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PRPS1 I72位点突变对急性淋巴细胞白血病耐药性的影响及其机制研究
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作者 崔芷嫣 陈尧 +2 位作者 陶悦 沈树红 李慧 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期977-987,共11页
目的·研究磷酸核糖焦磷酸合成酶1(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 1,PRPS1)I72位点突变是否能使急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞对巯嘌呤类化学治疗(化疗)药物6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-... 目的·研究磷酸核糖焦磷酸合成酶1(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 1,PRPS1)I72位点突变是否能使急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞对巯嘌呤类化学治疗(化疗)药物6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)、6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine,6-TG)产生耐药性,并解释其作用机制。方法·将临床上已发现的PRPS1基因的各突变(I72F、R177S、V316L)和2个ALL细胞系(KOPN72bi和RS4;11)中存在的PRPS1基因突变(V208A、V289A)分别插入融合了绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的载体pGV303中,用已证明的对巯嘌呤类化疗药耐药的PRPS1 A190T突变为阳性对照,对该类药不耐药的空载体pGV303(Vector)、PRPS1野生型(wild type,WT)及PRPS1 I72V突变为阴性对照。将上述构建好的载体瞬时转染入HEK-293T细胞(简称293T细胞)中,并采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测PRPS1各突变体在293T细胞中的蛋白表达情况。采用药物敏感性实验检测并计算6-MP或6-TG对上述瞬转PRPS1各突变体的293T细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。随后,除PRPS1 I72F和I72V之外,将第72位异亮氨酸(isoleucine,I)变成其他氨基酸的多个突变即I72M、I72L、I72N、I72S、I72T分别插入载体pGV303中,瞬时转染入293T细胞后采用Western blotting、药物敏感性实验检测各突变体在293T细胞中的蛋白表达情况以及6-MP或6-TG的IC_(50)。采用慢病毒感染法将PRPS1 WT、I72F、I72V、A190T及载体pGV303感染REH细胞系,通过流式细胞术分选GFP阳性细胞以获得PRPS1各突变体稳定表达的细胞,并采用Western blotting及药物敏感性实验检测各突变体在REH细胞中的蛋白表达情况以及6-MP或6-TG的IC_(50),用以验证293T细胞获得的药物敏感性实验结果。采用AnnexinⅤ/DAPI双染法评估各REH细胞系的凋亡情况,并通过Western blotting检测各REH细胞系的DNA损伤相关蛋白[S139位点磷酸化的组蛋白H2AX(phosphorylated H2AX-S139,γ-H2AX)、磷酸化的细胞周期检验点激酶2(phosphorylated check point kinase 2,pCHK2)]和细胞凋亡相关蛋白聚(腺苷二磷酸核糖)聚合酶剪切体[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,cleaved PARP]的表达水平。使用PDB数据库(Protein Data Bank)中编号为2HCR(PDB code 2HCR)的PRPS1晶体结构图,通过三维成像及PyMOL软件预测并绘制I72位点、I72V和I72F的氨基酸残基及空间构象图。结果·Western blotting结果显示,瞬时转染的外源性PRPS1各突变蛋白在293T细胞中成功表达;药物敏感性实验结果显示,表达PRPS1 I72F、R177S、V316L、V208A与阳性对照A190T的293T细胞对6-MP或6-TG的IC_(50)均远高于表达V289A及阴性对照Vector、PRPS1 WT、PRPS1 I72V的细胞(均P=0.000)。将第72位异亮氨酸变成其他氨基酸后,Western blotting结果显示瞬时转染的外源性PRPS1 I72位点的各突变蛋白在293T细胞中成功表达;药物敏感性实验结果显示,表达PRPS1 I72M、I72F、I72L、I72N、I72S、I72T与A190T的293T细胞对6-MP或6-TG的IC_(50)均远高于表达Vector、PRPS1 WT、PRPS1 I72V的细胞(均P=0.000)。慢病毒感染REH细胞后,Western blotting结果显示在已构建的稳定细胞系中PRPS1 WT、A190T、I72F、I72V的蛋白高表达且表达量相似;药物敏感性实验结果显示,表达PRPS1 I72F、A190T的REH细胞对6-MP或6-TG的IC_(50)均远高于表达Vector、PRPS1 WT、PRPS1 I72V的细胞(均P=0.000),与293T细胞中瞬时转染得到的药物敏感性结果一致。AnnexinⅤ/DAPI双染法、DNA损伤和凋亡相关蛋白的Western blotting检测的结果均显示,经6-MP处理后,表达PRPS1 A190T、I72F的REH细胞系的DNA损伤和凋亡率明显低于表达Vector、PRPS1 WT、PRPS1 I72V的细胞(均P=0.000)。蛋白结构分析结果显示,PRPS1 I72F会使PRPS1的空间构象发生改变。结论·PRPS1 I72F、R177S、V316L、V208A、I72M、I72L、I72N、I72S、I72T突变可使细胞获得对巯嘌呤类化疗药的耐药性,PRPS1 V289A、I72V突变不影响细胞对巯嘌呤类化疗药的敏感性。293T中的药物敏感性实验结果和REH中的药物敏感性实验结果一致,证明293T细胞可以作为检测PRPS1突变对巯嘌呤类化疗药物耐药性的快速研究模型。PRPS1 I72位点突变对巯嘌呤类化疗药耐药性的影响可能与PRPS1结构发生改变有关。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 耐药复发 磷酸核糖焦磷酸合成酶1 巯嘌呤
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三株芽孢杆菌的生防特性研究 被引量:17
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作者 李苗苗 张家韬 +8 位作者 崔传斌 孙光军 王东坤 崔志燕 高强 冯超 王凤龙 陈德鑫 王晓强 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2020年第4期80-89,共10页
为明确贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GY1、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GY10和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)GY12的生防特性,采用平板试验法、对扣法、盆栽试验等,对三株生防菌的抑菌谱、次生代谢产物、挥发性... 为明确贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)GY1、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GY10和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)GY12的生防特性,采用平板试验法、对扣法、盆栽试验等,对三株生防菌的抑菌谱、次生代谢产物、挥发性物质、根际定殖能力和促生能力等进行了研究。结果表明,GY1、GY10、GY12培养液可以显著促进烟草种子的萌发和烟株的生长;三株生防菌抑菌谱广,对烟草赤星病菌、黑胫病菌及花生镰刀菌等9种病原具有显著的抑制作用,并且都具有分泌嗜铁素和蛋白酶的能力;三株生防菌发酵上清液和挥发性物质对链格孢菌(Alternariaalternata)和烟草疫霉菌(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)具有显著抑制作用;菌株的分泌蛋白热稳定性好,对烟草赤星病菌具有显著的体外抑菌活性,并对酸性环境具有较高的耐受性;根际定殖结果表明,GY1-GY10-GY12复配与单菌株相比能增加各生防菌在烟草根际的定殖。以上结果对于菌株GY1、GY10、GY12生防特性的深入挖掘和产业化开发具有一定的指导作用。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 烟草黑胫病 烟草赤星病 生防特性 根际定殖
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生防菌复配对烟草黑胫病的防治效果研究 被引量:17
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作者 李苗苗 王晓强 +7 位作者 王东坤 刘元德 孙光军 沈宏 艾永峰 崔志燕 陈德鑫 王凤龙 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2020年第2期32-38,共7页
为解决单一生防菌防效不稳定问题,通过平板对峙试验、相容试验、盆栽试验从6株生防菌中筛选对烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)具有较高拮抗活性的复配菌株组合;利用分子生物学方法对各菌株的16S rRNA和gyrA基因进... 为解决单一生防菌防效不稳定问题,通过平板对峙试验、相容试验、盆栽试验从6株生防菌中筛选对烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)具有较高拮抗活性的复配菌株组合;利用分子生物学方法对各菌株的16S rRNA和gyrA基因进行系统进化分析,鉴定各菌株分类地位;并采用轮换因子法筛选各菌株的最适发酵培养基。结果表明,GY1、GY10和GY12发酵后混合施用对烟草黑胫病的防治效果最好,平板抑菌率达到86.9%,盆栽防效为74.53%,比GY1、GY10、GY12单独处理分别提高15.34%、27.42%和44.94%;分子鉴定表明,3株菌分别为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);并筛选得到了GY1、GY10、GY12的最适发酵培养基,发酵24 h后生物量相较于基础培养基分别增加了75.12%,92.31%和194.55%。 展开更多
关键词 烟草黑胫病 芽孢杆菌 生防菌复配 发酵
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Inhibitory Effects of 12 Chemical Agents against Alternaria alternata
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作者 Shen Hong Zhang Jiatao +8 位作者 cui zhiyan Sun Guangjun Li Bin Zhang Yongfeng Xu Chuantao Ai Yongfeng Song Guanglong Ji Xiuting Wang Xiaoqiang 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2020年第4期20-23,共4页
[Objective]The paper was to screen highly efficient fungicides for the prevention and control of tobacco brown spot(Alternaria alternata).[Method]The inhibitory effects of 12 chemical agents against A.alternata were d... [Objective]The paper was to screen highly efficient fungicides for the prevention and control of tobacco brown spot(Alternaria alternata).[Method]The inhibitory effects of 12 chemical agents against A.alternata were determined indoors by mycelium growth rate method.[Result]Toxicity test showed that 30%kresoxim-methyl·boscalid SC had the best inhibitory effect,with an EC_(50)of 1.05μg/mL,followed by 9%pyraclostrobin CS,with an EC_(50)of 2.09μg/mL.As a broad spectrum protective fungicide,77%copper calcium sulfate WP showed a low sensitivity against A.alternata in the petri dish test since it had a mechanism of action different from that of other chemical agents.[Conclusion]The study lays the foundation for subsequent screening of fungicides for the prevention and control of A.alternata in the field. 展开更多
关键词 Tobacco brown spot Alternaria alternata FUNGICIDE Sensitivity
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烟草赤星病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 谢中玉 王晓强 +10 位作者 沈宏 孙光军 李斌 崔志燕 张永峰 冉茂 陈海涛 张帅 汪代斌 陈德鑫 孙现超 《烟草科技》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期11-16,共6页
为实现对烟草叶片中烟草赤星病菌的SYBR Green I实时定量PCR(q-PCR)快速检测,根据链格孢属ITS基因序列差异位点,设计了1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立了标准曲线,构建了q-PCR快速定量检测方法并对感病叶片进行检测... 为实现对烟草叶片中烟草赤星病菌的SYBR Green I实时定量PCR(q-PCR)快速检测,根据链格孢属ITS基因序列差异位点,设计了1对特异性引物。通过构建含有目的片段的重组质粒,建立了标准曲线,构建了q-PCR快速定量检测方法并对感病叶片进行检测,灵敏度达到1.0×10^(-3) ng/μL。实验样品验证表明,该方法可以对烟草赤星病菌进行快速检测和定量。 展开更多
关键词 烟草 赤星病菌 SYBR Green I Q-PCR
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Traffic balancing over licensed and unlicensed bands in heterogeneous networks
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作者 LI Zhen cui Qimei +1 位作者 cui zhiyan ZHENG Wei 《Journal of Communications and Information Networks》 2016年第2期115-124,共10页
The rapid boosting in mobile traffic and the scarcity of available radio spectrum have hindered the improvement of capacity in cellular networks.It is necessary to discover an appropriate coexistence between cellular ... The rapid boosting in mobile traffic and the scarcity of available radio spectrum have hindered the improvement of capacity in cellular networks.It is necessary to discover an appropriate coexistence between cellular and other radio access technologies(mainly Wi-Fi)to offload the high traffic on to unlicensed bands.Dealing with joint time and power allocation to devices,a non-convex problem is modeled to maximize the throughput as well as guarantee the desired user satisfaction.A two-step traffic balancing scheme is proposed to derive the solution.We also focus on the inner competition among cellular users instead of traditional competition between cellular and Wi-Fi in the unlicensed bands.Finally,simulation results show the effectiveness of the proposed two-step traffic balancing scheme. 展开更多
关键词 licensed-assisted access using LTE traffic balancing unlicensed band time allocation
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