非化学专业大学化学实验课程教学实践

大学化学实验是清华大学非化学专业院系大一本科生的公共基础课。清华大学的大学化学实验单独设课,学时短、选课人数多、学生实验水平差别大。实验室从实际出发,开设基础知识与工科专业相结合的实验内容,采用多种教学形式提高教学效果,贯彻培养学生创新思维的教学理念,探索适合大学化学实验教学的有效模式,经过几年实践,起到了较好的效果。

“三境融合”的思政教学模式在皮肤性病学课程中的应用

习近平总书记强调,培养什么人、怎样培养人、为谁培养人是教育的根本问题。培养高素质的医学人才是医学教育高速发展的重要环节,也是保障全民健康、实现健康中国的重要因素。学校教研室在进行学校、医院及社区“三境融合”的思政教学改革过程中,坚持以课促研,探索翻转课堂,重视思政教育,更新教学内容,为其融入更多思想内容,优化课程质量,有助于提高学生的专业能力,培养其社会责任感和中华民族共同体意识,使其成为优秀的医学人才。下文论述了“三境融合”的思政教学模式在皮肤性病学课程中的应用。

“三境融合”的皮肤性病学课程教学改革实践与探索

建设“医工结合、人机交互、智能医疗、精准医疗”的新医科需建设能够培养具有优秀医学技能、职业素养、医德医风及人际沟通交流能力的医学人才的国家级“金课”^([1]).《皮肤性病学》是临床医学专业具有一套自身相对独立知识体系的核心课程之一^([2]).皮肤病的种类多达2000多种,疾病表现多样,病情复杂,易反复发作,且涉及多个学科,因此认为培养具有创新及自主学习能力和处理医患、医护、医医之间关系沟通交流能力的医学生具有重要意义^([3-4]).

2009—2023年中国16个省份急性呼吸道感染病例中人呼吸道合胞病毒的流行特征分析

目的了解2009—2023年我国16个省份急性呼吸道感染(ARI)病例中人呼吸道合胞病毒(HRSV)的流行特征。方法研究资料来源于2009—2023年我国16个省份ARI病例监测数据,共有28 278例ARI病例纳入研究。监测病例的临床标本进行了HRSV核酸筛查,并分析不同年龄组、不同地区和不同月份病例的HRSV检出率差异。结果 2009年1月至2023年9月,共纳入28 278例ARI病例。病例年龄范围为<1月龄~112岁,年龄M(Q1,Q3)为3岁(1岁,9岁)。28 278例ARI病例中有3 062例HRSV核酸阳性,总检出率为10.83%。2009—2019年HRSV检出率为9.33%,病毒主要以冬春季流行为主。在新型冠状病毒感染(COVID-19)流行期间,HRSV检出率在6.32%~18.67%之间波动;2022年底至2023年初未出现HRSV传统的冬季流行高峰,在2023年4—5月出现了HRSV反季节流行。87.95%(2 693/3 062)HRSV阳性病例为 5岁以下的儿童,不同年龄组中HRSV检出率的差异具有统计学意义(P<0.001),呈现出随着年龄增加HRSV检出率降低的趋势(P<0.001),其中以<6月龄组患儿的HRSV检出率最高(25.69%)。和2009—2019年相比,2020—2023年期间不同年龄组的HRSV检出率从高到低的排序发生变化,HRSV阳性病例的年龄M(Q1,Q3)从1岁(6月龄,3岁)增加至2岁(11月龄,3岁)。结论通过连续15年的HRSV监测分析发现,5岁以下的儿童,尤其是<6月龄婴幼儿是HRSV感染的主要高发人群。COVID-19流行期间,我国HRSV流行水平和流行模式发生了变化。

2009-2021年全国5岁以下儿童发热伴出疹症候群病原构成及流行特征分析

目的了解我国5岁以下儿童发热伴出疹症候群(RFS)的病原构成及流行特征,为儿童出疹性传染病的诊疗和和科学防控提供参考。方法基于国家传染病监测技术平台RFS监测数据,监测病原包括肠道病毒、麻疹病毒、风疹病毒、水痘–带状疱疹病毒、登革病毒、人细小病毒B19、埃博拉病毒、寨卡病毒、人疱疹病毒6型、EB病毒、A组链球菌、伤寒、副伤寒沙门菌、伯氏疏螺旋体和立克次体。采用描述性流行病学方法分析2009—2021年全国5岁以下儿童RFS病原构成及流行特征。结果我国5岁以下儿童RFS患者以病毒感染为主,主要是肠道病毒(85.78%)、麻疹病毒(10.03%)和水痘-带状疱疹病毒(1.45%),合计占比为97.26%,风疹病毒等其余病原在2018—2021年占比有所增加。2009—2021年肠道病毒优势血清型从肠道病毒A组71型(EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)转换为柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)和柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)。RFS总体病原检出率在1~2岁年龄组(70.53%)高于其他年龄组(χ2=292.336,P<0.001),南方地区(71.12%)高于北方地区(65.35%)(χ2=305.946,P<0.001);肠道病毒在1~2岁年龄组患儿、南方地区检出率较高,麻疹病毒在<1岁患儿、北方地区检出率较高,水痘–带状疱疹病毒在北方地区检出率较高。RFS总体病原在春夏季检出率高于秋冬季(χ2=295.060,P<0.001),其中肠道病毒夏秋季高发,麻疹病毒冬春季高发,水痘–带状疱疹病毒冬季高发,3种病毒南、北方地区季节性分布峰有所差异。结论2009—2021年全国5岁以下儿童RFS患儿以病毒感染为主,尤其以肠道病毒、麻疹病毒和水痘–带状疱疹病毒感染较为常见,RFS患儿病原体感染呈现多样化趋势,肠道病毒优势血清型发生转变,应持续加强对儿童RFS病原谱的监测。

2019—2023年吉林省长春市儿童急性呼吸道感染住院病例中人偏肺病毒的基因型别和流行特征分析

目的了解吉林省长春市儿童急性呼吸道感染(ARI)住院病例中人偏肺病毒(HMPV)的基因型别和流行特征。方法采集2019年6月至2023年6月长春市儿童医院ARI住院病例的咽拭子标本,收集病例的流行病学和临床信息。采用荧光定量RT-PCR方法鉴定HMPV阳性病例,并对阳性病例的病毒核酸进行G基因扩增及亲缘关系分析。结果共纳入儿童ARI住院病例3311例,年龄范围为0~17岁,年龄M(Q_(1),Q_(3))为2(1,3)岁;男性患儿1811例(54.70%)。共检出HMPV阳性病例167例,检出率为5.04%,其中<5岁病例占92.81%(155/167)。2019年HMPV检出率为6.37%(30/471),2020年降至最低(2.31%,10/432),2021、2022年有所回升,检出率分别为4.70%(60/1277)和4.56%(21/461),2023年HMPV检出率升高至6.87%(46/670),不同年份间的检出率差异具有统计学意义(P<0.05)。不同年份HMPV的流行高峰也存在差异,表现为单峰或双峰流行。共获得79条HMPV的G基因序列,A亚型和B亚型分别占48.10%和51.90%,其中A亚型均为A2c重复插入变异株,B亚型以B2基因型为主。HMPV在不同年份中可表现为A、B亚型的单独流行或共流行,存在亚型更替模式。结论2019—2023年不同年份间长春市ARI儿童住院病例中HMPV检出率差异较大,且存在HMPV的A、B基因亚型更替模式。

2021—2022年我国风疹流行病学及其病毒基因特征分析

目的了解2021—2022年间风疹流行病学及其病毒基因特征, 为我国风疹防控提供基础科学数据。方法自中国疾病预防控制信息系统中的传染病监测模块和监测报告管理模块获取2021—2022年间全国风疹发病数据;从全国麻疹/风疹实验室网络获得阳性风疹病毒(rubella virus, RuV)分离株, 通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)扩增并测定位于E1基因的两个核苷酸(nucleotide, nt)片段[F1-480(8 633~9 112 nt)和F2-633(8 945~9 577 nt)], 整理拼接后获得靶基因序列(E1-739), 将其与已报道的基因型/亚型参考株构建系统发育树以鉴定基因型别, 同时从GenBank数据库中下载我国2018—2020年间流行的RuV病毒株序列开展系统发育分析。结果 2021—2022年我国风疹发病率均为0.06/10万(2021年:840例;2022年:784例), 病例主要集中于西部和南部省份。病例年龄分布分析显示, 2021—2022年风疹发病主要以<5岁儿童为主(2021年:34.17%, 287/840;2022年:42.09%, 330/784), 其中以0~2岁患儿占比最高。进一步分析病例免疫史发现, 8~23月龄的病例中, 仅接种了1剂次含风疹成分的疫苗(rubella containing vaccine, RCV)幼儿的发病比例较高;2~14岁年龄组病例主要分布在接种了2剂次或以上RCV的儿童中;然而, >15岁病例主要集中在未接种RCV或免疫史不详的人群中。全国病毒学监测数据显示, 2021—2022年间从我国6个省市共获得22株RuV病毒分离株, 分属于1E-L2(11株)和2B-L2c(11株)基因亚型, 并与2018—2020年间流行的RuV病毒株具有很高的同源性。结论 2021—2022年间我国风疹发病维持在较低水平, 流行的RuV为1E-L2和2B-L2c基因亚型。

2009—2021年中国九省份发热呼吸道症候群监测病例中常见病毒感染情况分析

目的了解我国九省份发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中常见病毒感染情况。方法研究资料来源于中国疾病预防控制中心"传染病监测技术平台信息管理系统"中九省份(安徽、北京、广东、河北、湖南、吉林、山东、陕西和新疆)2009年1月至2021年6月间的FRS病例监测数据,最终将具有8种病毒[人流感病毒(HIFV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)、人腺病毒(HAdV)、人副流感病毒(HPIV)、人鼻病毒(HRV)、人偏肺病毒(HMPV)、人冠状病毒(HCoV)以及人博卡病毒(HBoV)]核酸检测结果的8 243例FRS监测病例纳入研究。采用χ2检验/Fisher确切概率法分析不同年龄组、不同地区和不同季节病例的病毒检出率差异。结果 8 243例FRS病例年龄M(Q1,Q3)为4(1,18)岁,<5岁以下儿童占56.56%(4 662例);男性占58.1%(4 792例);病例主要来源于门、急诊病例和住院病例,其中门急诊病例数为2 043例,住院病例数为6 200例。FRS病例的病毒检出率从高到低依次为HRSV、HIFV、HPIV、HRV、HAdV、HMPV、HCoV和HBoV。有524例病例同时检出两种及两种以上病毒,占病毒检测阳性病例数的15.66%。不同年龄组中病毒检出率的差异具有统计学意义(均P<0.05),<5岁以下儿童的病毒检出率较高(49.96%)。南方任一病毒阳性检出率高于北方(P<0.001)。FRS病毒阳性病例全年均有检出,HRSV检出率在秋、冬季较高,HIFV检出率在冬季较高,HMPV检出率在冬、春季较高;而HPIV、HRV、HCoV和HBoV的检出率在夏、秋季节较高,而HAdV在不同季节检出率的差异无统计学意义。与2009—2019年相比,2020—2021年的任一病毒阳性检出率有所下降,由原来的41.37%下降至37.86%;HIFV检出率由原来的10.62%急剧下降至1.37%;HPIV检出率由原来的8.24%下降至5.88%。而HRV和HBoV的检出率则由原来的5.43%和1.79%,分别上升至9.67%和3.19%。结论 2009—2021年中国九省份FRS病例以HRSV和HIFV感染较为常见,8种常见呼吸道病毒的流行特征存在年龄、地区和季节差异。

新型人腺病毒55型在中国10年的持续流行及其基因进化分析

目的了解新型腺病毒55型（HAdV-55）在中国的流行状况和基因变异及进化规律，为其预防和控制提供科学依据。方法本研究对2011—2014年在中国5个省市（北京、河北、山东、湖南和云南）发热呼吸道症候群患者标本中分离到的HAdV-55毒株进行了hexon、fiber和penton base三个基因的序列测定，同时下载GenBank数据库中中国以及全球其他国家和地区、不同时间流行的HAdV-55病毒株的三个基因的序列进行比对，并利用多种序列分析软件进行了同源性和基因进化分析。结果2006—2016年10年期间，在中国的15个省（市、自治区和直辖市）分离到HAdV-55病毒。进化分析结果显示，HAdV-55的三个主要结构基因均高度保守，其核苷酸和氨基酸序列同源性均大于99%；HAdV-55病毒在进化上是极为保守稳定，在进化树上聚集在一个分支，并有一定的时间聚集进化趋势。HAdV-55的hexon和fiber基因进化速率分为5.228×10^－5和1.238×10^－4substitutions/site/year，hexon基因的最早共同进化祖先tMRCA可追溯到1963年。结论HAdV-55已经在中国形成了广泛传播和持续流行态势，建立有效的监测系统和开展疫苗相关研究对于其预防和控制至关重要。

脑炎/脑膜炎症候群患儿病原与临床分析

目的探讨小儿脑炎/脑膜炎症候群的临床特点及病原谱。方法研究对象为2012年5月至2015年7月在长春市儿童医院住院,临床诊断为脑炎/脑膜炎的患儿667例。患儿于入院72 h内采集脑脊液标本335份,血液标本530份,粪便标本332份。采用PCR法检测脑脊液标本肠道病毒通用型(EV)、疱疹病毒(HSV)、结核杆菌(TB)、肺炎支原体(MP)核酸;粪便标本EV,肠道病毒71型(EV71),柯萨奇病毒A6(CVA6)、柯萨奇病毒A16(CVA16)、柯萨奇病毒A10(CVA10)核酸;兼并引物扩增埃可病毒30(Echo30)。收集患儿临床资料。结果脑炎/脑膜炎症候群发病高峰季节为6-8月份;年龄分布:0~15岁均有发病,0~6岁儿童占81.41%,0~1岁所占比例最高,为32.38%;男408例,女259例。临床症状以发热(586例)、精神萎靡(337例)、呕吐(307例)和头痛(203例)为主;临床体征包括嗜睡(103例)、颈项强直(71例)、脑膜刺激征(12例)、病理反射(313例)等;临床诊断病毒性脑炎272例,重症手足口病并脑炎332例,细菌性脑膜炎30例,其他33例;病原学检测:脑脊液标本EV、EBV、Echo30阳性检出率分别为59.72%、3.16%和70.00%;粪便标本检出EV71、CVA16、CVA6、EV71+CVA16和EV71+CVA16+CVA6核酸,其中EV71阳性检出率最高(98.96%)。结论长春市儿童医院住院小儿脑炎/脑膜炎症候群主要为病毒性脑炎;临床症状以发热、精神萎靡、嗜睡、呕吐和头痛为主;体征包括颈项强直、脑膜刺激征、病理反射等;病原主要为EV71。

2013～2015年河北省部分地区发热呼吸道症候群哨点监测病例中鼻病毒感染的研究

探讨人鼻病毒（Human rhinovirus,HRV）在河北省部分地区发热呼吸道症候群（Febrile respiratory syndrome,FRS）哨点监测病例中的感染情况。2013~2015年,从河北省部分地区发热呼吸道症候群哨点监测病例中采集标本792份,用多重实时荧光RT-PCR方法对9种常见的呼吸道病毒病原体进行筛查,HRV阳性标本再用RT-PCR方法扩增VP4/VP2靶基因片段,进行序列测定和分析。病原构成比位于前三位的病原分别是人副流感病毒（Human parainfluenza virus,HPIV）,HRV和人流行性感冒病毒（Human influenza virus,Flu）。HRV阳性标本73份,检出率为9.22%。其中HRV混合其他呼吸道病毒感染的有12份（12/73,16.44%）,与HPIV的混合感染率最高。本研究发现,HRV感染以5岁以下儿童为主,占全部HRV感染病例的60.27%;没有明显的季节分布趋势;住院病例比门急诊病例检出率高;下呼吸道感染患者中HRV的检出率高于上呼吸道感染患者;HRV在不同性别病例中检出率差别没有统计学意义。本研究共检测到HRV的20个血清型,其中A组HRV包括11个血清型,C组HRV包括9个血清型,B组HRV未检出。本研究显示,河北省存在HRV多个血清型的共循环,亟需加强河北省发热呼吸道症候群中HRV的监测,为HRV防控策略制订提供基础数据。

618例小儿重症社区获得性肺炎病原谱及临床特点分析

目的了解长春地区住院重症社区获得性肺炎病原谱及临床特点,为其病原学诊断和针对性治疗提供科学依据。方法2016年1月至2019年12月长春市儿童医院住院的618例临床诊断为重症社区获得性肺炎患儿,采集患儿咽拭子和肺泡灌洗液标本。应用病毒分离、细菌培养、飞行时间质谱和PCR/RT-PCR技术检测标本中的核酸和蛋白质谱。结果住院重症社区获得性肺炎患儿男性多于女性。发病高峰年龄段为7~12月龄小儿。发病多集中在冬春季。重症社区获得性肺炎病毒检出率最高,为56.15%(347/618);检出一种病毒病原阳性73.49%(255/347),其中前5位的是呼吸道合胞病毒(27.8%)、甲型流感病毒(23.9%)、乙型流感病毒(16.1%)、鼻病毒(12.2%)和偏肺病毒(10.2%);两种病毒阳性19.88%(69/347);3种病毒阳性4.32%(15/347);4种病毒阳性2.31%(8/347)。非典型微生物感染占29.77%(184/618),其中肺炎支原体感染占95.65%(176/184)。细菌感染17.31%(107/618),以肺炎链球菌(39.25%,42/107)和金黄色葡萄球菌(24.30%,26/107)为主。多种病原混合感染7.61%(47/618),其中肺炎支原体和肺炎链球菌、病毒混合感染分别为40.43%和34.04%。高热、呼吸增快和口周发绀是重症社区获得性肺炎的危险因素(OR值和95%CI分别为7.71和4.56~13.04、2.43和2.02~2.93、3.53和2.56~4.86);病毒混合感染36.96%(34/92)出现心力衰竭、中毒性脑病、心肌损害等并发症;肺炎支原体与其他病原混合感染35.29%出现胸腔积液。结论长春地区重症社区获得性肺炎的病原以病毒为主,呼吸道合胞病毒是优势病原,肺炎支原体次之,细菌病原以肺炎链球菌为主。高热、呼吸增快和口周发绀是重症肺炎的危险因素。多病原混合感染易出现严重并发症。

2001-2017年中国流行性腮腺炎病毒学监测及基因特征分析

目的阐明中国大陆地区流行性腮腺炎（流腮）病毒学监测进展及腮腺炎病毒（MuV）基因特征。方法依托全国麻疹/风疹实验室网络,自2001年起在全国范围内开展流腮病毒学监测。通过病毒分离、Real-time RT-PCR和RT-PCR等方法对MuV进行实验室检测和病毒基因型别鉴定;依据SH靶基因316个核苷酸序列,分析中国大陆地区MuV基因型别及其分布特征。结果 2001-2017年从中国22个省份共获得MuV SH基因序列451条,通过MuV基因型鉴定,439条（97.33%）为F基因型,12条（2.67%）为G基因型;2001-2017年有多个MuV F基因型分支共循环;G基因型于2011-2016年在局部地区流行。结论中国大陆地区MuV优势流行株为F基因型,G基因型呈局部流行;需加强流腮的持续性病毒学监测。

基于三种试剂盒分析新型冠状病毒特异性抗体的动态变化

为了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)发病后血清中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体的动态变化,本研究使用三种不同检测原理的SARS-CoV-2抗体检测试剂盒,对来自甘肃省33例核酸检测阳性的COVID-19确诊病例的58份血清标本,分别进行了病毒特异性抗体(IgM、IgG和总抗体)的检测。结果显示,COVID-19发病后IgM、IgG和总抗体阳性率随发病时间的推移而逐渐上升:发病早期3d以内,三种试剂盒检测病毒特异性抗体阳性率在13.6%~31.8%之间;发病4~7d时,阳性率在36.4%~45.5%之间;发病8~14d时,阳性率在55.6%~77.8%之间;而发病15d以上时,阳性率达到100%。此外,本研究使用三种试剂盒检测了健康人血清标本,检测特异性在99%~100%之间。统计学分析结果显示,三种检测试剂盒的检测结果差异无显著性(P>0.05)。综上所述,三种SARS-CoV-2抗体检测试剂盒均具有较好的敏感性和特异性,可用于COVID-19疑似病例在核酸检测阴性时的辅助诊断;本研究初步获得的SARS-CoV-2特异性抗体动态变化特征可为COVID-19血清流行病学调查和无症状感染者研究提供重要的基础依据。

2019年中国麻疹风疹实验室网络运转状况

目的评价2019年中国麻疹风疹实验室网络(China Measles and Rubella Laboratory Network,CMRLN)运转状况。方法利用中国麻疹监测信息报告管理系统(Measles Surveillance System,MSS)和CMRLN实验室监测数据库,分析CMRLN运转指标和麻疹风疹病例实验室监测结果。结果2019年全国报告监测病例78787例,其中散发病例65507例,散发病例的血标本、病原学标本采集率分别为95.86%、50.16%,3d内送达网络实验室的比例分别为97.89%、84.13%。监测病例的麻疹、风疹病毒IgM检测阳性率分别为4.65%(3226/69436)、31.14%(21784/69963)。散发监测病例麻疹、风疹病毒核酸检测阳性率分别为3.28%(1090/33254)、31.31%(10367/33112)。全国报告麻疹、风疹暴发疫情分别为24起、177起,实验室确诊率分别为100%、99.44%。共分离到265株麻疹病毒,其中D8、A(疫苗相似株)、B3和H1基因型分别为176株、18株、51株和30株;分离到风疹病毒2822株,其中1E和2B基因型分别为1608株和1214株。国家、32个省级、27个地市级网络实验室均通过了麻疹和风疹血清盲样、核酸盲样和/或基因定型考核。结论2019年中国麻疹风疹实验室网络运转良好,为中国麻疹和风疹的消除提供了技术支撑。

2009年至2021年我国9省份发热呼吸道症候群病例中人偏肺病毒感染情况及流行特征分析

目的阐明我国发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中人偏肺病毒(HMPV)感染情况及病毒流行特征,为我国HMPV引起呼吸道相关疾病的临床诊治和疾病防控提供重要基线数据。方法选取2009年1月至2021年6月在我国9省份(北京、河北、吉林、山东、陕西、新疆、安徽、广东、湖南)的FRS监测病例作为研究对象。收集病例临床、流行病学信息并采集呼吸道标本,应用实时荧光定量PCR对样本进行HMPV核酸检测。结果共11660例样本进行了HMPV检测,HMPV阳性病例数为296例,阳性检出率为2.54%。其中218例病例为单一HMPV感染,78例病例同时检出了含HMPV 2种或2种以上病毒,占HMPV阳性病例数的26.35%。<5岁儿童是HMPV主要发病人群,检出率为3.10%。在<5岁儿童中,含HMPV混合感染中肺炎病例的比例高于单一HMPV感染病例。HMPV全年均可检出,病毒流行主要以冬、春季为主,3月份是HMPV流行高峰。结论HMPV是引起儿童急性呼吸道感染的重要病原之一,病毒流行具有明显的季节性。HMPV可引起单独感染,也可与其他呼吸道病毒合并感染,合并HMPV感染可能增加儿童肺炎的风险。

西宁市一起学校流行性腮腺炎暴发疫情流行病学和病原学特征分析

目的分析西宁市一起学校流行性腮腺炎(流腮)暴发疫情的流行病学和病原学特征。方法采用现场流行病学调查方法分析本起流腮疫情的三间分布特征;对9例流腮疑似病例采集血清和咽拭子标本进行实验室检测。腮腺炎病毒核酸阳性的咽拭子标本进行病毒分离。采用RT-PCR方法对病毒分离株SH基因进行扩增,鉴定和分析腮腺炎病毒的基因型别与基因特征。结果本起疫情共累计报告流腮疑似病例13例。病例主以7~11岁为主,集中在8岁(69.23%,9/13)。男女比例为1.6∶1。13例病例均无明确的腮腺炎疫苗接种史。本起疫情具有明显的班内聚集性。在采集标本的9例病例中有8例腮腺炎特异性IgM抗体和病毒核酸检测双阳性。获得2株阳性腮腺炎病毒分离物,经基因型鉴定均为F基因型,2株腮腺炎病毒SH基因序列同源性100%。结论本起疫情是一起由F基因型腮腺炎病毒引起的学校流腮暴发疫情,建议当地开展中小学腮腺炎疫苗的查漏补种工作。

2008～2014年中国6省市流行的人呼吸道合胞病毒B亚型G蛋白编码基因特征分析

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体之一。HRSV粘附蛋白(Attachment glycoprotein,G)是病毒膜表面糖蛋白,介导保护性免疫,是抗HRSV抗体和疫苗等的研究热点之一。为研究2008～2014年中国HRSV B亚型G蛋白编码基因的基因特征,于2008～2014年收集的363份HRSV阳性临床标本或病毒株中挑选89份代表株进行G蛋白编码基因全长核苷酸序列的扩增和测序,使用Sequencher 5.0进行序列的编辑,使用MEGA 5.0进行序列比对和亲缘关系进化树构建以及氨基酸变异分析。89份代表株分别挑选自中国北京、吉林、广东、河北、湖南、陕西6省市发热呼吸道感染患者鼻咽拭子或病毒分离株,基因型包括BA9、BA10、BAc、BA、CB1及SAB4,覆盖我国近年流行的优势基因型。亲缘关系分析显示,89株代表株可以分为6个分支,同一基因型G蛋白编码基因核苷酸序列荟聚为一个分支;89份代表株之间的核苷酸(氨基酸)遗传距离为0.03(0.04),与原型株CH-18537株的核苷酸(氨基酸)遗传距离为0.08～0.10(0.14～0.18),其中B5分支与原型株的核苷酸(氨基酸)遗传距离最远为0.10(0.18);氨基酸变异主要在第二高变区,其次为第一高变区。在中心保守区(aa164～176)以及CX3C模序区,89条HRSV B亚型G蛋白编码基因氨基酸序列与原型株CH-18537株一致。本研究表明2008～2014年中国HRSV B亚型G蛋白编码基因变异较多,但在中心保守区和CX3C模序区保守,本研究为我国HRSV的病毒学研究提供了基础科学数据。

2018-2019年泉州人呼吸道合胞病毒基因型及基因特征分析

目的分析泉州2018-2019年人呼吸道合胞病毒(HRSV)流行情况和基因特征。方法样本来自2018年11月至2019年5月福建省泉州市儿童医院送检的下呼吸道感染患儿咽拭子样本,共141份。采用RT-PCR法进行HRSVG基因3′末端靶基因扩增,使用sequencher 5.0以及MEGA5.05软件进行序列编辑、进化树构建和基因特征分析。结果HRSV阳性样本25份,17份样本成功获得靶基因序列,其中HRSVA 13份,HRSVB 4份;共鉴定出两个基因型:ON1基因型(13份,HRSVA)和BA9基因型(4份,HRSVB)。5条ON1基因型靶基因序列与2012-2015年北京、长春和浙江流行的ON1基因型序列汇聚为一簇(Cluster1);1条(FJ19-02)与2012-2015年我国多个地区流行的ON1基因型序列汇聚为一簇(Cluster2);其余7条为独立的一簇(Cluster-FJ)。HRSVB亚型中FJ18-02、FJ19-14、FJ19-15与2015年在吉林长春流行的BA9基因型序列汇聚在一起;FJ19-13则与2013年在广州和浙江两地流行的BA9基因型序列具有较近的亲缘性。ON1基因型和BA9基因型均在重复插入的72和60个碱基片段区出现了核苷酸和氨基酸变异。Cluster-FJ分支靶基因序列出现了特征性氨基酸突变(H266L);FJ19-13出现了H261Q和Q265L的独立突变。结论2018-2019年福建泉州流行的HRSV基因型为BA9和ON1,Cluster-FJ为新发现的独立传播链,有可能在泉州建立了本土循环流行。

载芬维A铵脂质体抑制A375黑素瘤细胞裸鼠皮下移植瘤的初步研究

目的探讨载芬维A铵脂质体(4-HPR-L)对裸鼠皮下人恶性黑素瘤的抑制作用。方法采用薄膜-超声分散法制备4-HPR-L。通过皮下接种黑素瘤A375细胞至BALB/c裸鼠右侧腋窝建立黑素瘤荷瘤裸鼠模型。取10只荷瘤裸鼠模型,随机等分为两组,分别给予尾静脉注射同浓度细胞膜近红外荧光探针(DiR)溶液和DiR脂质体(DiR-L),应用小动物活体成像仪观察给药后6、12、24 h药物在体内分布情况。取30只荷瘤裸鼠,随机等分为3组,即对照组、4-HPR组和4-HPR-L组,分别经尾静脉每次注射5%(质量分数)葡萄糖溶液0.2 ml、25 mg/kg 4-HPR和4-HPR-L溶液,于接种A375细胞后第8、10、12、14、16、18、20、22天给药,动态监测给药后各组裸鼠的体重和肿瘤体积,观察生存情况。于末次给药后第2天处死裸鼠,取心、肝、脾、肺、肾及肿瘤组织,HE染色和免疫组化染色观察黑素瘤体内转移情况,并用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肿瘤细胞凋亡情况。计量资料采用单因素方差分析和独立样本t检验进行分析。结果小动物活体成像仪显示,DiR-L能较长时间滞留于肿瘤组织,给药24 h后在肿瘤部位仍可观察到较强荧光;定量分析显示,肿瘤组织中DiR-L荧光强度(22.85±1.66)显著高于DiR(8.45±0.97,t=12.957,P<0.01)。与对照组和4-HPR组相比,4-HPR-L组末次给药后第2天离体瘤重明显降低(F=27.055,t值分别为4.768、6.640,均P<0.05)。HE染色显示,4-HPR-L组2只裸鼠发生肝脏转移,而对照组、4-HPR组全部裸鼠发生肝脏转移。荷瘤鼠的生存期观察显示,4-HPR-L组裸鼠于接种后76 d内全部死亡,对照组和4-HPR组分别于接种后56 d和59 d内全部死亡。对照组凋亡指数为(12.14±1.33)‰,4-HPR组为(67.17±15.18)‰,4-HPR-L组为(152.73±11.27)‰,3组间差异有统计学意义(F=167.588,P<0.05),4-HPR-L组与对照组和4-HPR组相比,t值分别为18.162、11.075,均P<0.05。结论4-HPR-L能够有效抑制裸鼠皮下黑素瘤体积增长和黑素瘤细胞转移,并延长裸鼠生存期。