNA构建文库,经定量和检测合格后,利用宏基因组测序分析堆肥过程中微生物区系变化与致病微生物动态变化。结果表明,堆肥期间微生物丰度发生明显变化,其中细菌丰度先升后降,病毒丰度变化平稳,真菌丰度稍有增长,古细菌丰度则稍有下降。在堆肥初始时,变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门等微生物群落为优势菌门;变形菌门在堆肥的第4天迅速达到高点,然后迅速下降并维持在原始水平,其中试验组的变化比对照组更为平稳;厚壁菌门在堆肥的前4 d,丰度急速下降,然后缓慢下降;拟杆菌门在堆肥期间,丰度持续上升。同时,大肠埃希氏菌、沙眼衣原体、肠道沙门氏菌、化脓性链球菌、停乳链球菌等强致病微生物,随着堆肥的进行,其丰度均逐渐下降。试验组和对照组的菌群结构和丰度变化趋势均无显著差异。

四川省部分规模养殖场猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒2型感染情况调查

为了解四川省规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)2种猪免疫抑制类病原的感染情况,采用荧光定量RT-PCR/PCR方法,对898份采自四川省12个地区规模化猪场的组织、精液及血液样品进行PRRSV和PCV2检测与分析。结果显示:至少检出PRRSV和PCV2中一种病原的样品占67.82%,其中组织样品阳性率最高(32.96%),其次为血液(27.17%)、精液(7.68%)。从不同类别样品感染情况看,组织样品中PRRSV+PCV2混合感染率最高,达33.53%;精液样品中PRRSV单感染率最高,达53.00%;血液样品中PCV2单感染率最高,达45.27%。从不同感染类型情况看,PCV2单感染、PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率依次下降,分别为33.18%、20.71%、13.92%;PRRSV单感染、PRRSV+PCV2混合感染率最高的均为组织样品,分别占10.58%、12.80%,PCV2单感染率最高的为血液样品,达22.94%。从不同地区感染情况看,12个地区中PRRSV和PCV2中至少一种病原为阳性的阳性率为52.17%~82.81%,其中绵阳市最高;PRRSV单感染率最高的为绵阳市(37.50%),PCV2单感染率最高的为内江市(44.44%),PCV2+PRRSV混合感染率最高的为乐山市(20.29%)。结果表明:四川省规模化养猪场中普遍存在PRRSV、PCV2单感染和混合感染,其中内江、绵阳、乐山等地的感染情况较为严重;组织样品总阳性率最高并以PRRSV+PCV2混合感染为主,精液和血液样品分别以PRRSV单感染、PCV2单感染为主。