印尼3个地区热泉中可培养细菌的分子鉴定与系统发育分析

采用MSM寡营养培养基从印度尼西亚Pantai cermin,Kalianda和Banyu wedang地区的热泉水样、泥样以及沉积物中根据菌落的形态学特征共分离获得69株细菌,通过菌株的16S rDNA的限制性片段长度多态性(PCRRFLP)分析、序列比对和生理生化分析,对其进行鉴定并构建系统发育树。结果表明,分离获得的69株细菌菌株分别属于8种基因型(Ⅰ～Ⅷ),其中1类(基因型I)属于短芽孢杆菌属(Brevibacillus),约占20.28%;1类(基因型Ⅷ)属于地芽孢杆菌属(Geobacillus),约占14.49%;其余6类(基因型Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ)均属于芽孢杆菌属(Bacillus),约占总菌株数量的65.22%,为优势菌群。分离获得的8类细菌均为革兰氏阳性兼性好氧菌,接触酶、氧化酶反应均呈阳性,吲哚反应都呈阴性。产酶实验表明,分离到的菌株在中性pH值,37～70℃范围内能够分泌多种耐热的水解酶类,4种基因型(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)的菌株分泌蛋白酶,5种基因型(Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ,Ⅷ)的菌株分泌水解脂肪酶,1种基因型(Ⅳ)的菌株分泌淀粉酶,并且发现其中1种基因型(Ⅳ)的芽孢杆菌可同时产生3种水解酶类。利用限制性内切酶AluI对16S rDNA进行的RFLP技术分析结果表明,利用该技术能够对嗜热细菌的16SrDNA多样性进行有效的分析,经凝胶电泳图谱将菌种鉴定到属的水平,揭示了印尼热泉生态系统中蕴藏着丰富的嗜热菌菌种资源。