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生物反应器培养Vero细胞和H1N1流感病毒 被引量:3
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作者 周健 李国良 +5 位作者 宋绍辉 欧阳圣洁 刘泽 戴永娟 廖国阳 李卫东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期547-551,共5页
目的建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1N1全病毒灭活疫苗的新工艺。方法利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3 L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(... 目的建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1N1全病毒灭活疫苗的新工艺。方法利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3 L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(37±0.5)℃,溶解氧(50±20)%,p H 7.2±0.2,搅拌速度(50±20)r/min,待细胞在微载体上长成单层后,以0.1 MOI接种流感病毒Vero细胞高产适应株H1N1/JD/Va,将收获的病毒液经Sepharose 4FF和Capto Q两级纯化,灭活后制备疫苗原液及成品,按照《中国药典》三部(2015版)方法对其进行检定。结果使用无血清细胞培养液培养Vero细胞24 h贴壁率约83%,含血清细胞培养液培养24 h贴壁率为112%;灌流培养方式培养至第6天时,细胞均长至单层,无血清细胞培养液最终细胞数达到(133.4±2.0)×10~4个/m L,含血清细胞培养液最终细胞数达到(353.4±5.9)×10~4个/m L。无血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为388,单位细胞产毒比例为2.9;含血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为891,单位细胞产毒比例为2.5。用含血清细胞培养液培养Vero细胞接种病毒,收获病毒液制备的疫苗原液及成品经检测,各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求。结论建立了3 L生物反应器含血清细胞培养液培养Vero细胞和H1N1流感病毒的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础。 展开更多
关键词 生物反应器 VERO细胞 微载体 H1N1流感病毒
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去除百日咳毒素、丝状血凝素中内毒素的工艺探索 被引量:2
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作者 姬秋彦 高娜 +9 位作者 梁疆莉 胡文著 顾琴 马艳 戴永娟 李婧妍 史荔 孙明波 衡燮 杨卉娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期533-537,共5页
目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵... 目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵液进行内毒素去除,按《中国药典》三部(2015版)相关方法检测纯化样品的蛋白含量、内毒素含量、抗原含量,并进行SDS-PAGE分析。结果使用Triton法和离子交换层析法均可以将FHA和PT这两种成分的内毒素在脱毒前阶段降低至200 EU/mg以下。在合适的纯化条件下使用离子层析去除内毒素的能力高于Triton法,而在对抗原的回收率上Triton法又稍占优势。结论使用Triton法和离子交换层析法均可解决FHA和PT去除内毒素的问题,两类工艺下对目的蛋白活性的影响有待进一步研究。 展开更多
关键词 无细胞百日咳疫苗 百日咳毒素 丝状血凝素 内毒素
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Microstructure Characteristics of an Fe-Mn-C TWIP Steel After Deformation 被引量:3
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作者 dai yong-juan TANG Di +1 位作者 MI Zhen-li LU Jian-chong 《Journal of Iron and Steel Research(International)》 SCIE EI CAS CSCD 2010年第9期53-59,共7页
The microstructure characteristics of an Fe-Mn-C TWIP steel after deformation are investigated. The results show that the hot-rolled, cold-rolled and then annealed sample of the Fe-Mn-C TWIP steel has excellent mechan... The microstructure characteristics of an Fe-Mn-C TWIP steel after deformation are investigated. The results show that the hot-rolled, cold-rolled and then annealed sample of the Fe-Mn-C TWIP steel has excellent mechanical properties, and the true stress-true strain curve from tension tests exhibits repeated serrations. The deformed microstructure exhibits the typical planar glide characteristics such as no cell formation, dislocation pile-ups on a single slip plane, mechanical twins and stacking faults. There are equiaxial and deep dimple structures in the fractograph, indicative of a ductile fracture. Microcracks initiate from inclusions and twin-twin intersections. Deformation and fracture processes are the formation, growth and coalescence of microvoids. 展开更多
关键词 planar glide deformed twinning stack fault energy ductile fracture
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