肝细胞生长因子基因转染对阿霉素诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的研究肝细胞生长因子（HGF）基因转染对阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡的影响。方法先构建HGF基因的真核表达质粒pIRES2-EGFP-HGF,应用pIRES2-EGFP-HGF重组质粒和pIRES2-EGFP空质粒转染人胃癌MKN-45细胞,以未转染组为对照。用转染细胞的培养液培养MDCK细胞后,以细胞形态学改变来分析目的基因mRNA、蛋白的表达,分别用RT-PCR、Western blot测定其功能。MTT法测定阿霉素对细胞生长的抑制作用,DNA凋亡条带法和PI染色法检测细胞凋亡。结果稳定转染HGF基因的MKN-45细胞株可表达HGF mRNA,其分泌的HGF蛋白具有正常功能。MTT检测表明,HGF质粒转染组活细胞数高于空质粒转染和未转染组。0．1μg／ml阿霉素作用细胞后DNA凋亡条带分析发现,空质粒转染及未转染组的MKN-45细胞出现典型阶梯状条带, HGF转染组细胞凋亡条带不显著。流式细胞术结果显示,HGF质粒转染组细胞凋亡率显著低于未转染及空质粒转染组。结论HGF基因稳定转染可显著抑制阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡。