敲除CRFK细胞氨基肽酶N对猫传染性腹膜炎病毒复制影响的研究

猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。

家长言行对幼儿劳动价值观的影响——基于农村大班幼儿的NVivo分析

使用NVivo质性研究软件,以24名农村大班幼儿为研究对象,了解家庭教育对幼儿劳动价值观的影响。研究发现,家长不良言行、对劳动的偏见是影响幼儿劳动价值观的主要因素,易使儿童产生消极负面的劳动观。以此建议,帮助家长树立正确劳动观,“内外力”相结合,使幼儿主动参与家庭劳动,采用积极言语塑造幼儿正向劳动认知,培养幼儿良好劳动行为。

裴斯泰洛齐劳动教育思想及对当代学前教育的启示

裴斯泰洛齐是西方教育史上首位将“教育与生产劳动相结合”这一思想付诸实践的人,在实验过程中得出劳动教育体系综合化、内容生活化、方法直观化、过程要素化、形式多样化、行为德育化六种劳动教育思想。给予学前阶段开展劳动教育六种启示:多元整合培养幼儿全面发展、生活实践是劳动教育的基石、直观教学助力幼儿劳动认知发展、分解与练习是幼儿掌握劳动技能的关键、增添劳动种类激发幼儿劳动兴趣、道德实践塑造良好劳动行为习惯。裴斯泰洛齐的劳动教育思想为当下我们开展幼儿劳动教育提供了宝贵的启示。

烧碱系统耦合高盐废水资源化应用研究

对传统高盐废水零排放技术路线进行了介绍,并提出依托氯碱企业的产业优势,发展烧碱耦合高浓盐水零排放资源化利用的运行模式和优势。

计算机视觉技术的位姿估计处理方法

针对计算机视觉中传统ICP算法(Iterative Closest Point)位姿估计的噪音问题,提出一种融合ICP算法和EPnP算法(Efficient Perspective-n-Point)的位姿估计。首先通过分析比较ICP算法、EPnE算法的优缺点,然后针对ICP算法对点云特征点未知情况下的失真问题,将EPnE算法对噪音处理的优势引入ICP算法中,提出了ICP和EPnE融合算法,结果表明上述算法在未知深度下对点云的识别更为准确,验证了上述算法的有效性,为机器视觉技术在人工智能产业的应用提供参考。

玉林地区结直肠癌患者微卫星不稳定相关研究

目的探讨玉林地区结直肠癌患者微卫星不稳定(MSI)及其与临床病理特征的关系。方法收集玉林市第一人民医院病理科2016-06—2020-12经手术切除结直肠癌1061例,通过应用免疫组化对其癌组织中错配修复蛋白表达情况进行检测,判断肿瘤MSI状态,并分析MSI与微卫星稳定(MSS)患者的临床病理特征。结果1061例患者中存在MSI者143例,占所有病例的13.47%(143/1061),MSI患者与MSS患者相比,更易发生于60岁之前(P=0.001),更易发生于右半结肠(P<0.001),不易发生P53突变(P=0.005),T分期多为≥T3(P=0.017),且不易发生淋巴结转移(P=0.038)。结论玉林地区结直肠癌患者中MSI者与MSS者相比,具有不同的临床病理特征。

猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

纳米多晶Cu-Ni合金三轴拉伸变形模拟

采用分子动力学对纳米多晶Cu-Ni合金三轴拉伸性能进行了模拟研究,从微观尺度探究了Ni含量及温度对合金拉伸性能的影响规律。结果表明,当Ni含量为10%时,最大拉应力达21.70 GPa,位错之间的相互作用是造成拉伸性能提升的重要原因。从能量、位错和堆垛层错方面对Ni含量为10%合金的性能进行了验证,表明Cu-Ni合金符合固溶弱化规律。当温度为100 K时,存在最大拉应力为22.21 GPa;当温度为900 K时,最大拉应变为0.1045。晶界原子百分比随加载温度的升高而增加,晶内原子百分比随加载温度的升高而减少;温度升高导致晶界熔化,原子无序度增加,对位错的阻碍作用下降。拉伸过程中位错密度不断降低,由位错缠结而引起的强化作用不断减少,导致高温时合金的拉伸性能下降。

“互联网+”时代中小学教师教育科研能力评价指标体系研究

本研究汇总、分析和对比了国内已有的中小学教师课题研究能力结构,在此基础上对中小学教师教育科研能力结构进行分解,结合“互联网+”时代的特点和中小学教师教育科研工作的特点,初步构建了“互联网+”中小学教师教育科研能力评价指标体系。并采用德尔菲专家咨询法先后进行了两轮专家咨询,最终确定了包含6项一级指标、21项二级指标和66项三级指标的“互联网+”中小学教师教育科研能力评价指标体系。

广州居民血脂异常患病情况及相关因素分析

目的了解广州地区居民血脂异常患病情况并分析其相关因素。方法选取2013—2017年28 480例广州地区居民的健康体检数据,采用χ~2检验和非条件logistic回归模型对广州居民血脂异常相关因素进行分析。结果广州地区居民血脂异常总患病率为41. 31%,男性患病率(49. 28%)高于女性(33. 06%)(P <0. 01)。老年居民患病率(48. 43%)高于非老年居民(40. 82%)(P <0. 01)。χ~2检验结果显示,性别、年龄、体质指数(BMI)、收缩压、舒张压、腰围、血尿酸、空腹血糖等指标是血脂异常的相关因素(P <0. 01)。logistic回归分析结果显示,性别、腰围、血尿酸值与血脂异常存在关联(P <0. 05);与女性居民相比,男性居民患血脂异常的风险是女性居民的1. 717倍(P=0. 004);与腰围正常居民相比,腰围增大居民患血脂异常的风险是其1. 710倍(P=0. 021);与正常血尿酸居民相比,患高尿酸血症居民患血脂异常的风险是正常血尿酸居民1. 505倍(P=0. 031)。结论广州地区血脂异常患者主要为男性,有腰围增大、高尿酸血症的居民患血脂异常可能性较大,需要引起重视。

铝合金车门内板成形工艺数值模拟及模具设计

在冲压拉延过程中为了减少汽车覆盖件产生起皱和破裂等缺陷,针对材料为AA6009铝合金的车门内板,运用有限元软件DYNAFORM进行拉深成形数值模拟和工艺优化。采用设置板料压边力,摩擦系数以及拉延筋的方法,以内板的成形极限图(FLD)和壁厚分布图为衡量标准,对成形缺陷产生的原因进行预测和优化,得到最佳加载方式。然后运用三维造型软件UG进行了汽车内板的凸、凹模和压边圈的设计并进行了模具零部件的设计,完成了模具装配与校核。结果表明,在凹模上设置拉延筋并且设置合理的压边力和摩擦系数,可以有效地提高工件的成形质量,防止起皱和破裂的产生,最后运用UG进行三维零件的绘制与装配,减少了模具研发的时间与试模周期。

超声处理控制鲜切甘薯褐变的生理机制

目的针对甘薯鲜切后易氧化褐变问题,研究超声处理对鲜切甘薯酶促褐变影响的机制,确定最佳的超声处理时间。方法甘薯经鲜切后,先在25℃,40 kHz下超声处理不同时间(0,5,10,20 min),然后测定其在4℃冷藏期间对甘薯色泽、丙二醛(MDA)含量、褐变相关酶活性及酚类底物含量的影响。结果适宜时间的超声处理能有效保持鲜切甘薯的亮度和色度,抑制MDA的积累,钝化多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的活性,激发苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,提高了甘薯总酚含量和抗氧化能力,延缓了褐变的发生。结论以超声处理10 min的防褐变效果最佳,处理20 min会对甘薯组织造成损伤,从而加重褐变。

TAK-242对脂多糖诱导的脓毒症脑病小鼠学习记忆功能障碍的改善作用

目的:探究TAK-242对脂多糖诱导的脓毒症脑病小鼠学习记忆功能障碍的改善效果,观察小鼠大脑病理学形态的改变,并探究起效的相关蛋白通路机制。方法:健康雌性C57BL/6小鼠80只,10～12月龄,体重20～30 g,采用随机数字表法分为4组(n=20):空白对照组(CON组)、TAK-242对照组(TAK组)、脓毒症脑病模型组(LPS组)和TAK-242预处理组(T+L组);取小鼠动脉血及肺脏组织检测外周炎症情况,应用旷场、高架十字和Morris水迷宫实验观察小鼠的行为学变化,后进行免疫组化实验观察海马区小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的形态和数量,最后通过Western blot实验检测海马区NF-κB p65、TLR4、Aβ1-42和p-tau (S396)蛋白的表达情况。结果:与CON组相比,其余各组小鼠动脉血气和肺脏组织没有出现明显炎症改变;LPS组小鼠在旷场中央区活动时间和穿过中央区次数都显著降低(P<0.01),进入高架十字开臂次数和探头区探头次数明显减少(P<0.05),水迷宫空间探索潜伏期明显延长(P<0.05),海马区Iba-1活化数目显著增加(P<0.05),NF-κB p65、TLR4、Aβ1-42和p-tau (S396)蛋白表达量明显增加(P<0.01)。与LPS组相比,T+L组小鼠在旷场中央区活动时间和穿过中央区次数显著增加(P<0.01),进入高架十字开臂次数和探头区探头次数明显增加(P<0.05),水迷宫空间探索潜伏期明显缩短(P<0.05),海马区Iba-1活化数目显著减少(P<0.05),NF-κB p65、TLR4、Aβ1-42和p-tau (S396)蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:TAK-242对脓毒症脑病引起的学习记忆功能障碍具有一定的预防和治疗作用,其作用机制可能与抑制中枢小胶质细胞活化的数目及下调蛋白NF-κB p65、TLR4、Aβ1-42和p-tau (S396)的表达水平有关。

老年带状疱疹后神经痛病人外周血Th17/Treg细胞及相关细胞因子的表达

目的:探讨老年带状疱疹后神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)病人外周血中Th17、Treg细胞及相关细胞因子的表达及其临床意义.方法:采用流式细胞术检测60例老年带状疱疹后神经痛病人及30例健康对照者外周血中Th17、Treg细胞水平,并计算Th17/Treg比率,ELISA方法检测外周血中白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白介素-17(Interleukin-17,IL-17)及人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果:与对照组相比,病例组病人外周血Th17的含量及IL-6、IL-17表达水平显著降低(P<0.05);Treg细胞含量及IL-10、TNF-α表达水平显著升高(P<0.05),且Th17/Treg比率较对照组降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:Th17细胞在PHN外周血中显著降低,Treg细胞显著增高,与二者相关的细胞因子也相应变化,Th17/Treg比率显著降低,提示两者通过多种机制参与机体的免疫应答,Th17/Treg的失衡可能在老年PHN的发病机制中起重要作用.

氢吗啡酮鞘内自控镇痛治疗难治性癌痛的临床研究

目的:观察鞘内氢吗啡酮自控镇痛治疗难治性癌痛的疗效。方法:选取难治性癌性疼痛病人40例,行鞘内输注港植入术。观察并记录病人鞘内治疗前后视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)评分、淋巴细胞亚群、SF-36健康调查简表(the MOS 36-Item Short Form Health Survey,SF-36)生活质量评分、便秘的发生率进行自身对照研究。结果:氢吗啡酮鞘内自控镇痛后(T1,T2)病人VAS疼痛评分与(T0)相比明显降低(P<0.01);SF-36生活质量评分(T2)较术前(T0)有明显改善(P<0.001);CD_3^+、CD_4^+、CD_4^+/CD_8^+以及NK细胞水平(T2)较术前(T0)有改善(P<0.05);鞘内镇痛便秘发生率较术前显著降低(P<0.001)。结论:氢吗啡酮鞘内自控镇痛治疗难治性癌性疼痛能改善病人的疼痛、生活质量和免疫状态,降低便秘发生率。

仿生超疏水表面在海洋腐蚀防护中的应用

在介绍超疏水表面相关理论的基础上,总结了现有仿生超疏水表面的制备方法及其海洋腐蚀防护机制研究,重点分析了超疏水表面在实际应用中面临的水下稳定性和机械稳定性两方面问题及相关对策,并对超疏水表面应用的未来发展方向进行了展望。

一种改进差分进化算法的单关节机械臂控制方法

针对差分进化算法控制下机械臂控制系统运动轨迹精度不高问题,提出一种改进差分算法的机械臂控制方法。以单关节机械臂为研究对象,通过假设单关节机械臂摆线运动方程,采用比例微分控制律进行实际轨迹跟踪,优化轨迹中控制系统所消耗的能量,进而得到一组最优的离散值;对其偏差值使用三次样条插值法,从而得到机械臂实际最优轨迹。仿真结果表明,改进差分算法比传统差分算法处理所得结果误差普遍缩小了0.15%,且机械臂运动能耗较低。

中国卫生人力资源配置水平的空间分析

目的:探讨我国近十年来卫生人力资源在省级层面的空间分布及变化特征,促进卫生人力资源的优化配置。方法:运用全局空间自相关、LISA检验及相对发展率指数对我国卫生人力资源的空间分布及发展趋势进行分析。结果:我国千人口卫生人力资源配置总体上呈现由北向南递减的趋势;全局Moran’sI显示我国卫生人力资源聚集水平不断下降,地区差异不断缩小;LISA结果显示天津、石家庄和广东地区卫生人力资源存在局部空间自相关且差异具有统计学意义;不同时间段的卫生人力资源增长空间格局及其演变趋势与卫生人力资源空间格局变化并不完全一致。结论:尽管我国卫生人力资源配置的总体空间分布差距在不断缩小,但省级水平上仍存在分布的不均衡。基于空间统计分析的卫生人力资源信息有助于可视化的展示我国卫生人力资源的分布,为政府管理部门决策提供依据。

间歇热处理对柑橘冷害调控研究

目的针对柑橘低温贮藏易冷害问题,研究间歇热处理对柑橘冷害的调控效果。方法以浙江省衢州市沃柑品种为实验材料,采用连续热处理(50℃下热水处理180 s)和间歇热处理(50℃下热水处理60 s—20℃常温下回温10 min—50℃下热水处理60 s—20℃常温下回温10 min—50℃下热水处理60 s—20℃常温下回温10 min)等2种方式处理柑橘。结果与对照组相比,热处理能够降低柑橘的冷害指数,抑制相对电导率和丙二醛(MDA)含量的上升,提高柑橘的过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,且间歇热处理组柑橘的抗冷效果显著优于连续热处理组(P<0.05)。贮藏50 d后,间歇热处理组的冷害指数比对照组低19.32%,MDA质量摩尔浓度分别比对照组和连续热处理组低0.91μmol/g和0.37μmol/g,POD活性分别较对照组和连续热处理组增加了0.72倍和0.19倍,SOD活性分别比对照组和连续热处理组增加5.231 U/g和1.776 U/g。结论热处理能够延缓柑橘冷害,且间歇热处理对沃柑的保鲜效果优于连续热处理。

慢性乙型肝炎患者外周单核细胞衍生的巨噬细胞的极化状态与HBV DNA的相关性及其动态变化

【目的】为了研究慢性乙型肝炎(CHB)患者在核苷(酸)类(恩替卡韦(ETV)或替诺福韦(TDF))抗病毒治疗过程中外周单核细胞衍生的巨噬细胞(MDMs)的极化化状态的动态变化以及与HBVDNA、HBeAg的相关性。【方法】共纳入101例CHB患者和20名健康人的外周血标本。通过外周血单核细胞技术(PBMC)分离培养获得86例CHB患者和12例健康人的MDMs。采用流式细胞技术检测MDMs的特异性标志物(CD80,HLA-DR,CD163和CD206)的表达,从而评估MDMs的极化状态(即M1型/M2型极化状态)。通过qPCR检测15例CHB患者和8例健康对照中MDMs的炎症因子的mRNA水平表达。【结果】我们发现在CHB患者外周血中CD163^(+)CD206^(+)MDMs(M2型MDMs)的比例较正常人群显著减少(P=0.030)。同时,抑炎因子IL-10的mRNA水平表达也明显下降(P=0.040)。随着核苷(酸)类似物抗病毒治疗的进展,CD163^(+)CD206^(+)MDMs(M2型)的比例逐渐增加(P<0.001),而CD80^(+)HLA-DR^(+)MDMs(M1型)逐渐地降低(P=0.005)。另外,M2型MDMs与HBeAg(P=0.019),HBVDNA水平(P=0.002),AST(P=0.048)和ALT(P=0.030)均呈负相关。ROC曲线分析表明M2型MDMs对CHB抗病毒治疗的病毒学应答率有一定的预测作用,可预测HBVDNA阴转率[ROC 95%CI为0.705(0.594,0.815)]和HBeAg的血清转化率[ROC 95%CI为0.740(0.634,0.847)]。【结论】CHB患者在核苷(酸)类抗病毒治疗过程中MDMs极化状态呈现规律动态变化,M2型MDMs与HBVDNA和HBeAg水平呈负相关,对CHB抗病毒治疗的病毒学应答率有一定预测作用。