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阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠脑缺血恢复期RAGE及sRAGE表达的影响 被引量:2
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作者 温少红 刘向荣 +5 位作者 赵顺英 董雯 陈青芳 陈文涛 李子孝 王春娟 《中国卒中杂志》 2022年第8期821-828,共8页
目的 探索阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠大脑中动脉远端缺血再灌注模型恢复期晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycatio... 目的 探索阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠大脑中动脉远端缺血再灌注模型恢复期晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation end products,sRAGE)表达的影响及其机制。方法 60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、溶剂组、阿司匹林和氯吡格雷联合组(双抗组),每组20只。通过压迫大脑中动脉远端制作脑缺血再灌注模型(缺血60 min再灌注),再灌注即刻灌胃,溶剂组给予饮用水100μL,双抗组给予阿司匹林(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)与氯吡格雷(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)混悬液100μL,每日1次,连续21 d。缺血1、3、5、7、9、11、14、21 d对小鼠进行神经功能评价。缺血21 d取材,酶联免疫吸附法检测小鼠血清sRAGE表达水平;免疫印记检测脑组织RAGE表达水平;实时荧光定量PCR检测CD16、CD32、CD11b、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric-oxide synthase,iNOS)、CD206、精氨酸酶1(arginase1,Arg1)、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、几丁质酶样蛋白(chitinase-like 3,Chil3/Ym1/2)等炎症因子及RAGE的mRNA表达情况;免疫荧光染色标记RAGE、神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),观察RAGE与神经元和星形胶质细胞共定位情况。结果 双抗组小鼠3 d时胡须碰触评分和神经功能总分、9 d时神经功能总分优于溶剂组,差异有统计学意义(P=0.0067、0.0140、0.0406)。缺血再灌注21 d时,双抗组小鼠血清sRAGE表达水平高于溶剂组(1.099±0.541 ng/mL vs.0.319±0.341 ng/mL,P=0.0120);脑组织iNOS(1.250±0.318vs.1.843±0.301,P=0.0164)及RAGE(2.105±0.300 vs.2.732±0.249,P=0.0071)的mRNA相对表达较溶剂组下降。在小鼠脑梗死周边区RAGE与神经元具有共定位,与星形胶质细胞无共定位;双抗组RAGE~+NeuN~+细胞数量少于溶剂组(328.798±35.183个/平方毫米vs.814.437±165.758个/平方毫米,P=0.0012)。结论 阿司匹林和氯吡格雷联合应用可能通过下调RAGE、上调sRAGE的表达水平,减轻炎症反应,从而发挥脑保护作用。 展开更多
关键词 阿司匹林 氯吡格雷 缺血再灌注 晚期糖基化终末产物受体 可溶性晚期糖基化终末产物受体
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毛柳苷在脑缺血再灌注后抑制神经元自噬及神经保护作用研究 被引量:2
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作者 温少红 刘宽 +6 位作者 赵顺英 董雯 陈青芳 陈文涛 叶维贞 姜鸣钰 刘向荣 《中国卒中杂志》 2022年第9期991-1001,共11页
目的通过动物模型和体外细胞培养探索毛柳苷(salidroside,SAL)对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其可能机制。方法36只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(12只)、溶剂组(12只)和SAL组(12只)。线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,缺... 目的通过动物模型和体外细胞培养探索毛柳苷(salidroside,SAL)对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其可能机制。方法36只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(12只)、溶剂组(12只)和SAL组(12只)。线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,缺血1 h后再灌注,而后即刻尾静脉注射150μL SAL(剂量10 mg/kg,每只实际用量0.22 mg),溶剂组注射同等体积磷酸盐缓冲液,假手术组不给药。缺血再灌注后24 h进行小鼠神经功能缺损评分,神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)染色统计脑梗死率。取溶剂组小鼠全脑冰冻切片,自噬标记物微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3 beta,LC3B)分别与NeuN、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光共染,观察LC3B与梗死周边区神经元、星形胶质细胞共定位情况,以明确缺血再灌注后24 h产生自噬活动的主要部位。自噬标记物苄氯素1(Beclin-1)、自噬相关蛋白3(autophagy related protein 3,Atg3)分别与NeuN免疫荧光共染,进一步观察梗死周边区神经元自噬水平变化情况,并统计Beclin-1^(+)/NeuN^(+)、Atg3^(+)/NeuN^(+)细胞在单位面积(1 mm^(2))内的个数。原代大鼠神经元培养10 d后进行氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD),将细胞分为以下6组:对照(control,CON)组、OGD 1 h后复氧1 h(OGD 1 h)组、OGD 1 h后复氧4 h(OGD 4 h)组、SAL组、OGD 1 h后复氧1 h/全程SAL治疗(OGD^(+)SAL 1 h)组、OGD 1 h后复氧4 h/全程SAL治疗(OGD^(+)SAL 4 h)组,CON组和SAL组不进行OGD,SAL剂量50μmol/L。采用免疫印迹法检测各组细胞中自噬标记物LC3B、Beclin-1、Atg3、Atg5和Atg7的相对表达量;CON组、OGD 4 h组细胞进行LC3B、NeuN免疫荧光共染,观察OGD后神经元内LC3B表达变化情况,并统计LC3B^(+)/NeuN^(+)细胞在单位面积(1 mm^(2))内的个数。结果缺血再灌注后24 h,SAL组小鼠神经功能缺损评分(5.8±1.4分vs.7.1±1.4分,P=0.0332)和脑梗死率(28.7%±9.7%vs.39.9%±9.4%,P=0.0038)均低于溶剂组。溶剂组LC3B与梗死周边区神经元有共定位,与星形胶质细胞无共定位。SAL组Beclin-1^(+)/NeuN^(+)(312.4±45.6个/平方毫米vs.471.2±50.3个/平方毫米,P=0.0121)、Atg3^(+)/NeuN^(+)(322.5±26.5个/平方毫米vs.491.3±42.1个/平方毫米,P=0.0013)细胞数量少于溶剂组。大鼠原代神经元免疫印迹结果显示,OGD 1 h组(1.096±0.004 vs.1.000±0.000,P=0.0174)、OGD 4 h组(1.213±0.019 vs.1.000±0.000,P<0.0001)LC3B相对表达量高于CON组;OGD^(+)SAL 4 h组LC3B、Beclin-1、Atg3相对表达量低于OGD 4 h组(0.833±0.029 vs.1.213±0.019,P<0.0001,0.579±0.081 vs.1.152±0.144,P<0.0001,0.726±0.182 vs.1.091±0.177,P=0.0211);OGD^(+)SAL 4 h组LC3B、Beclin-1相对表达量低于OGD^(+)SAL 1 h组(0.833±0.029 vs.1.046±0.063,P<0.0001;0.579±0.081 vs.0.921±0.09,P=0.0030)。CON组LC3B^(+)/NeuN^(+)细胞数少于OGD 4 h组(51.9±18.7个/平方毫米vs.584.2±34.5个/平方毫米,P=0.0002)。结论SAL可能通过抑制神经元自噬在急性脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注 神经元 自噬 毛柳苷 神经保护
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阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠脑缺血损伤后骨髓及脑内炎症反应的影响 被引量:2
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作者 董雯 姜鸣钰 +6 位作者 陈文涛 刘文倩 陈青芳 赵顺英 叶维贞 温少红 刘向荣 《中国卒中杂志》 2022年第6期605-610,共6页
目的探讨小鼠脑缺血损伤后阿司匹林和氯吡格雷联合应用21 d对骨髓中性粒细胞炎症因子及脑内小胶质细胞极化的影响。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、阿司匹林联合氯吡格雷组(双抗组)2组,每组10只。通过结扎大脑中动脉远端制作脑缺... 目的探讨小鼠脑缺血损伤后阿司匹林和氯吡格雷联合应用21 d对骨髓中性粒细胞炎症因子及脑内小胶质细胞极化的影响。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、阿司匹林联合氯吡格雷组(双抗组)2组,每组10只。通过结扎大脑中动脉远端制作脑缺血再灌注模型(缺血60 min,解开结扎实现再灌注),再灌注即刻通过灌胃给予饮用水100μL(对照组)和阿司匹林(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)与氯吡格雷(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)混悬液100μL(双抗组),每日1次,连续21 d。21 d后处死小鼠,分离骨髓中性粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测骨髓中性粒细胞相关炎症因子,包括IL-1β、IL-6、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric-oxide synthase,iNOS)、TNFα、精氨酸酶1(arginase1,Arg1)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)、CD206、CD32、几丁质酶样蛋白(chitinase-like 3,Chil3/YM1)的表达情况。脑组织行冰冻切片,免疫荧光染色标记离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)、CD16和CD206,观察小胶质细胞数量、形态变化与极化状态。结果与对照组相比,治疗21 d后双抗组小鼠骨髓中性粒细胞IL-1β的相对表达下降(0.703±0.124 vs.1.000±0.203,P=0.019);YM1(2.173±0.968 vs.1.000±0.282,P=0.019)和CD206(1.361±0.203 vs.1.000±0.260,P=0.048)的相对表达上调。治疗21 d后双抗组与对照组梗死周边区的小胶质细胞数量差异无统计学意义,但双抗组CD16阳性(M1型)小胶质细胞数量降低(119.4±37.43个/平方毫米vs.220.2±63.07个/平方毫米,P<0.001),CD206阳性(M2型)小胶质细胞数量增加(198.2±40.16个/平方毫米vs.122.8±29.88个/平方毫米,P<0.001),且双抗组小胶质细胞形态上呈多分支网状结构。结论阿司匹林与氯吡格雷联合应用可能通过抑制骨髓中性粒细胞炎症反应,增加脑内小胶质细胞分支,并激活小胶质细胞向抗炎表型(M2型)转化,从而发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 缺血性脑损伤 阿司匹林 氯吡格雷 中性粒细胞 小胶质细胞
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毛柳苷在缺血性脑损伤中对白介素4诱导蛋白1表达和小胶质细胞激活及表型的影响
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作者 刘文倩 赵顺英 +6 位作者 叶维贞 姜鸣钰 陈文涛 陈青芳 温少红 董雯 刘向荣 《中国卒中杂志》 2022年第2期134-141,共8页
目的探讨毛柳苷在缺血性脑损伤后对白介素4诱导蛋白1(interleukin-4 induced protein 1,IL4I1)表达及小胶质细胞极化的影响。方法38只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(4只)、毛柳苷组(17只)和生理盐水组(17只)。通过线栓法制作大脑中... 目的探讨毛柳苷在缺血性脑损伤后对白介素4诱导蛋白1(interleukin-4 induced protein 1,IL4I1)表达及小胶质细胞极化的影响。方法38只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(4只)、毛柳苷组(17只)和生理盐水组(17只)。通过线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型(缺血60 min拔栓实现再灌注),再灌注10 min后,毛柳苷组与生理盐水组小鼠分别经尾静脉按照10 mg/kg剂量注射毛柳苷(1 mg/mL)与生理盐水,每天1次,持续28 d。ELISA法检测假手术组及模型组缺血再灌注后48 h、7 d、28 d血清中的IL4I1浓度。采用神经元特异核蛋白(neuronalnuclei,NeuN)抗体免疫荧光染色标记神经元,观察缺血再灌注后7 d脑梗死体积。采用CD16/32、CD206和离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)免疫荧光染色观察缺血再灌注后7 d小胶质细胞极化状态及突起的长度、数量变化。通过细胞实验探究IL4I1与小胶质细胞不同表型之间的联系。培养小鼠BV2小胶质细胞,设置M0型细胞为空白对照组,使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和INF-γ诱导BV2细胞极化为M1促炎型,使用IL-4和IL-13诱导BV2细胞极化为M2抗炎型细胞。BV2细胞诱导48 h后提取细胞蛋白,通过免疫印迹检测BV2细胞不同表型中IL4I1的表达情况。结果与假手术组相比,生理盐水组脑缺血再灌注后48 h血清中IL4I1浓度下降(P=0.0302);与生理盐水组相比,毛柳苷组脑缺血再灌注后7 d和28 d血清中IL4I1浓度增加(P=0.0229,P=0.0076)。毛柳苷组脑缺血再灌注后7 d脑梗死体积较生理盐水组降低(P=0.0389)。与生理盐水组相比,毛柳苷组脑缺血再灌注后7 d缺血区周围小胶质细胞突起长度、突起数量、突起的分叉点及终末端点数量均增加(P=0.0040,P<0.001,P<0.001,P<0.001),皮层与纹状体区域M1型小胶质细胞数量减少(P=0.0407,P=0.0032),皮层与纹状体区域M2型小胶质细胞数量增多(P=0.0206,P=0.0075)。体外细胞实验BV2小胶质细胞不同表型中,M1型与M2型较M0型IL4I1表达下降(P=0.0008,P=0.0155),与M2型相比,M1型IL4I1表达更低(P=0.0406)。结论毛柳苷可能通过增加脑缺血再灌注损伤后血清及缺血脑组织中IL4I1的表达,并使激活的小胶质细胞向M2抗炎表型转化,减少脑梗死体积,从而发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 缺血性脑损伤 毛柳苷 小胶质细胞极化 白介素4诱导蛋白1
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Positive Ground State Solutions for Schrodinger-Poisson System with General Nonlinearity and Critical Exponent
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作者 chen qingfang LIAO Jiafeng 《Journal of Partial Differential Equations》 CSCD 2023年第1期68-81,共14页
In this paper,we consider the following Schrodinger-Poisson system{-Δu+ηΦu=f(x,μ)+μ^(5),x∈Ω,-ΔФ=μ^(2),x∈Ω,μ=Φ=0,x∈■Ω,whereΩis a smooth bounded domain in R^(3),η=±1 and the continuous function f... In this paper,we consider the following Schrodinger-Poisson system{-Δu+ηΦu=f(x,μ)+μ^(5),x∈Ω,-ΔФ=μ^(2),x∈Ω,μ=Φ=0,x∈■Ω,whereΩis a smooth bounded domain in R^(3),η=±1 and the continuous function f satisfies some suitable conditions.Based on the Mountain pass theorem,we prove the existence of positive ground state solutions. 展开更多
关键词 Schrodinger-Poisson system Sobolev critical exponent positive ground state solu-tion Mountain pass theorem
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N^(6)-甲基腺苷修饰及其调控蛋白在脑缺血中的表达变化及意义
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作者 叶维贞 赵顺英 +5 位作者 姜鸣钰 黄秋茹 温少红 董雯 陈青芳 刘向荣 《中国卒中杂志》 2024年第6期655-663,共9页
目的本研究通过探讨N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)修饰及其调控蛋白在脑缺血小鼠中的表达变化,为脑缺血治疗的分子靶点研究提供参考。方法取60只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组、脑缺血1 d组、脑缺血3 d组和脑缺血... 目的本研究通过探讨N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)修饰及其调控蛋白在脑缺血小鼠中的表达变化,为脑缺血治疗的分子靶点研究提供参考。方法取60只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组、脑缺血1 d组、脑缺血3 d组和脑缺血7 d组,每组各15只,采用线栓法制作右侧大脑中动脉梗死模型,于缺血1 h进行拔栓再灌注。通过RNA提取及斑点印迹实验检测小鼠缺血侧脑组织RNA m^(6)A水平;使用荧光定量逆转录PCR检测小鼠缺血侧脑组织甲基转移酶3(methyltransferase 3,Mettl3)、甲基转移酶14(methyltransferase 14,Mettl14)、FTOα-酮戊二酸酯依赖性双加氧酶(FTO alpha-ketoglutarate dependent dioxygenase,Fto)、RNA去甲基化酶alkB同源基因5(alkB homolog 5,RNA demethylase;Alkbh5)、YTH N^(6)-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTH N^(6)-methyladenosine RNA binding protein 1,Ythdf1)、Ythdf2和Ythdf3的mRNA表达水平;利用免疫印迹实验检测缺血侧脑组织Mettl3、Mettl14、Fto、Alkbh5、Ythdf1、Ythdf2和Ythdf3蛋白的表达水平;借助免疫荧光染色观察缺血侧脑组织梗死周边区神经元中Mettl3、Fto、Ythdf1、Ythdf2和Ythdf3蛋白的表达变化情况。结果与假手术组相比,脑缺血3 d组脑组织RNA的m^(6)A水平升高(1.620±0.339 vs.1.000±0.192,P=0.0343)。(1)甲基转移酶表达情况:脑缺血7 d组Mettl3mRNA水平降低(0.675±0.059 vs.1.000±0.131,P=0.0331);脑缺血1 d组Mettl3(0.548±0.107 vs.1.000±0.056,P=0.0398)、Mettl14(0.534±0.218 vs.1.000±0.018,P=0.0108)蛋白表达水平降低;脑缺血3 d组Mettl3(0.410±0.341 vs.1.000±0.056,P=0.0084)、Mettl14(0.429±0.283 vs.1.000±0.018,P=0.0026)蛋白表达水平也均下降;免疫荧光染色显示脑缺血3 d组梗死周边区神经元中Mettl3蛋白表达减少。(2)去甲基化酶表达情况:脑缺血1 d组(0.405±0.209 vs.1.000±0.142,P=0.0108)、脑缺血3 d组(0.530±0.125 vs.1.000±0.142,P=0.0412)Fto蛋白表达水平降低;免疫荧光染色显示脑缺血3 d组梗死周边区神经元中Fto表达减少。(3)m^(6)A结合蛋白表达情况:脑缺血1 d组Ythdf1mRNA水平降低(0.708±0.046 vs.1.000±0.117,P=0.0331),Ythdf3mRNA水平升高(1.473±0.093 vs.1.000±0.142,P=0.0012);脑缺血3 d组Ythdf1(0.593±0.240 vs.1.000±0.117,P=0.0034)、Ythdf2(0.664±0.177 vs.1.000±0.200,P=0.0100)mRNA水平降低,Ythdf3 mRNA水平升高(1.451±0.281 vs.1.000±0.142,P=0.0018);脑缺血1 d组Ythdf1(0.486±0.177 vs.1.000±0.091,P=0.0197)、Ythdf3(0.536±0.107 vs.1.000±0.125,P=0.0400)蛋白表达水平降低;脑缺血3 d组Ythdf1(0.404±0.299 vs.1.000±0.091,P=0.0079)、Ythdf2(0.279±0.189 vs.1.000±0.261,P=0.0136)、Ythdf3(0.450±0.220 vs.1.000±0.125,P=0.0157)蛋白表达水平均降低;免疫荧光染色显示脑缺血3 d组梗死周边区神经元中m6A结合蛋白Ythdf1、Ythdf2、Ythdf3表达均减少。结论小鼠脑缺血后可能由Fto表达下调导致m^(6)A水平升高,Ythdf1、Ythdf2、Ythdf3蛋白表达水平趋势基本一致,可能存在功能冗余。 展开更多
关键词 脑缺血 N^(6)-甲基腺苷修饰 N^(6)-甲基腺苷甲基转移酶 N^(6)-甲基腺苷去甲基化酶 N^(6)-甲基腺苷结合蛋白
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甲状腺结节恶性风险分层的C-TIRADS与ACR-TIRADS诊断效能比较研究 被引量:16
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作者 陈庆芳 吴嗣泽 《中华超声影像学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第10期861-867,共7页
目的比较分析中国版(2020)和美国放射学会(American College of Radiology,ACR)版(2017)甲状腺影像报告和数据系统(Thyroid Imaging Reporting and Data System,TIRADS)对甲状腺结节恶性风险分层评估的诊断效能,验证中国版TIRADS的价值... 目的比较分析中国版(2020)和美国放射学会(American College of Radiology,ACR)版(2017)甲状腺影像报告和数据系统(Thyroid Imaging Reporting and Data System,TIRADS)对甲状腺结节恶性风险分层评估的诊断效能,验证中国版TIRADS的价值。方法以组织病理学结果为金标准,分别采用中华医学会超声医学分会浅表器官和血管学组与中国甲状腺与乳腺超声人工智能联盟(China,C)制定的C-TIRADS和ACR-TIRADS对2015年1月至2021年3月海南医学院第一附属医院的1306例患者的1389个甲状腺局灶性病变的恶性风险度进行回顾性评估,分析两种TIRADS诊断效能及相关影响因素。结果1389个甲状腺局灶性病变中,良性结节973个,恶性结节416个,C-TIRADS 4C和ACR-TIRADS 5准确度最高。以C-TIRADS 4C和ACR-TIRADS 5为最佳截断值对甲状腺结节评估效能进行分析,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和ROC曲线下面积(AUC)分别为87.39%、89.92%、75.00%、95.38%、0.89和85.58%、91.88%、81.84%、93.71%、0.89,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论C-TIRADS和ACT-TIRADS对甲状腺结节恶性风险分层评估有很好的诊断效能;C-TIRADS 4C的诊断效能与ACR-TIRADS 5的诊断效能相当。 展开更多
关键词 超声检查 甲状腺结节 恶性风险 甲状腺成像报告和数据系统
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Existence of Positive Solutions for the Nonhomogeneous Schrodinger-Poisson System with Strong Singularity
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作者 LIAO Jiafeng chen qingfang ZHU Lijun 《Journal of Partial Differential Equations》 CSCD 2021年第2期186-200,共15页
In this paper,a class of nonhomogeneous Schrodinger-Poisson systems with strong singularity are considered.Combining with the variational method and Nehari method,we obtain a positive solution for this system which im... In this paper,a class of nonhomogeneous Schrodinger-Poisson systems with strong singularity are considered.Combining with the variational method and Nehari method,we obtain a positive solution for this system which improves the recent results in the literature. 展开更多
关键词 Schrodinger-Poisson system strong singularity positive solution Nehari method
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