Hrr25是酿酒酵母中具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的I型酪蛋白激酶家族成员.在自噬过程中Hrr25可以磷酸化多种蛋白调控自噬过程,然而目前对Hrr25的作用底物分析仍不明确,存在巨大的科研探究价值.Hrr25相互作用蛋白的鉴定可以通过免疫沉...Hrr25是酿酒酵母中具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的I型酪蛋白激酶家族成员.在自噬过程中Hrr25可以磷酸化多种蛋白调控自噬过程,然而目前对Hrr25的作用底物分析仍不明确,存在巨大的科研探究价值.Hrr25相互作用蛋白的鉴定可以通过免疫沉淀结合质谱分析来实现.构建了表达Hrr2513Myc蛋白的菌株,以Hrr2513Myc为靶蛋白进行免疫沉淀,将免疫沉淀的样品进行质谱检测.利用Venny2.1软件,得到在诱导自噬条件下与Hrr25特异性相互作用的蛋白.通过DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genome,KEGG)基因富集.结果在诱导自噬条件下筛选出321种特异与Hrr25相互作用的蛋白,根据P<0.05,GO富集共得到23项生物过程(biological process,BP)、16项细胞组成(cellular component,CC)、21项分子功能(molecular function,MF),KEGG富集分析到14条通路.通过免疫沉淀结合质谱技术,筛选出在自噬过程中与Hrr25互作的候选蛋白,为研究Hrr25与底物的相互作用及深入了解其调控自噬的分子机制提供新信息.展开更多
文摘Hrr25是酿酒酵母中具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的I型酪蛋白激酶家族成员.在自噬过程中Hrr25可以磷酸化多种蛋白调控自噬过程,然而目前对Hrr25的作用底物分析仍不明确,存在巨大的科研探究价值.Hrr25相互作用蛋白的鉴定可以通过免疫沉淀结合质谱分析来实现.构建了表达Hrr2513Myc蛋白的菌株,以Hrr2513Myc为靶蛋白进行免疫沉淀,将免疫沉淀的样品进行质谱检测.利用Venny2.1软件,得到在诱导自噬条件下与Hrr25特异性相互作用的蛋白.通过DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genome,KEGG)基因富集.结果在诱导自噬条件下筛选出321种特异与Hrr25相互作用的蛋白,根据P<0.05,GO富集共得到23项生物过程(biological process,BP)、16项细胞组成(cellular component,CC)、21项分子功能(molecular function,MF),KEGG富集分析到14条通路.通过免疫沉淀结合质谱技术,筛选出在自噬过程中与Hrr25互作的候选蛋白,为研究Hrr25与底物的相互作用及深入了解其调控自噬的分子机制提供新信息.