贝莱斯芽孢杆菌DJB5的生物安全性评价

【目的】研究贝莱斯芽孢杆菌DJB5的生物安全性,为DJB5的开发和安全使用打下基础。【方法】参考微生物菌剂安全性的相关标准,通过灌胃DJB5菌体和发酵液的方式测定DJB5对昆明小鼠的急性经口毒性;通过腹腔注射菌体的方法研究DJB5的致病性;测试DJB5对昆明小鼠的急性眼刺激性、皮肤刺激性和溶血性;用纸片琼脂扩散法检测DJB5的抗菌药物敏感性。【结果】DJB5菌体对昆明小鼠的急性经口半致死剂量(LD50)>5000 mg/kg,灌胃菌体(5000 mg/kg BW)及5和10倍发酵上清浓缩液14 d后,昆明小鼠的体征、各脏器石蜡切片、血相和生化指标与对照组无显著差异(P>0.05,下同);腹腔注射DJB5菌体(500 mg/kg BW)后,处理组昆明小鼠的脏器系数和体重与对照组无显著差异;DJB5对昆明小鼠眼和皮肤无刺激性、无溶血性,且对受试的青霉素G、头孢唑林、丁胺卡那、庆大霉素、红霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明和氯霉素等9种抗菌药物敏感。【结论】贝莱斯芽孢杆菌DJB5及其发酵液的生物安全性高,具有开发成防治玉米贮藏期黄曲霉制剂的潜力。

猫冠状病毒荧光RT-RAA检测方法的建立

根据猫冠状病毒(FCoV)7b基因序列,设计引物及探针,建立了FCoV荧光RT-RAA检测方法。该方法能够在39℃恒温条件下,20 min内对病原进行快速检测,与猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒均无交叉反应;对病毒核酸的最低检测限为1.97×101 fg/μL。用套式PCR与建立的荧光RT-RAA对30份疑似FCoV感染临床样品进行检测,两种方法符合率为93.33%。结果表明,建立的FCoV荧光RT-RAA方法适用于FCoV快速检测。

牛传染性鼻气管炎流行现状与防治分析

牛传染性鼻气管炎(IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒引起的一种接触性传染病。随着我国牛养殖产业的快速发展,规模化和集约化程度不断提升,IBR的广泛流行给我国养牛业造成巨大的经济损失。为了解近几年国内外牛传染性鼻气管炎流行情况,笔者通过数据库收集国内外关于IBR的文献进行汇总,对当前国内外牛传染性鼻气管炎的流行现状进行综述,为牛传染性鼻气管炎的有效防控提供借鉴,促进我国养牛业的健康发展。

2021年我国部分省份猪圆环病毒2型流行病学调查和基因分析

为了解2021年我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行情况,本试验于7个地区16个省采集1685份组织样品,采用实时荧光定量PCR检测方法检测PCV2,对其中45份阳性样品进行全基因组序列扩增和遗传演化分析。结果显示,被检样品PCV2总阳性率为9.85%(166/1685),场总阳性率为32.71%(35/107);各地区样品阳性率介于4.29%~19.00%,东北地区样品阳性率最高;各地区场阳性率介于6.90%~60.00%,华中地区场阳性率最高。PCV2a、PCV2b和PCV2d亚型分离毒株占比分别为31.11%、4.44%和64.44%,其中PCV2d亚型为优势流行株,未发现PCV2e和PCV2c亚型。有24株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个赖氨酸(K)延伸,另有1株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个蛋氨酸(M)延伸。结果表明,2021年我国PCV2感染范围广,污染程度高,且正在不断发生遗传变异,需要持续跟踪监测PCV2的流行情况,以便及时制定有效的防控措施。

山西一例牛病毒性腹泻病例病原分离鉴定及测序分析

为查找引起山西某牛场疑似牛病毒性腹泻病例的病因,对送检的9份牛鼻腔棉拭子样品,经处理后进行了多病原PCR或RT-PCR检测、病原分离、特征性细胞病变观察、效价测定、RT-PCR鉴定及基因测序分析。结果显示:从9份样品中检出6份BVDV核酸阳性,IBRV、BRSV、BPIV3、支原体均阴性,病料上清接种MDBK细胞进行培养,传至F5代发现MDBK细胞出现特征性病变,表现为细胞变亮、圆缩、拉网并逐渐形成空泡,效价为10-5.42TCID50/0.1mL,BVDV RT-PCR鉴定阳性,将其命名为BVDV-SX2020株,测序发现其5’UTR与BVDV Oregon C24V等参考毒株同属BVDV基因1a亚型。结果证实该起病例由BVDV-1a毒株感染引起。

补中益气汤加减复方中药制剂对奶山羊乳品质及血清生化指标的影响

试验旨在研究补中益气汤加减复方中药制剂对奶山羊乳品质及血清生化指标的影响。选取18只体细胞数相近(大于100万个/mL)的哺乳期圭山山羊,随机分为2组,每组3个重复,每个重复3只羊。对照组为精料补充料,试验组在精料补充料中添加3%的补中益气汤加减复方中药制剂。试验期8 d。结果显示,试验组山羊鲜乳体细胞数极显著低于对照组(P<0.01)。试验组的乳脂率极显著高于对照组(P<0.01);乳蛋白率显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,圭山山羊日粮中添加3%补中益气汤复方加减中药制剂可有效改善乳品质,预防隐性乳房炎的发生。

附子理中汤加减对母猪生产性能及血液理化指标的影响

试验旨在研究附子理中汤加减复方中药制剂对能繁母猪生产性能及血液理化指标的影响。选取96头有繁殖障碍史的“长×大”二元杂母猪,随机分为4组,每组4个重复,每个重复6头猪。试验A组、B组、C组分别在基础日粮中添加3%、2%、1%的附子理中汤加减复方中药制剂,D组(对照组)在基础日粮中添加0.5%抗生素。试验期150 d。结果显示,与对照组相比,B组母猪的平均产仔数显著升高(P<0.05);3个中药组平均活仔数显著升高(P<0.05),仔猪出生均重、仔猪平均日增重极显著升高(P<0.01),平均木乃伊胎数、仔猪腹泻率均显著降低(P<0.05)。用药前,除单核细胞计数(MONO)、中性粒细胞(GRAN)外,其他各项血液指标均异常。用药后,各组猪的血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比容(HCT)均恢复正常值;3个中药组猪的白细胞计数(WBC)均恢复正常值,对照组母猪仍处于异常;A组和B组猪的红细胞计数(RBC)均恢复正常值,C组和对照组处于异常;A组猪平均红细胞血红蛋白含量(MCHC)恢复正常值,对照组仍处于异常。用药前,除血清白蛋白(ALB)、白球比(A/G)、尿素(UREA)外,各组猪其他血液生化指标处于异常范围。用药后,3个试验组母猪血液谷丙转氨酶(ALT)、葡萄糖(GLU)均恢复正常值,对照组仍处于异常水平。研究表明,试验所用复方中药制剂可有效提高母猪产仔数、活仔数,降低死胎数和木乃伊胎数,提高仔猪初生均重、均匀度、平均日增重,降低仔猪腹泻率,结合成本等综合分析评价,复方中药制剂推荐添加量为2%。

马来穿山甲多种菌混合感染的细菌分离鉴定及小鼠的毒力试验

2017年9月云南省宜良某野生动物收容中心收容了5只马来穿山甲,都有严重的腹泻症状,粪便呈黑绿色、且带有脱落的黏膜,其中2只并发打喷嚏及呼吸困难等症状。试验无菌采集5只穿山甲的粪便棉试子及2份有呼吸道症状的鼻腔棉拭子,通过细菌分离鉴定、革兰染色、生化试验等对菌株进行初步测定,PCR扩增菌株的16S rDNA,测序后在NCBI上利用BLAST和MEGA软件进行序列相似性比较和系统发育学分析,结果表明:分离到的4株菌株分别为肺炎克雷伯菌、变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌及大肠杆菌O83∶H1;动物毒力试验根据小鼠在感染4株菌株96 h时的死亡情况,计算出肺炎克雷伯菌、变形杆菌、弗氏柠檬酸杆菌及大肠杆菌O83∶H1的LD50分别为4.37×10^8,1.15×10^8,1.29×10^8,4.15×10^12 CFU/mL;药敏试验结果,肺炎克雷伯菌对大观霉素和头孢哌酮极度敏感,对新霉素等高度敏感,对卡那霉素等耐药;变形杆菌对头孢哌酮极度敏感,对链霉素等中度敏感,对头孢曲松等耐药;弗氏柠檬酸杆菌对大观霉素极度敏感,对头孢哌酮高度敏感,对头孢氨苄等低度敏感;大肠杆菌O83∶H1对环丙沙星和左氟沙星极度敏感,对头孢氨苄中度敏感,对卡那霉素低度敏感。

Identification of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Inhibitors Through an Oriented Screening on Natural Products

Porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRS） caused by porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV） is one of the most infectious diseases in the swine industry worldwide, causing big eco- nomic losses. Vaccines are major weapons against PRRSV, however, current available vaccines have several limita- tions. Developing chemical drugs as alternatives is required. On the basis of traditional medical knowledge, we pur- posely selected 15 natural products originated from Chinese herbs with anti-infectious effects. Their antiviral activi- ties were evaluated by PRRSV-indueed cytopathic effect（CPE） on MARC-145 cells and reverse transcription poly- merase chain reaction（RT-PCR） assay. Compounds ethoxysanguinarine（EOSG） and atractylodinol were found to be the hits which could significantly reduce PRRSV-associated CPE with 50% inhibited concentration（ICso） values of 7.9 and 39.4 ~tmol/L, respectively. Meanwhile, compounds ethoxysanguinarine and atractylodinol significantly de- creased mRNA expression of ORF7 gene in a dose-dependent manner. Study results suggest that compounds ethoxy- sanguinarine and atractylodinol may be useful anti-PRRSV drugs for swine industry or the hits for further lead opti- mization.