烧山火针刺法联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎活动期的效果及其对患者炎症因子和免疫功能的影响

目的 观察烧山火针刺法联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎(RA)活动期的效果,并探讨其抗炎和调节免疫作用机制。方法 选取2020年2月至2022年10月郑州市第一人民医院收治的60例RA活动期患者纳入研究,按照随机数表法分为常规组和联合组各30例。常规组患者给予甲氨蝶呤治疗,联合组患者给予烧山火针刺法联合甲氨蝶呤治疗,均治疗两周。于治疗两周后比较两组患者的治疗效果,以及治疗前后的中医证候评分、28个关节疾病活动(DAS28)评分、疼痛(VAS)评分、炎性指标[血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体]、免疫指标(Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17细胞),同时比较两组患者治疗期间的不良反应发生情况。结果 联合组患者的治疗总有效率为93.33%,明显高于常规组的73.33%,差异有统计学意义(P<0.05);联合组患者治疗两周后的中医证候关节肿胀、冷痛、压痛、晨僵、屈伸不利评分分别为(0.72±0.18)分、(0.70±0.20)分、(0.81±0.22)分、(0.68±0.15)分、(0.77±0.19)分,明显低于常规组的(1.03±0.24)分、(0.96±0.23)分、(1.14±0.26)分、(0.91±0.21)分、(1.09±0.23)分,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组患者治疗两周后的DAS28、VAS评分分别为(2.18±0.33)分、(2.46±0.22)分,明显低于常规组的(3.26±0.47)分、(2.89±0.27)分,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组患者治疗两周后的ESR、抗CCP抗体、RF、CRP、TNF-α水平分别为(16.23±2.29) mm/h、(172.30±30.14) IU/mL、(130.85±15.42) IU/mL、(10.20±1.68) mg/L、(18.95±4.38) pg/mL,明显低于常规组的(21.84±3.41) mm/h、(205.68±36.77) IU/mL、(157.62±24.10) IU/mL、(13.65±2.06) mg/L、(24.51±6.02) pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);联合组患者治疗两周的外周血Treg细胞百分比、Treg/Th17比值分别为(2.61±0.35)%、2.44±0.37,明显高于常规组的(2.17±0.28)%、1.68±0.32,Th17细胞百分比为(1.07±0.18)%,明显低于常规组的(1.29±0.22)%,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗期间的不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 烧山火针刺法联合甲氨蝶呤治疗RA活动期能明显减轻患者的临床症状,降低炎症反应,调节免疫功能,临床应用疗效显著,且安全性良好。

猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

基于自监督对比学习与方面级情感分析的联合微调模型

方面级情感分析是自然语言处理领域中一项具有挑战性的细粒度情感分析任务。以微调预训练语言模型的方式广泛应用于方面级情感分析任务,并取得了明显的效果提升。然而,现有多数研究设计的下游结构较为复杂,甚至与预训练模型部分隐藏层结构重合,从而限制了整体模型性能。由于对比学习方法有助于改善预训练语言模型在词语级别和句子级别的表示,设计了一种结合自监督对比学习与方面级情感分析的联合微调模型(self-supervised contrastive learning aspect-based sentiment analysis,SSCL-ABSA)。该模型以简洁的下游结构联合两种学习任务,实现从不同角度微调预训练基于Transformer的双向编码器(bidirectional encoder representations from Transformers,BERT)模型,有效促进了方面级情感分析效果的提升。具体地,首先在BERT编码阶段,将评论文本与方面词拼接成两个片段输入BERT编码器,得到各词特征表示。之后根据下游结构需求,对不同的词特征采用池化操作。一方面池化所有词特征用于方面级情感分析,另一方面池化两个片段的方面词特征用于自监督对比学习。最终结合两种任务以联合学习的方式微调BERT编码器。在3个公开数据集上进行实验评估,结果表明SSCL-ABSA方法优于其他同类对比方法。借助t-分布随机近邻嵌入(t-distributed stochastic neighbor embedding,t-SNE)方法,形象地可视化了SSCL-ABSA有效改善了BERT模型的实体表示效果。

比较杂交手术和单纯心内膜导管消融治疗持续性心房颤动有效性和安全性的Meta分析

目的比较心外膜联合心内膜导管消融(杂交)与单纯心内膜导管消融(导管)治疗持续性心房颤动(房颤)的有效性和安全性。方法利用PubMed、Embase和The Cochrane Library数据库进行系统性检索,检索时间为建库至2022年3月31日。主要临床终点为远期消融成功率和手术并发症。次要临床终点包括术后电复律、二次消融、手术时间和X线透视时间。结果纳入9篇研究(2篇随机对照研究和7篇观察性研究)共834例持续性房颤患者。其中380例分布在杂交手术组,454例分布在导管组,平均随访19.1个月。Meta分析显示,与导管消融相比,尽管杂交手术有改善房颤远期成功率的趋势(OR 1.92,95%CI 0.89~4.12,P=0.090),但是显著增加手术并发症发生风险(OR 4.18,95%CI 2.48~7.03,P<0.001),包括严重并发症发生风险(OR 2.90,95%CI 1.34~6.31,P=0.007)和死亡风险(OR 6.96,95%CI 1.43~33.87,P=0.020)。另外,杂交手术减少电复律及二次消融风险,没有明显延长手术时间和X线透视时间。结论尽管杂交手术提高持续性房颤消融的成功率,但会显著增加手术并发症发生风险,包括严重并发症及死亡。

突发性聋患者治疗前后在大脑皮层静息态fMRI的表现

目的探讨突发性耳聋(SSNHL)患者治疗前后在大脑皮层静息态fMRI的表现。方法选取2021年10月-2023年9月在上饶市人民医院耳鼻咽喉科收治的150例SSNHL患者作为研究对象,所有患者进行周期为20 d的治疗,统计患者临床疗效情况,并计算总有效率;分别于治疗前3 d及治疗结束后进行2次fMRI扫描,比较有效患者和无效患者治疗前后的fMRI变化。结果治疗后痊愈患者59例、显效50例、有效19例、无效22例,临床总有效率为85.33%(128/150)。有效患者治疗前后ALFF信号存在差异,其中治疗后ALFF信号升高脑区为左侧额中回、右侧颞下回、左侧眶部额上回、左侧背外侧额上内侧回、右侧海马旁回及右侧前扣带和旁扣带脑回,信号降低脑区有左侧颞中回、左侧颞上回及右侧楔叶、右侧补充运动区,差异有统计学意义(P<0.05)。无效患者治疗前后fMRI差异变化主要发生于颞上、中、下回,治疗后,颞下回ALFF信号升高,颞中回及颞上回ALFF信号降低,治疗前后差异存在统计学意义(P<0.05)。结论有效和无效SSNHL患者治疗前后的静息态fMRI信息会在不同脑区发生改变,相应的发生不同脑区的激活,为评估SSNHL疗效提供有力的参考价值。

基于双曲率黎曼流体的网络攻击检测模型

基于深度学习的网络攻击检测方法以其强大的特征表示及提取能力得到了迅速发展。然而,传统欧氏空间中的深度学习网络攻击检测模型无法有效捕获具有复杂调用关系的网络拓扑结构。为高效建模网络攻击图中潜在的数据模式,提高网络攻击检测的准确性,提出一种基于双曲率黎曼流体的网络攻击检测模型。与现有方法不同的是,该模型将传统欧氏空间中的网络攻击检测模型迁移到异质化非欧式表示空间中,利用曲率黎曼几何空间所具备的大规模层次性和环形图结构模式建模能力,获取高质量的攻击图表示向量,进而提高网络攻击检测准确性。实验结果表明,基于双曲率黎曼流体的网络攻击检测模型Precision、Recall、F1-score分别为0.963、0.964、0.964,能够对网络攻击行为进行有效分析与检测。

玻纤带增强黏合型HDPE内衬柔性复合管性能试验研究

本文通过介质相容性、耐气体渗透性测试以及抗开裂稳定性、最小弯曲半径、爆破压力等试验研究了新型RTP管材-玻纤带增强黏合型HDPE内衬柔性复合管基本性能;通过试验结合理论分析优化了管材强度设计计算方法。实验表明,HDPE材料在80℃酸性水环境下1500 h,屈服强度、断裂伸长率降低率仅为1.33%和6.0%;管材在60℃下、含H_(2)S不超过0.03个大气压时,非扩散状态时1 h和10 min的H_(2)S渗透量聚集浓度分别为24.68和4.11 mg/m^(3),均小于人体最低安全限值;优化的管材强度设计计算方法吻合度超过95%,对于产品设计与开发具有显著指导意义;新型RTP管材可在界定工况、环境下安全使用。

基于MQTT的步进电机远程控制方案实现

远程实验的仪器操作与动态数据测量离不开步进电机,针对远程实验步进电机控制需要,设计了一个基于MQTT通信和嵌入式的电机远程控制方案。在Windows Azure云计算平台上搭建基于MQ,TT的Mosquitto服务器,接收来自Web端发送的命令,推送至步进电机控制器,实现对步进电机的使能、方向、速度等控制。采用该方案利用远程Web端操控电机,对电机进行实时测试,结果表明,该方案可以实现对步进电机准确、实时、可靠的远程控制,电机以150 Hz驱动频率运行时位置误差为0.21%,可应用于相关远程实验中。

健脾涤痰方治疗稳定期支气管扩张症脾虚痰盛证临床观察

目的:观察健脾涤痰方治疗稳定期支气管扩张症脾虚痰盛证的临床疗效。方法:将48例支气管扩张症脾虚痰盛证患者,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组24例。48例患者中脱落3例,治疗组脱落2例,对照组脱落1例。急性加重时,两组患者均给予化痰药、抗菌药物对症治疗,治疗组另给予健脾涤痰方治疗,对照组另给予安慰剂口服。观察两组治疗前后中医证候积分、24 h痰量积分、肺功能、圣乔治呼吸问卷(St George's respiratory questionnaire,SGRQ)积分等变化情况。结果:对照组观察期间7例患者出现急性加重情况,治疗组观察期间未出现急性加重情况。对照组有效率为0,治疗组有效率为90.91%,两组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后中医证候积分低于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后24 h痰量少于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后SGRQ评分低于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后肺功能优于治疗前及对照组治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾涤痰方能改善稳定期支气管扩张症脾虚痰盛证患者临床症状,提高患者生活质量,减少痰量,改善肺功能。

白金甘胃方加减对胃食道反流病患者中医症状积分及食管下段压力变化的影响

目的:观察白金甘胃方加减对胃食道反流病患者中医症状积分及食管下段压力变化的影响。方法:选取2018年3月至2019年3月郑州市第一人民医院消化科、中医科门诊治疗的胃食道反流病患者80例,随机分为对照组和治疗组各40例,有部分病例脱落,治疗组38例和对照组33例。对照组给予泮托拉唑肠溶片、莫沙必利治疗,治疗组在对照组治疗的基础上给予白金甘胃方加减治疗。结果:两组比较,治疗组治疗后RDQ总分及各单项评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后LES静息压高于对照组,胃镜评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组中医证候疗效比较,对照组有效率为78.78%,治疗组有效率为86.84%,治疗组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组胃镜下炎症疗效比较,治疗组有效率为84.21%,对照组有效率为77.42%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白金甘胃方加减能改善胃食管反流病患者临床症状,改善食管下段压力。

猪流行性腹泻病毒特异性SIgA抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

为检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性分泌性Ig A (PEDV SIg A)抗体,本研究以纯化的PEDV粒子作为包被抗原,以待检初乳或直肠拭子处理样品为检测样品,以HRP标记的鼠抗猪SIg A分泌成分(SC)的单克隆抗体(MAb)为酶标二抗,经过各条件优化,建立了检测初乳和直肠黏膜中PEDV SIg A的间接ELISA方法。并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,PEDV粒子的最佳包被浓度为5.8 ng/孔,HRP标记的鼠抗猪SC抗体的最佳稀释度为1∶3 000。该方法与TGEV、Po RV感染的初乳样品无交叉反应,特异性较强。当初乳的稀释度在1∶6 400时,该ELISA方法检测结果仍为阳性,敏感性较高;批内和批间重复试验的变异系数均小于10%,表明其重复性较好。该方法的建立为研究猪群感染PEDV和PEDV疫苗免疫后特异性SIg A水平及黏膜免疫评价提供了有效的技术手段,具有很好的应用前景。

猪急性腹泻综合征冠状病毒RT-LAMP快速检测方法的建立与应用

为建立简捷、灵敏的猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)检测方法,本研究针对SADS-CoV N基因片段保守区域设计特异性的反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,经条件优化后显示建立的SADS-CoV RTLAMP检测方法最佳反应条件为64℃,50 min,初步建立SADS-CoV的RT-LAMP快速检测方法。利用该方法检测SADS-CoV、猪流行性腹泻性病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪肠道病毒9型(PEV9),评估其特异性,结果显示除SADS-CoV外,该方法与其它病原无交叉反应,特异性较强;将病毒RNA 10倍倍比稀释后作为模板,利用该RT-LAMP与普通RT-PCR同时检测,结果显示,RTLAMP方法比普通RT-PCR方法的敏感性高103倍,敏感性较高。以同一批次或不同批次的SADS-CoV核酸为模板进行RT-LAMP试验,结果显示RT-LAMP批内批间均可稳定的检出阳性样本,表明该方法具有良好的重复性和稳定性。对经口服感染SADS-CoV和未感染仔猪的临床样本进行检测,结果显示RT-LAMP与普通RT-PCR检测结果高度一致。本实验首次建立的SADS-CoV可视化RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高,操作简便、快速和高通量检测的优点,为临床SADS-CoV感染的快速诊断和综合防控提供检测手段。

猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,将PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段与人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表达质粒pAAV-IRES-hr GFP中,构建真核表达质粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并转染293T细胞,表达并纯化了S1蛋白。以纯化的S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了检测PEDV G2型特异性IgA抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行了特异性、敏感性及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒和圆环病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示该方法能够检测出400倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于10%。利用该间接ELISA方法和间接免疫荧光方法(IFA)同时对临床样品检测,结果显示二者总符合率为98.6%。本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够用于检测及评价血清中PEDV特异性IgA抗体的水平,为PEDV流行情况及免疫效果评价提供了有效的手段。

猪德尔塔冠状病毒M蛋白参与病毒诱导IL-8产生的研究

为研究猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染能否诱导宿主细胞产生IL-8,本研究将PDCoV分别感染猪小肠上皮细胞(IPEC)和ST细胞,感染后6 h、12 h和24 h收集细胞,通过荧光定量PCR方法检测IL-8 mRNA转录水平。构建表达PDCoV M蛋白的真核表达质粒pCAGGS-M,经测序鉴定无误后转染HEK 293T细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot方法检测PDCoV M蛋白的表达。将pCAGGS-M质粒转染IPEC细胞,采用荧光定量PCR方法检测PDCoV M蛋白对IL-8转录的影响。为进一步评价PDCoV M蛋白对IL-8转录水平的影响,将不同浓度pCAGGS-M质粒(10 ng、100 ng和200 ng)、IL-8启动子质粒和pRL-TK质粒共转染HEK 293T细胞,采用双荧光素酶活性分析试验评价PDCoV M蛋白对IL-8转录活性的影响。荧光定量PCR结果显示,与未感染组相比,PDCoV感染能够显著上调细胞中IL-8 mRNA转录水平,其中PDCoV感染IPEC细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调3倍、37倍和173倍;PDCoV感染ST细胞6 h、12 h和24 h后IL-8 mRNA分别上调20倍、19000倍和48000倍。IFA和western blot结果显示PDCoV M蛋白正确表达,与空载体质粒转染组相比,转染表达PDCoV M蛋白的质粒能够上调IPEC细胞IL-8转录水平约4.3倍。双荧光素酶活性分析试验结果显示,与对照组相比,转染10 ng、100 ng和200 ng pCAGGS-M质粒能够分别诱导细胞中IL-8转录活性上调1.9倍、3.8倍和5.7倍;表明PDCoV M蛋白能够上调宿主细胞IL-8的转录活性。综上所述,PDCoV感染能够显著上调IPEC和ST细胞中IL-8的转录水平,其中PDCoV M蛋白参与诱导细胞IL-8的产生,本研究为深入了解PDCoV致病机制提供参考依据。

基于双模型的综合孔径辐射计成像反演方法

针对综合孔径成像中,基于单一模型的成像反演方法难以有效应对模型误差,进行准确图像重构的问题,提出了一种基于双模型(DM)的综合孔径成像反演方法,用于校正反演模型的参数误差,并对目标场景进行高精度的毫米波图像重构。鉴于傅里叶变换(MFFT)模型和G矩阵(GM)模型参数敏感性不同的特性,提出的DM方法首先通过比较两种模型的重构误差,对存在误差的成像参数进行准确校正;然后在精确GM模型的基础上,借助改进的正则化方法重建出高精度的目标图像。经仿真实验证明,相比于传统的单模型成像方法,提出的DM方法能够有效校正成像模型的参数误差,并对目标场景进行高精度的毫米波图像重构。

甘草酸通过HMGB1/TLR4/JNK信号通路抗猪急性腹泻综合症冠状病毒感染的研究

猪急性腹泻综合症冠状病毒(SADS-CoV)是一种新发现的肠道冠状病毒,引起仔猪严重的临床腹泻和肠道病理损害。为探究甘草提取物的主要成分甘草酸(GLY)抑制SADS-CoV复制的机制,本研究利用不同浓度的GLY对非洲绿猴肾细胞(Vero E6)和猪回肠上皮细胞(IPI-2I)预处理2 h并感染不同浓度的SADS-CoV后,分别经western blot和TCID_(50)检测,结果显示N蛋白的表达量显著减少且病毒滴度下降,表明GLY在体外能够抑制SADS-CoV的感染。利用不同浓度GLY对Vero E6和IPI-2I细胞预处理2 h后,感染灭活的SADS-CoV,western blot结果显示在GLY浓度为0.8 mmol/L时,N蛋白表达量显著减少,表明GLY能够抑制该病毒的侵入。选取0.4 mmol/L GLY处理细胞,再感染SADS-CoV后2 h、6 h、12 h收取细胞样品经western blot检测,结果显示各时间点N蛋白表达量均显著减少,表明GLY对该病毒的复制抑制效果显著。GLY是高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的竞争性抑制剂,而HMGB1的受体主要有TLR4和RAGE,因此构建了HMGB1关键性位点(C^(45)S、C^(106)S、C^(45/106)S)突变的质粒和RAGE受体的siRNA,分别转染Vero E6细胞并感染SADS-CoV,收获上清液和细胞样品,利用western blot和TCID_(50)检测。结果显示,N蛋白表达量显著减少且病毒滴度下降,表明GLY在SADS-CoV感染时通过影响HMGB1与TLR4和RAGE的结合而发挥功能。为了进一步探究GLY发挥作用的信号通路,分别将SADS-CoV感染Vero E6和IPI-2I细胞,收获细胞样品,利用western blot检测MAPK信号通路相关蛋白的变化,结果显示p-p38、p-JNK、p-ERK表达量在感染早期和晚期上调,表明SADS-CoV感染激活了MAPK通路。利用不同浓度的GLY和TLR4抑制剂TAK对Vero E6和IPI-2I细胞预处理2 h后感染SADS-CoV,收获蛋白样品,western blot结果显示p-JNK和N蛋白表达量显著减少,其他蛋白无明显变化,表明GLY和TAK调控JNK的磷酸化,而不能调控p38和ERK的磷酸化。利用HMGB1中和抗体预处理Vero E6细胞、将HMGB1的siRNA以及构建的HMGB1关键位点突变的真核表达质粒分别转染Vero E6细胞后感染SADS-CoV,收获上述细胞样品,western blot结果显示p-JNK的表达量均减少,表明HMGB1影响了JNK的磷酸化;利用不同浓度的JNK抑制剂SP600125对Vero E6和IPI-2I预处理2 h,再感染SADS-CoV,利用western blot、TCID_(50)和IFA检测,结果显示N蛋白表达量及病毒滴度均下降且病毒复制减少,表明SP600125抑制了病毒的复制。综上所述,本研究首次证实GLY主要通过HMGB1/TLR4/JNK信号通路抑制SADS-CoV的体外复制,该通路的发现为研究抗SADS-CoV的新型药物提供了数据支持。

抗猪SIgA SC片段单克隆抗体的制备及鉴定

为获得抗猪分泌型IgA(SIgA)的单克隆抗体(MAb),本研究以纯化的SIgA蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,通过间接ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIgA SC片段的杂交瘤细胞株,命名为2F9。MAb亚类鉴定结果显示其亚类为IgG1/κ链。杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1∶200和1∶16 000。Western blot鉴定显示该MAb能够识别天然SIgA蛋白;IFA显示该MAb可以识别真核细胞表达的SIgA SC蛋白。抗猪SIgA SC片段的MAb制备,为建立一系列猪消化道病原的特异性SIgA诊断方法及研究黏膜免疫提供了重要工具,具有广阔的应用前景。

计及配电网灵活性的多园区综合能源系统分布式优化调度

多园区综合能源系统与配电网的交互方式决定多能潮流分布和能量传输损耗,进而将直接影响整个系统的优化运行.本文提出了一种计及多园区综合能源系统与配电网之间接入影响的分布式协同优化调度方案.首先,提出一种包含综合能源系统及配电网的双层分布式优化系统架构.然后,以各园区综合能源系统用能成本最低、配电网网损最小为目标,以能源园区接入配电网的位置及配电网网络拓扑为调控手段给出协同优化模型,并通过改进自适应步长交替方向乘子法实现问题分布式求解,实现了系统的整体高效调度,提升了配电网灵活性及园区综合能源系统运行经济性.最后,通过仿真算例验证了本文所提方法的准确性及有效性.

二甲双胍抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用机制

目的二甲双胍可抑制鼻咽癌细胞的增殖,但作用机制尚不清楚。文章研究二甲双胍对鼻咽癌细胞CNE-1增殖与凋亡的效应,并探讨miR-let-7a、IGF-1R在其中的作用。方法分别以不同浓度二甲双胍(0、5、10、20、40、80mmol/L)干预鼻咽癌细胞CNE-124h后,采用CCK8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪技术分析细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测bcl-2、bax、IGF-1RmRNA表达水平,miR-let-7a的表达水平;Westernblot方法检测IGF-1R蛋白的表达。结果CCK8结果显示,各浓度组二甲双胍处理细胞24h后,二甲双胍可抑制CNE-1细胞的增殖活性,随药物浓度增高抑制作用呈增强趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪凋亡分析结果显示,0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍处理后总凋亡率分别为(6.17±0.74)%、(8.11±1.29)%、(11.97±3.82)%、(13.94±2.98)%、(24.2±2.79)%;与0mmol/L二甲双胍处理比较相比,10、20、40mmol/L二甲双胍处理后凋亡率随浓度升高而呈上升趋势(P<0.05)。qPCR结果显示,0、5、10、20mmol/L浓度二甲双胍作用后24h后,CNE-1细胞的bcl-2、bcl-2/bax、IGF-1R、miR-let-7amRNA表达水平随二甲双胍浓度增加而逐渐下调,而bax基因表达水平则上调,与0mmol/L二甲双胍作用后相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍有抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与miR-let-7a表达上调、IGF-1R表达下调有关。