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一株基因Ⅱ型鹅星状病毒的分离鉴定及培养特性
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作者 兰琴 刘荣昌 +10 位作者 张佳雪 陈炜 焦文龙 梁齐章 江南松 万春和 程龙飞 陈红梅 傅秋玲 傅光华 黄瑜 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期378-386,共9页
【目的】明确鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的致病性和体外培养特性。【方法】对广东某鹅场表现为内脏和关节痛风的发病鹅组织样品进行病原学检测、病毒分离鉴定、病毒基因序列测定与分析、病毒培养特性及致病性研究。【结果】从... 【目的】明确鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)的致病性和体外培养特性。【方法】对广东某鹅场表现为内脏和关节痛风的发病鹅组织样品进行病原学检测、病毒分离鉴定、病毒基因序列测定与分析、病毒培养特性及致病性研究。【结果】从中分离到1株鹅星状病毒,命名为GD2208株;ORF2基因核苷酸序列比对分析显示,该毒株与基因Ⅱ型鹅星状病毒(GAstV-Ⅱ)参考株同源性最高,为97.4%~99.1%;进化树分析显示该毒株与GAstV-Ⅱ参考株处于同一进化分支。动物回归试验显示,以该毒株感染3日龄雏鹅后致死率为20%,感染鹅临床症状、剖检病变及病理组织学变化与自然发病鹅相似。禽胚及细胞适应性研究结果显示,该毒株能在鹅胚中稳定增殖,但盲传4代后仍无法适应SPF鸡胚和番鸭胚;病毒在GEK和LMH细胞中均能稳定增殖且可见明显细胞病变,在DF-1上可稳定繁殖,但盲传至8代后仍未见细胞病变。【结论】本研究自表现痛风症状雏鹅中分离到1株GAstV-Ⅱ毒株,该毒株感染3日龄雏鹅可发生典型痛风症状,对鹅胚、GEK、LMH和DF-1细胞均有一定适应性,以上结果为进一步开展GAstV的致病机制、疫苗和药物研发奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 分离 鉴定 培养特性
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鸭3型甲肝病毒的分离鉴定与VP1基因序列分析
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作者 焦文龙 傅秋玲 +10 位作者 林永强 刘友生 刘荣昌 梁齐章 江南松 万春和 程龙飞 陈红梅 林建生 傅光华 黄瑜 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期898-905,共8页
【目的】探明引起安徽某鸭场雏鸭肝脏出血和大量死亡的病原及其遗传进化特征。【方法】对安徽省某鸭场的病死雏鸭中采集的出血肝脏开展鸭已知病原核酸检测、病原分离鉴定和动物回归试验,在明确其病原为鸭3型甲肝病毒(Duck hepatitis A v... 【目的】探明引起安徽某鸭场雏鸭肝脏出血和大量死亡的病原及其遗传进化特征。【方法】对安徽省某鸭场的病死雏鸭中采集的出血肝脏开展鸭已知病原核酸检测、病原分离鉴定和动物回归试验,在明确其病原为鸭3型甲肝病毒(Duck hepatitis A virus type 3,DHAV-3)的基础上分析其VP1基因序列分子特征。【结果】细菌分离结果显示,未分离到细菌;经病毒核酸(RT-)PCR检测结果显示,鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)核酸阳性,未检测出其他已知引起鸭肝出血的病毒核酸。将该阳性样品经鸭胚进行病毒分离与传代,发现接种后鸭胚发生死亡,胚体全身出血,对第5代尿囊液经RT-PCR检测为DHAV-3,将其命名为AH230225。经测定,该分离株的鸭胚半数致死量(Effective lethal dose 50,ELD_(50))为10^(−4.17)/0.1 mL。动物回归试验表明,该毒株对樱桃谷雏鸭的致死率为80%,且攻毒死亡鸭肝脏和肾脏的剖检病变与临床典型病变相近。对该分离毒的VP1基因核苷酸序列进行同源性分析,显示AH230225株的VP1基因核苷酸序列与AH07株DHAV-3(安徽分离株)的同源性最高,为98.8%,与GenBank登录的10株DHAV-3分离株VP1基因核苷酸序列同源性为90.4%~98.8%,而与DHAV-1和DHAV-2的VP1基因核苷酸序列同源性分别为62.1%~63.0%、64.6%~64.9%;基于VP1蛋白氨基酸序列的遗传进化显示,该分离株与AH07株DHAV-3处于同一小进化分支上,亲缘关系最近;而与SD01株、G株和韩国株(AP-04009、AP-03337)等亲缘关系较远,即远离DHAV-1和DHAV-2进化分支。【结论】引起安徽某鸭场雏鸭肝脏出血和大量死亡的病原为鸭3型甲肝病毒DHAV-3,同时明确了该毒株VP1基因的分子特征及遗传进化规律,为深入研究DHAV-3的致病机制和制定防控措施提供科学依据。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 分离鉴定 VP1基因
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酸性循环侵蚀下灰岩-土体渗透特性研究
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作者 李杰 程龙飞 +2 位作者 孙大典 任怡桦 李雙衡 《人民长江》 北大核心 2024年第7期212-220,共9页
为研究酸性循环侵蚀程度对灰岩-土体渗透特性的影响,将酸性循环腐蚀后的灰岩试样与黏性红土制成岩-土组合体,在试验设置的4~14水力梯度范围内开展变水头试验,并引入有效腐蚀深度建立了界面渗透系数分析计算模型。结果表明:灰岩-土组合... 为研究酸性循环侵蚀程度对灰岩-土体渗透特性的影响,将酸性循环腐蚀后的灰岩试样与黏性红土制成岩-土组合体,在试验设置的4~14水力梯度范围内开展变水头试验,并引入有效腐蚀深度建立了界面渗透系数分析计算模型。结果表明:灰岩-土组合体渗透曲线呈短暂下降—相对稳定—逐渐上升3个阶段变化,拟合渗流速度与水力梯度具有良好线性关系,符合达西定律;灰岩-土组合体渗透系数随灰岩腐蚀程度增加而增大,增幅先减小后增加;灰岩界面渗透系数随腐蚀程度增大而减小,减幅急剧降低,推断是孔隙曲折度变化对界面渗透性造成的影响;对比灰岩-土组合体理论渗水量与实际渗水量可知,模型在短暂下降-相对稳定渗透阶段误差较小,模型适用性较好;结合灰岩试样腐蚀后SEM图像、灰岩-土组合体与纯土渗透曲线对比及渗透作用下灰岩质量损失可知,岩体结构的存在与岩样微观结构的改变,会导致灰岩-土体渗透性增强和抗水力侵蚀能力降低。 展开更多
关键词 水力侵蚀 酸性循环侵蚀 灰岩-土组合体 灰岩界面 渗透特性
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新工科背景下安全应急类人才KAPIV一体化培养模式探索
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作者 朱新娜 郭正超 +1 位作者 程龙飞 付亚男 《安全》 2024年第1期63-66,共4页
为加快安全应急类专业的升级改造,结合新工科建设要求,基于资料分析和经验总结,首先分析当前专业课堂建设和教学中存在的问题,包括信息技术教育不足,部分核心课程内容重复,教学模式与方法陈旧单一,学生学习的目的不明确,知识、实践、创... 为加快安全应急类专业的升级改造,结合新工科建设要求,基于资料分析和经验总结,首先分析当前专业课堂建设和教学中存在的问题,包括信息技术教育不足,部分核心课程内容重复,教学模式与方法陈旧单一,学生学习的目的不明确,知识、实践、创新与能力培养缺少深度融合等;然后进行教学改革,将具有强烈目标导向的多门课程的核心知识点,按其内在联系进行整合,制作成微课程体系;最后依托微课程体系,以教学项目为载体和抓手,以学生为中心,将知识、能力、实践、创新、立德树人要素有机结合,开展KAPIV一体化人才培养。 展开更多
关键词 新工科 安全应急 KAPIV 一体化培养
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鸭腺病毒3型PCR检测方法的建立 被引量:11
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作者 万春和 陈翠腾 +6 位作者 施少华 程龙飞 傅光华 刘荣昌 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期20-23,共4页
鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭... 鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭2型腺病毒(DAdV-2)和DAdV-3的Fiber 2基因特征,建立特异性检测DAdV-3的PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为54℃,对DAdV-3扩增片段大小为548 bp;敏感性强,最低检测限为36.4 pg;特异性好,对DAdV-A、FAdV-4、鸭病毒性肠炎(DEV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)均无特异性扩增。表明该方法可有效用于开展新发DAdV-3的流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 FIBER 2基因 PCR
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心内科冠心病合并肺部感染患者血清PCT、CRP、IL-6水平变化及临床意义 被引量:28
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作者 詹永忠 程龙飞 林旭城 《中国医药导报》 CAS 2022年第5期68-70,78,共4页
目的探讨心内科冠心病合并肺部感染患者血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化及临床意义。方法回顾性分析2018年3月至2021年3月在广东省潮州市中心医院(以下简称“我院”)就诊的80例冠心病患者的诊疗情况,... 目的探讨心内科冠心病合并肺部感染患者血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化及临床意义。方法回顾性分析2018年3月至2021年3月在广东省潮州市中心医院(以下简称“我院”)就诊的80例冠心病患者的诊疗情况,根据肺部感染诊断标准将其分为感染组(32例)和非感染组(48例),另选择同期在我院体检的健康人群50例为对照组。检测比较各组血清PCT、CRP、IL-6水平,并根据Gensini评分评估感染组冠脉病变程度,采用Pearson直线相关分析PCT、CRP、IL-6水平与Gensini评分的相关性。结果感染组和非感染组血清PCT、CRP、IL-6水平明显高于对照组,感染组血清PCT、CRP、IL-6水平高于非感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组Gensini评分比较,差异有高度统计学意义(P<0.01)。Pearson直线相关分析显示,感染组患者血清PCT(r=0.603)、CRP(r=0.685)、IL-6(r=0.574)水平与Gensini评分呈正相关(P<0.01)。结论心内科冠心病合并肺部感染患者血清PCT、CRP、IL-6水平明显升高,以上指标的检测对冠心病合并肺部感染具有一定的诊断价值。 展开更多
关键词 冠心病 肺部感染 降钙素原 C-反应蛋白 白细胞介素-6 相关性
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鸭3型腺病毒的分离鉴定及其fiber基因分析 被引量:7
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作者 程龙飞 刘荣昌 +6 位作者 傅光华 施少华 万春和 陈红梅 傅秋玲 陈翠腾 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第11期47-50,共4页
为确诊引起福建某番鸭场以肝脏肿大出血为特征的病原,采用病毒分离、PCR检测、动物回归试验、电镜观察、组织病理学诊断、fiber基因序列测定与分析等方法进行研究。结果显示:所采样品盲传15代后获得病毒,PCR可以扩增出鸭3型腺病毒(DAdV... 为确诊引起福建某番鸭场以肝脏肿大出血为特征的病原,采用病毒分离、PCR检测、动物回归试验、电镜观察、组织病理学诊断、fiber基因序列测定与分析等方法进行研究。结果显示:所采样品盲传15代后获得病毒,PCR可以扩增出鸭3型腺病毒(DAdV-3)的特异性片段,分离病毒可引起3日龄番鸭发病死亡,死亡率为28.6%。人工感染死亡鸭的肝脏超薄切片呈现大量晶格状排列的典型禽腺病毒颗粒,肝脏的组织病理学以'包涵体肝炎'病变为特征。其fiber基因与已报道的DAdV-3毒株核苷酸同源性均为100%。以上结果证实分离的病原为DAdV-3。本试验为DAdV-3的诊断提供了科学依据。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 分离 鉴定 fiber基因
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番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性及rpoB基因突变分析 被引量:4
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作者 林彬彬 谢碧林 +5 位作者 王秀祯 翁汉东 程龙飞 傅光华 刘荣昌 林志敏 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1337-1343,共7页
【目的】了解福建省莆田市番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性及rpoB基因突变情况。【方法】无菌采集病死番鸭的脑、心脏、肝脏进行细菌分离纯化,提取分离株基因组DNA,利用16S rDNA基因特异性引物进行PCR鉴定,纸片法进行药敏试验,扩增并分析r... 【目的】了解福建省莆田市番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性及rpoB基因突变情况。【方法】无菌采集病死番鸭的脑、心脏、肝脏进行细菌分离纯化,提取分离株基因组DNA,利用16S rDNA基因特异性引物进行PCR鉴定,纸片法进行药敏试验,扩增并分析rpoB基因利福平耐药决定区序列。【结果】共分离到49株鸭疫里默氏杆菌,这些菌株均表现广谱耐药性,耐药谱介于11~21种药物,分离株对氨基糖苷类、大环内酯类、复方新诺明、多黏菌素B和利福平等药物的耐药性高,对四环素类、β-内酰胺类和氟苯尼考等药物的敏感性高。44株利福平耐药菌的rpoB基因出现R494K(43/44)单点突变和R494K和V382I(1/44)的双点突变,R494K单点突变也在1株利福平敏感菌中发现。【结论】近期防治鸭传染性浆膜炎可首选四环素类、β-内酰胺类和氟苯尼考等药物,利福平耐药决定区氨基酸的R494K单点突变可能是鸭疫里默氏杆菌对利福平耐药的主要机制之一。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 分离 鉴定 耐药性 RPOB基因
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鸭瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:4
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期722-728,共7页
根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1~1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线... 根据鸭瘟病毒(DEV) gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×10~1~1.0×10~6拷贝·μL^(-1)时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL^(-1);特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%~1.14%和0.69%~2.40%.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71%(12/14)、71.43%(10/14)和57.14%(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100%.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 GE基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR方法
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环丙沙星对噬菌体RAP44裂解鸭疫里默氏杆菌的影响 被引量:4
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作者 程龙飞 刘荣昌 +5 位作者 傅光华 万春和 陈红梅 施少华 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2020年第8期35-39,共5页
为探明环丙沙星(CIP)对噬菌体裂解鸭疫里默氏杆菌的影响,采用微量稀释法测定CIP对鸭疫里默氏杆菌RAf71株的最小抑菌浓度(MIC),在亚MIC CIP下,测定不同浓度噬菌体RAP44对RAf71生长的影响、RAP44噬菌斑的形成、增殖效果、不同噬菌体株对RA... 为探明环丙沙星(CIP)对噬菌体裂解鸭疫里默氏杆菌的影响,采用微量稀释法测定CIP对鸭疫里默氏杆菌RAf71株的最小抑菌浓度(MIC),在亚MIC CIP下,测定不同浓度噬菌体RAP44对RAf71生长的影响、RAP44噬菌斑的形成、增殖效果、不同噬菌体株对RAf71的裂解效果。将RAf71人工感染番鸭,比较噬菌体(皮下注射噬菌体1×10^9pfu/只)、CIP(治疗剂量,浓度为250 mg/L CIP饮用)、噬菌体和治疗剂量CIP联合、噬菌体和减半治疗剂量CIP联合的治疗效果。结果显示:CIP对RAf71株的MIC为16μg/mL,亚MIC的CIP可以使噬菌体RAP44对RAf71的抑制作用提高2~8倍,不影响噬菌斑的形成,能促进RAP44的增殖,使部分噬菌体株获得对RAf71的裂解能力;RAP44可以降低RAf71株攻击引起的死亡,治疗剂量CIP与RAP44合用能起到协同作用,进一步降低死亡率。研究表明,治疗鸭疫里默氏杆菌感染,噬菌体和CIP具有协同作用。该研究为治疗鸭疫里默氏杆菌病提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 噬菌体 环丙沙星 协同作用
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宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体筛选及生物学特性研究 被引量:3
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作者 程龙飞 廖维连 +7 位作者 陈红梅 江南松 傅秋玲 万春和 刘荣昌 施少华 黄瑜 傅光华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1169-1176,共8页
【目的】筛选宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体,作为治疗用噬菌体组合的候选毒株。【方法】以不同含量的噬菌体进行噬斑分析测定35株噬菌体的噬菌谱;利用透射电镜观察、热与酸碱稳定性评估、最佳感染复数(MOI)测定、一步生长试验、杀菌试验分析... 【目的】筛选宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体,作为治疗用噬菌体组合的候选毒株。【方法】以不同含量的噬菌体进行噬斑分析测定35株噬菌体的噬菌谱;利用透射电镜观察、热与酸碱稳定性评估、最佳感染复数(MOI)测定、一步生长试验、杀菌试验分析噬菌体的形态结构和部分生物学特性。【结果】35株噬菌体中vB_RanS_202的裂解谱最宽,能裂解42%(42/100)的鸭疫里默氏菌,包括血清1、2、6、10、11和13型共6种血清型菌株。该噬菌体由直径约60 nm的截面为六边形的头部和长约220 nm的尾部组成,不耐热,效价为1.0×10^(7)PFU/mL的噬菌体,经50℃水浴80 min或60℃水浴20 min,即降为1.8×10^(7)~2.6×10^(7)PFU/mL。在pH 5.0~9.0的环境中能维持活性。以RAf488为宿主菌测得其最佳MOI为0.01。一步生长曲线显示,其潜伏期和暴发期分别为60和75 min,平均裂解量约为150 PFU/cell。在宿主菌RAf488中的杀菌试验结果显示,MOI在0.004~0.016时,vB_RanS_202均具有杀菌作用。【结论】噬菌体vB_RanS_202具有宽裂解谱的特点,具备在液体培养基中的杀菌能力。本研究结果为后续噬菌体治疗用毒株的筛选提供参考。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 噬菌体 噬菌谱 生物学特性
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禽源多杀性巴氏杆菌拓扑异构酶基因突变与耐恩诺沙星的相关性 被引量:3
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作者 程龙飞 刘荣昌 +6 位作者 陈红梅 万春和 傅光华 施少华 傅秋玲 陈翠腾 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第17期61-63,共3页
为探讨gyrA和parC基因的突变与禽源多杀性巴氏杆菌耐氟喹诺酮类药的相关性,采用微量稀释法测定84株临床分离菌对恩诺沙星的敏感性,PCR扩增其gyrA和parC基因并测序,分析基因编码的氨基酸序列与耐药表型的关系发现,GyrA发生单点突变(S94→... 为探讨gyrA和parC基因的突变与禽源多杀性巴氏杆菌耐氟喹诺酮类药的相关性,采用微量稀释法测定84株临床分离菌对恩诺沙星的敏感性,PCR扩增其gyrA和parC基因并测序,分析基因编码的氨基酸序列与耐药表型的关系发现,GyrA发生单点突变(S94→I或S94→R)时,细菌对恩诺沙星的耐受性明显提高,发生双点突变(S94→I和D98→N),细菌则必然获得对恩诺沙星的耐药性。ParC发生单点突变(S84→L)时,细菌对恩诺沙星的耐受性也提高。ParC的变异能与GyrA的变异起协同作用,共同提高细菌对恩诺沙星的耐受性。这些结果为今后以gyrA和parC基因为靶位,建立快速鉴定禽源多杀性巴氏杆菌对氟喹诺酮类药耐药性的方法提供理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 拓扑异构酶 基因突变 氟喹诺酮 耐药
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鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 万春和 程龙飞 +6 位作者 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 刘荣昌 林建生 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第6期1661-1667,共7页
为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段... 为明确虎皮鹦鹉源鹦鹉幼雏病病毒(budgerigar fledgling disease polyomavirus,BFPyV)福建株(命名为FJ-2016株)结构蛋白VP1基因特征,本研究针对BFPyVVP1基因特点设计特异性引物,利用PCR方法扩增获得FJ-2016株VP1基因全长序列,目的片段经胶回收后进行克隆测序。结果显示,BFPyV FJ-2016株VP1基因全长为1 032bp,编码343个氨基酸。所编码VP1蛋白的理论等电点为5.77,不稳定指数为40.91,是不稳定蛋白;脂肪系数为74.72;总平均疏水性指数为-0.366。将获得的VP1基因序列提交至GenBank,登录号为:MG148345。核苷酸同源性分析表明,不同时间、地区和品种BFPyV的VP1基因十分保守,相互之间的核苷酸同源性均在99.1%以上。遗传进化分析发现,不同时间和地域BFPyV相互之间亲缘关系较近,但可细分为两个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2)。从宿主品种来看,虎皮鹦鹉源BFPyV各分离株的遗传进化与分离时间及地域无明显关系,虎皮鹦鹉源BFPyV分离株在Clade 1和Clade 2分支均有分布。本研究首次证实福建地区虎皮鹦鹉中存在BFPyV感染,相关研究结果为丰富不同地区BFPyV分子流行病学数据提供参考。 展开更多
关键词 鹦鹉幼雏病病毒 虎皮鹦鹉 VP1基因 序列分析
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无筋砌体农居地震弹塑性有限元研究 被引量:2
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作者 付亚男 熊礼全 +4 位作者 闫磊 苏启旺 蔡高创 程龙飞 郭远臣 《世界地震工程》 CSCD 北大核心 2019年第4期18-32,共15页
利用ABAQUS软件对既有的砌体墙试验结果进行了数值模拟,验证了模型的正确性以及混凝土损伤塑性模型对模拟砌体结构受力性能的可用性。在此基础上,借助实地调查获得的结构参数和材料性能数据,以重庆典型农居建筑为例,建立了无筋砌体农居... 利用ABAQUS软件对既有的砌体墙试验结果进行了数值模拟,验证了模型的正确性以及混凝土损伤塑性模型对模拟砌体结构受力性能的可用性。在此基础上,借助实地调查获得的结构参数和材料性能数据,以重庆典型农居建筑为例,建立了无筋砌体农居的三维有限元模型,对数值模型进行了动力特性分析和不同烈度下多遇及罕遇地震的动力弹塑性时程分析,并建议了无筋砌体结构农居在不同地震烈度破坏下墙体表面积受拉损伤率的临界值。最后,利用既有文献提出的层间位移角限值,分析了该农居的破坏程度,比较了墙体表面积受拉损伤率和层间位移角限值衡量砌体结构的破坏程度。分析结果表明:提出的墙体表面积受拉损伤率和层间位移角限值衡量砌体结构破坏程度吻合良好;当墙体表面积受拉损伤率小于1%时,结构轻微破坏;当位于1%~5%时,发生中等程度破坏;当位于5%~30%时,发生严重破坏;当大于30%时,结构倒塌。 展开更多
关键词 砌体结构农居 受拉损伤 层间位移角 动力时程分析 墙体表面积受拉损伤
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鸭巴泰病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 万春和 傅光华 +5 位作者 刘荣昌 程龙飞 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2018年第12期21-25,共5页
为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,研究根据鸭BATV非结构蛋白(NSs)基因特征,设计引物,经条件优化后建立检测BATV感染的qRT-PCR方法。用建立的qRT-PCR方法对临床72份疑似BATV感染的病... 为建立鸭巴泰病毒(Batai virus,BATV)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,研究根据鸭BATV非结构蛋白(NSs)基因特征,设计引物,经条件优化后建立检测BATV感染的qRT-PCR方法。用建立的qRT-PCR方法对临床72份疑似BATV感染的病料进行检测,并对阳性样品进行病毒分离,评价两种方法的符合率。结果表明,当病毒NS基因含量为3.59×10~2~3.59×10~7拷贝/μL时有良好的线性扩增,其扩增相关系数为0.9994,扩增效率为98%。最低检测限为3.59×10~2拷贝/μL;扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(81.60±0.16)℃,对鸭源常见病毒(如鸭甲肝病毒、禽坦布苏病毒、禽Ⅰ型副黏病毒、H9N2亚型禽流感病毒、新型鸭呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒)检测均为阴性,组内变异系数和组间变异系数分别为0.49%~1.99%和0.58%~2.18%。临床送检的72份病料SYBRⅠ实时荧光定量PCR方法的阳性率为4.17%(3/72),并分离到2株鸭源BATV,2种方法的阳性符合率为66.67%(2/3)。建立的基于SYBRⅠ检测BATV的qRT-PCR方法、特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于BATV的分子流行病学研究。 展开更多
关键词 鸭巴泰病毒 NS基因 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
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鸭腺病毒A型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 万春和 刘荣昌 +5 位作者 程龙飞 施少华 傅光华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第5期1341-1348,共8页
试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,... 试验旨在建立鸭腺病毒A型(duck adenovirus A,DAdV-A)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。根据DAdV-A Hexon基因序列设计特异性引物和探针,建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、灵敏性、重复性进行检测,用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和常规PCR方法同时对福建地区临床收集的85份番鸭源病料进行DAdV-A感染的检测,比较其符合率。结果表明,试验成功建立了检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,其扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.9%;特异性强,对鸭常见病原(如鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;灵敏度高,最低检测限为8.37拷贝/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.54%~1.28%和0.61%~2.39%。对临床送检的85份病料,TaqMan实时荧光定量PCR方法的阳性率为7.06%(6/85),PCR方法的阳性率为5.88%(5/85),且PCR检测的阳性样品经TaqMan实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究建立了基于TaqMan探针检测DAdV-A的实时荧光定量PCR检测方法,为鸭群中开展DAdV-A的分子流行病学研究提供了有效技术手段。 展开更多
关键词 鸭腺病毒A型 Hexon基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR方法
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引起种(蛋)鸭输卵管积液综合征的新发病毒——C型禽偏肺病毒 被引量:1
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作者 傅秋玲 江南松 +12 位作者 梁齐章 刘荣昌 万春和 程龙飞 陈红梅 林琳 焦文龙 吴胜会 江斌 郑小兰 林建生 傅光华 黄瑜 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1387-1394,共8页
【目的】明确引起种(蛋)鸭特征性输卵管积液和产蛋下降的新发疫病[俗称种(蛋)鸭输卵管积液综合征]的病原。【方法】对自闽粤赣浙皖桂等地产蛋率较高的部分鸭群表现以输卵管内乳糜性积液、黏膜出血水肿增厚及不同程度产蛋下降为特征的病(... 【目的】明确引起种(蛋)鸭特征性输卵管积液和产蛋下降的新发疫病[俗称种(蛋)鸭输卵管积液综合征]的病原。【方法】对自闽粤赣浙皖桂等地产蛋率较高的部分鸭群表现以输卵管内乳糜性积液、黏膜出血水肿增厚及不同程度产蛋下降为特征的病(死)麻鸭、樱桃谷种鸭和种番鸭中采集的样品(输卵管积液、输卵管黏膜、卵巢和肝脾脏器),开展鸭已知病原核酸监测、病原分离鉴定和开产麻鸭人工感染试验。【结果】细菌分离显示,输卵管积液里未分离到细菌,排除细菌感染引起;经病毒核酸监测,只有C型禽偏肺病毒(Avain metapneumoviurs subgroup C,aMPV/C)阳性,未检测到其他引起禽产蛋异常的病毒;以aMPV/C单一阳性的样品经鸭胚进行病毒分离与传代,发现接种鸭胚未见死亡,但胚体表面稍水肿和出血、肝脏出血;对第5代鸭胚液进行RT-PCR检测,结果显示a MPV/C分离阳性率为72.2%;对获得的4株分离株(JX2126、FJ2228、FJ2375和GD2381株)的基因片段进行测序和序列分析发现,该片段与最早报道的番鸭a MPV/C法国分离株(Muscovy duck/1999/99178/France)同源性最高,为96.1%,而与A、B、D型禽偏肺病毒(Avain metapneumoviurs subgroup A,B,D,aMPV/A,B,D)分离株的同源性仅分别为67.8%~68.7%、66.1%~66.8%和71.4%,与人偏肺病毒(Human metapneumoviurs,hMPV)分离株的同源性为67.7%~68.3%;遗传进化分析表明,以上4株分离株与a MPV/C处于同一进化分支上,而与其他亚型aMPV和hMPV亲缘关系较远;经开产麻鸭人工感染试验,成功复制出与自然感染病例相同的临床病症,并能回收到病毒。【结论】明确引起种(蛋)鸭输卵管积液综合征的病原为C型禽偏肺病毒。本研究为该病的快速准确诊断和精准防控提供科学依据。 展开更多
关键词 种(蛋)鸭 输卵管积液综合征 产蛋下降 输卵管积液 C型禽偏肺病毒 分离与鉴定
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乳胶凝集试验检测鸭3型腺病毒方法的建立及应用 被引量:1
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作者 程龙飞 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 傅光华 施少华 万春和 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2020年第6期48-51,共4页
为建立快速检测鸭3型腺病毒的方法,试验采用纯化的兔抗鸭3型腺病毒血清致敏聚苯乙烯乳胶,建立了乳胶凝集试验。结果显示,致敏乳胶不自凝,可于4℃保存半年。该方法特异性强,重复性好,与琼脂扩散试验的符合率为100%。对临床样品的检测,乳... 为建立快速检测鸭3型腺病毒的方法,试验采用纯化的兔抗鸭3型腺病毒血清致敏聚苯乙烯乳胶,建立了乳胶凝集试验。结果显示,致敏乳胶不自凝,可于4℃保存半年。该方法特异性强,重复性好,与琼脂扩散试验的符合率为100%。对临床样品的检测,乳胶凝集试验与PCR检测方法的符合率为85.4%。试验表明,乳胶凝集试验存在一定的漏检率,但由于其简单、快速、无需昂贵仪器等特点,可用于鸭3型腺病毒病的临床快速筛查。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 乳胶凝集试验 检测
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鸭甲肝病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:1
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作者 万春和 陈翠腾 +6 位作者 施少华 程龙飞 傅光华 刘荣昌 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第15期23-27,共5页
研究利用全基因合成技术合成DHAV-2全基因组序列,并以此为标准品建立检测DHAV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:建立的方法敏感性高,最低检测限仅为33.7拷贝/μL;特异性强,对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、禽... 研究利用全基因合成技术合成DHAV-2全基因组序列,并以此为标准品建立检测DHAV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:建立的方法敏感性高,最低检测限仅为33.7拷贝/μL;特异性强,对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,N-DRV)、鸭源禽Ⅰ型副黏病毒(Duck-origin avian paramyxovirus type 1,APMV-1)和禽坦布苏病毒(Avian Tembusu virus,ATmV)均无交叉扩增;重复性佳,组内和组间变异系数最高分别为1.68%和2.19%。对2018年福建地区临床收集的128份鸭源病料进行检测,结果未检测DHAV-2感染阳性。研究结果为DHAV-2的快速检测试剂盒研究及储备DHAV-2检测技术奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒2型 TAQMAN 实时荧光定量PCR
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我国东北地区朝鲜族传统民居建造技术的文化区划研究 被引量:7
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作者 周立军 程龙飞 李玉梁 《当代建筑》 2020年第11期44-47,共4页
中国朝鲜族传统民居作为我国东北地区极具特色的建筑类型,其建造技术在历史发展过程中保留了原有的传统性、民族性、认同性,形成了形态多样、类型丰富的传统民居文化景观。本文基于文化地理学的研究成果,在空间分布规律上对东北朝鲜族... 中国朝鲜族传统民居作为我国东北地区极具特色的建筑类型,其建造技术在历史发展过程中保留了原有的传统性、民族性、认同性,形成了形态多样、类型丰富的传统民居文化景观。本文基于文化地理学的研究成果,在空间分布规律上对东北朝鲜族传统民居建造技术进行深层次的探索,为日后的保护研究工作提供基础资料。 展开更多
关键词 东北地区 文化地理学 朝鲜族民居 建造技术
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