H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定

研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的神经氨酸酶(NA)蛋白。试验为获得具有良好反应原性的NA蛋白,将H5N1亚型AIV(DK/YN/S4469/2022)密码子优化后的N1基因插入载体pFastBac1,构建的重组转移载体pFastBac1-N1转化至DH10Bac感受态细胞,经过蓝白斑筛选获得阳性重组杆粒rBacmid-N1,然后将重组杆粒转染至sf9昆虫细胞,获得N1亚型重组杆状病毒。结果显示:N1重组蛋白在sf9昆虫细胞中正确表达,并且该重组蛋白具有良好的反应原性,能够与N1蛋白单克隆抗体3F3发生特异性反应,其仅能识别N1亚型鸡血清,特异性较好。研究成功制备了N1重组蛋白,为NA蛋白表达方法提供参考并为临床血清样品的N1抗体检测方法的建立奠定基础。

两阶段云服务组合优化算法及其应用研究

针对目前云服务市场中如何快速有效为客户提供最优组合云服务问题,提出一种包括灰色关联和自适应遗传算法的两阶段云服务组合优化算法。首先根据用户云服务需求,利用灰色关联分析对云服务进行初步筛选形成候选云服务集;其次建立时间最短、成本最低、可用性、互操作性、可扩展性和满意度最佳的多目标决策模型,采用自适应遗传算法求解模型,确定最优云服务组合方案;最后通过算例证明该算法在解决最佳云服务组合方面的合理性和科学性。

2019-2022年中国H6N1亚型禽流感病毒的生物学特性分析

【背景】H6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)广泛流行于我国南方地区,是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配,并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段,产生新型重组病毒,进而威胁人类健康。【目的】通过对我国H6N1亚型AIV的演化动态及其相关生物学特性分析研究,为我国禽流感的综合防控提供数据支持。【方法】采集2019—2022年我国25个省(直辖市、自治区)的活禽交易市场及养殖场家禽喉和泄殖腔拭子,通过接种鸡胚分离到7株H6N1亚型AIVs并对其进行全基因组测序,分析其遗传演化特征、受体结合特性及其对SPF鸡和BALB/c小鼠的感染性。【结果】遗传演化分析表明,7株病毒的基因与分离于北美及东南亚地区的野鸟源病毒基因同源性较高,基因来源复杂,具有明显的遗传多样性。贝叶斯演化分析表明,H6亚型AIV HA基因曾发生过多次的跨洲际传播,欧亚谱系病毒在北美地区也有着较长时间流行。1株病毒HA基因与北美地区毒株基因高度同源,根据贝叶斯演化分析结果,推测该病毒在野鸟体内经历了复杂的基因重配后形成,后经野鸟传入我国。特殊氨基酸位点分析结果显示,病毒HA蛋白裂解位点序列均为PQIETR↓GLF,符合低致病性AIV特征;此外,另有1株病毒的NP蛋白发生Y52H突变,据报道,该突变对AIV获得抵抗人干扰素刺激基因BTN3A3的能力起到关键作用。受体结合特性分析表明,部分毒株具有双受体结合特性,但结合人源受体能力弱于结合禽源受体能力。病毒对SPF鸡的感染性试验表明,鸡感染A/chicken/Jiangxi/S40445/2019(H6N1)后能通过呼吸道及消化道排毒,并且病毒可在鸡群内通过接触传播。鸡感染A/duck/Jiangxi/S10941/2019(H6N1)后仅有少数鸡通过呼吸道排毒,病毒无法在鸡群间通过接触传播。BALB/c小鼠的感染性试验表明,H6N1亚型AIV无需提前适应便可在小鼠呼吸道内有效复制,但对小鼠仍呈低致病力。【结论】2019—2022年分离于我国的H6N1亚型AIV基因大部分来源于野鸟源病毒,候鸟可经东亚-澳大利亚迁徙路线将病毒传入我国;部分病毒能够结合人源唾液酸受体并在小鼠呼吸道内有效复制,表明该亚型病毒对公共卫生安全构成潜在威胁。

黄土结构性对其压缩-回弹变形特性的影响

工程中的地基沉降、基坑回弹等均与其压缩-回弹特性直接相关。原状黄土具有特殊的结构性,为揭示黄土结构性对其压缩回弹特性的影响,以西安某地两个不同深度Q_(3)黄土为研究对象,开展原状黄土、重塑黄土及原状饱和黄土压缩-回弹特性试验,得到原状黄土的压缩-回弹-再压缩-再回弹曲线,通过分析黄土压缩回弹过程中结构性指标的变化规律,揭示黄土结构性对压缩、回弹系数的影响规律。结果表明:当荷载不超过前期所受最大荷载时,压缩系数随结构性指标的增大而减小,超过后随结构性指标的增大而增大。直到荷载达到结构屈服应力时,黄土压缩-回弹的结构性指标最大,压缩系数同时达到极大值,随后两者均减小。回弹系数随结构性指标的减小而增大,且不同黄土回弹系数与结构性指标的关系近乎相同,说明黄土压缩、回弹系数均受其结构性的控制。

2011—2015年环洞庭湖区H3亚型禽流感病毒的分离鉴定与遗传演化

为了解环洞庭湖地区家禽H3亚型禽流感病毒的感染情况和进化规律,笔者对2011—2015年湖南省环洞庭湖地区的多个活禽市场与散养鸭场分离的31株H3亚型禽流感病毒进行基因测序和进化分析。结果表明:所有病毒的HA裂解位点不含连续的碱性氨基酸,为低致病性禽流感病毒的分子特征;各基因片段进化树显示部分病毒的PA与PB2基因与H5在相同分支,部分病毒的NP、PA、PB1与H7处于相同分支,表明H3可能与H5、H7亚型的禽流感病毒发生了复杂的基因交换;散养家禽分离的部分H3亚型禽流感病毒内部基因与越南、韩国等周边国家野鸟源的H3、H6、H7、H11等亚型同源性较高,可能有相同的进化来源。进一步将分离的病毒进行全基因比对,可划分出21种不同的病毒基因型。环洞庭湖地区H3亚型禽流感病毒基因来源复杂,表现出明显的遗传多样性。

复合地层稳态渗流水头损失计算模型试验研究

研究预测复合地层渗流过程中水头损失变化规律与简化计算,针对不同类型的复合地层进行稳态渗流条件下的水头损失简化计算模型试验。结果表明,复合地层渗流过程水头损失明显受到地层交替分布影响;粗粒土复合地层按照渗透系数较大的土层向渗透系数较小的土层方向连续渗流,水头损失大小采用达西定律简化计算;渗透系数小的粉质黏土层若是位于复合地层的上层或是中层,可能出现渗流的不连续,甚至是水头的消失,水头损失大小由渗透系数最小的地层控制简化计算;位于大厚度粉质黏土层下的饱水地层,水头损失从粉质黏土层临界面以下土层进行重新简化计算。

商品疫苗对我国h9.4.2.5分支H9N2亚型禽流感分离株的免疫保护

【目的】我国批准使用的H9亚型禽流感(avian influenza,AI)商品化灭活疫苗种类繁多,其免疫效果和选用受到养殖者的广泛关注。通过评估不同商品疫苗对我国近期H9N2亚型AIV的免疫保护效果,以期为H9亚型AIV的免疫防控提供科学参考。【方法】依据国家兽药基础数据库疫苗批签发数据,从在售的40种H9亚型AI商品疫苗中选择批签发数量较多的4种疫苗(A—D疫苗),进行免疫攻毒试验。4株h9.4.2.5分支的H9N2亚型分离株CK/XJ/S1204/2015、DK/JX/S4512/2017、CK/YN/S1666/2020和CK/NX/S4590/2020为攻毒毒株,分别测定4株病毒的鸡胚半数感染量(EID_(50))、鸡半数感染量(CID50)和细胞半数感染量(TCID50),以确定动物试验的攻毒剂量和细胞试验的感染剂量。每种疫苗以产品推荐剂量免疫3周龄SPF鸡各40只,同时设同日龄SPF鸡40只接种PBS作为对照组;免疫3周时,采集所有试验鸡血清,测定血凝抑制抗体(HI)和中和抗体(NT)滴度;同时将每种商品疫苗接种40只SPF鸡进行随机分组,每组10只,连同10只对照组鸡,以10 CID50的剂量鼻腔感染H9N2亚型分离株,分别进行商品疫苗对4株病毒的攻毒保护试验。采集攻毒后3、5 d喉头及泄殖腔棉拭子样品,接种10日龄鸡胚检测排毒情况,统计疫苗保护率,比较疫苗对H9N2亚型分离株的免疫保护效果。【结果】4株H9N2亚型分离株的CID50依次为10^(3.5)、10^(2.5)、10^(2.5)和10^(3.5)EID_(50)/0.1 mL。商品疫苗接种后3周,各免疫组SPF鸡血清中针对商品化H9亚型HI试验抗原(CK/SH/10/2001)的HI抗体均在9.4 log_(2)—11 log_(2)之间,但针对攻毒株的HI抗体平均效价在4.6 log_(2)—10.8 log_(2)之间,不同疫苗免疫组间存在较大差异,最大差异为64倍,各免疫组NT抗体平均效价在6.7 log_(2)—12.2 log_(2)之间,最大差异为32倍,对照组鸡的HI抗体和NT抗体均为阴性。以滴鼻方式感染不同H9病毒后,4种疫苗的免疫保护效果存在较大差别,在攻击CK/XJ/S1204/2015毒株的试验中,3种疫苗(B—D疫苗)能为免疫鸡提供80%以上保护;在攻击DK/JX/S4512/2017毒株试验中,仅1种疫苗(B疫苗)能为免疫鸡提供80%以上保护;在攻击CK/YN/S1666/2020毒株的试验中,2种疫苗(A和B疫苗)能为免疫鸡提供80%以上免疫保护;而攻击CK/NX/S4590/2020毒株,4种疫苗免疫鸡的保护率均低于80%,而同期各对照组鸡均排毒,排毒率均高于80%。【结论】不同商品疫苗预防近期H9亚型分离株感染的免疫保护效果存在较大差异,疫苗抗原与分离株之间的抗原性差异是免疫保护率降低的主要原因;使用H9N2亚型流行毒株测定免疫后的HI抗体和NT抗体可作为评价商品疫苗免疫保护效果的重要依据。本研究为商品H9疫苗的科学选用提供重要参考。

西安洪庆地铁车站地基湿陷性研究

以西安地铁洪庆站为研究对象,针对现行“湿陷性黄土地区建筑规范”评价方法所得结果误差较大的问题,开展了现场原位试坑浸水试验,表明了该车站位于自重湿陷性黄土场地。通过数值分析方法,模拟车站施工过程,分析了不同埋深条件下车站基底分布实际竖向应力,揭示了地铁车站修建过程中地层内的卸荷特征,建立了不同埋深车站基底及围护结构基底竖向压缩应力分布函数。应用Flamant弹性解,建立了基底黄土实际竖向压缩应力随埋深变化的计算公式。通过结构压缩屈服应力与综合物理特征量的关系、压缩孔隙比与初始孔隙比比值与压缩应力与结构压缩屈服应力比值的关系,建立了计算浸水饱和黄土湿陷系数的“浸水结构破坏湿陷性”评价方法,并与现场试坑浸水试验结果进行比较,验证了评价方法的可靠性。对黄土地区城市轨道交通工程设计中湿陷变形量预测和地基处理深度的合理确定具有一定的参考借鉴意义。

不同加工工艺对蒲公英叶茶品质及抗氧化活性的影响

以蒲公英叶为研究对象,分别利用传统工艺、渥堆发酵以及添加β-葡萄糖苷酶发酵工艺加工成蒲公英绿茶和红茶,并通过汤色色差评价、功能性成分定量分析、香气组分分析、抗氧化能力分析以及感官评价,以期确定蒲公英叶茶加工的最佳工艺。经过β-葡萄糖苷酶发酵的蒲公英叶茶能获得较佳的汤色品质,未经过发酵工艺的蒲公英绿茶能保留较高的黄酮、多糖以及蛋白质成分,分别为1.42%、7.23%以及1.81%。未添加β-葡萄糖苷酶渥堆发酵的蒲公英红茶含有最多嗅感化合物,包括糠醇、5-甲基呋喃醛、大茴香醛、乙酸甲酯、苯乙酸甲酯、2-乙基丁酸、2-甲基四氢呋喃-3-酮、2,3-辛二酮等18种特有香气物质,主要表现为甜香、山楂、可可、肉类、爆米花等令人愉快的香气,为其获得较高感官评价香气评分奠定了物质基础,且其总抗氧化能力、DPPH清除率以及羟基自由基清除率分别为3.87 mmol/L FeSO_(4)·7H_(2)O、73.99%和34.21%,具有显著性的抗氧化能力。不同加工工艺制作的蒲公英叶茶品质及抗氧化活性存在差异性,其中渥堆发酵工艺较为适合蒲公英叶茶的制作。

稳态渗流条件下复合地层水头损失模型试验研究

为了研究复合地层渗流过程中水头损失的变化规律,采用卵石土、粗砂、细砂、粉质黏土四种不同渗透系数的材料组合成六种类型的复合地层,利用自主研发的多功能粗粒料渗流试验装置对这六种类型的复合地层进行稳态渗流条件下的水头损失模型试验研究。结果表明:复合地层渗流过程水头损失受地层交替分布影响明显;按照渗透系数较大的土层向渗透系数较小的土层方向渗流,该渗流过程完全连续;渗透系数小的土层若是位于复合地层的上层或是中层,会导致复合地层中渗流的不连续,甚至是水头的消失,渗流的过程是由其中渗透系数最小的地层来决定的;模型试验结果与实际工程地层、水位勘察结果相一致。

地铁风井横通道地层注浆加固范围优化分析

以西安地铁9号线香-纺区间先盾构隧道后矿山法横通道风井施工为例,为工程控制地表沉降和侧向变形提出合理的加固范围。通过数值分析方法,建立二维有限元模型研究地下横通道注浆加固范围对具体工程地表沉降和侧向变形的影响。结果表明:随着加固范围的增加,地表变形和侧向变形均得到明显的限制。加固范围超过2 m后,随着加固范围的持续增大,虽然可以继续减少地面沉降,但加固效果逐渐减弱;但对于通道侧向变形,加固2 m,并没有起到关键作用,随着加固范围的增加,侧向变形的减小非常显著;结合具体工程实际,最终确定工程暗挖通道加固范围为3 m。

越河盾构隧道开挖对复合地层渗流场的影响作用研究

越河盾构隧道掌子面通常存在较高的水头压力,使得土压平衡较难实现,且较大的渗透坡降也容易引起管涌、盾尾刷击穿等工程灾害。为探明隧道开挖对复合地层渗流场的影响作用,以西安地铁9号线下穿灞河段为例,采用有限元分析软件,选取典型复合地层开展多种开挖渗流条件下的稳态渗流分析,研究了盾构隧道开挖渗流条件下复合地层的总水头、渗透坡降和渗流速度等渗流场分布特征。结果显示,由隧道开挖渗流引起地层水头损失的大小及影响范围与开挖渗流速度的大小直接相关;开挖渗流速度越大,则地层水头损失越大,掌子面的水压随之减小;地层水头损失变化与渗流路径相关,由入渗面至出渗面沿渗流路径逐渐增大。研究表明,从一定程度上来看,开挖渗流速度越大,越有利于盾构机实现土压平衡条件,从而降低盾构机掘进的施工难度,不利的是此时地层渗透坡度变大,需要防止地层产生渗透破坏。

“先隧后井”法施工对地表沉降及盾构管片受力的影响研究

以西安地铁9号线香—纺区间先盾构隧道后矿山法横通道风井施工为例,该工程首次采用"先隧后井"法施工。"先隧后井"法施工风险较大,有必要针对该工法提出合理的工程措施和建议,为设计施工提供指导和参考。为此,通过数值分析方法,建立三维有限元模型,研究"先隧后井"法施工引起的地表沉降和既有盾构管片的力学响应。

水松纸激光打孔控制系统设计

对水松纸激光打孔控制系统进行了研究,其主要由触摸屏和PLC、激光控制、多棱镜控制、张力控制、水松纸卷绕控制等5部分组成。采用触摸屏完成各种操作、参数设置、参数和状态显示等;PLC完成对各种I/O信号的处理、故障自诊断和联锁保护;多棱镜控制用于将连续激光转换成脉冲激光束;张力控制主要用于根据不同型号的水松纸预置一个合适的张力;水松纸卷绕控制主要用于打孔过程中线速度和张力恒定。讨论了各控制部份的详细实施方案,并对有些方案作了分析和对比。经多年实际应用,本控制系统完全能满足线速度600 m/min以下水松纸激光打孔要求。

超声引导下腰方肌阻滞对腹腔镜胆囊切除术患者术后胃肠功能及疼痛应激的影响

目的:探讨超声引导下腰方肌阻滞对腹腔镜胆囊切除术患者术后胃肠功能以及疼痛应激指标的影响。方法:选取2018年2月-2020年8月常熟市第二人民医院收治的87例胆囊切除术患者作为研究对象,采用硬币投掷法随机将其分为对照组43例和试验组44例。对照组术后采用静脉自控镇痛,试验组在此基础上联合超声引导下腰方肌阻滞镇痛。比较两组术后胃肠功能恢复情况(肠鸣音恢复时间、排气时间及排便时间);视觉模拟评分法(VAS)评价两组术后不同时间点的疼痛程度;酶联免疫吸附法测定两组术前、术后不同时间点血清疼痛介质[前列腺素E_(2)(PGE_(2))和P物质(SP)]、放射免疫法测定应激激素指标[皮质醇(Cor)和去甲肾上腺素(NE)],统计不良反应发生率。结果:试验组术后肠鸣音恢复时间、排气时间及排便时间均显著短于对照组(P<0.05)。试验组术后2、6、12、24 h的VAS评分均低于对照组(P<0.05)。两组术前PGE_(2)、SP、Cor和NE水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);试验组术后2、6、12、24 h的PGE_(2)、SP、Cor和NE水平均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为25.58%,高于试验组的9.09%(P<0.05)。结论:超声引导下腰方肌阻滞可显著改善腹腔镜胆囊切除术患者术后疼痛程度以及疼痛应激指标,促进胃肠功能尽早恢复,且不良反应少,临床上应用价值较高。

上覆土层开挖对地铁隧道的影响分析与研究

以西安太华路立交改造工程上跨地铁四号线区间为例,通过工程类比、现场试验、理论计算及数值模拟等几种分析方法研究上覆土层开挖对地铁隧道所造成的影响。通过分析得出上覆土层开挖工况下地铁区间隧道的受力及变形状态,提出对应的工程措施减轻土体开挖对地铁隧道的影响,判断地铁结构的安全性和可靠性,为类似工程建设提供相关参考。主要得出以下结论:土层开挖卸载所引起盾构隧道变形主要为基底回弹上浮变形;土层开挖后隧道的抗浮问题需重点关注;几种分析方法所得到的结果有一定出入,但是大的变形趋势可以达到相互验证的目的;分层开挖对控制隧道变形具有重要的作用。

西安地铁工程降水风险评价及处置措施研究

降水是保证城市轨道交通工程施工自身安全的重要措施,其对周边环境影响的评价和处置是当前地下工程建设的难点。结合西安地质特征、周边环境和工程经验,提出了西安地铁工程降水风险评价体系和处置措施。降水风险评价体系从地层特征、降水深度、接近程度等三个影响周边环境安全的核心因素出发,进行了分级分类,并据此制定了风险分级处置措施。在风险评价中,重点突出饱和软黄土降水大变形的特征。本文的研究基于大量工程实践,不仅有助于完善《城市轨道交通地下工程建设风险管理规范》,而且可切实有效指导工程设计和施工,规避城市建成区地铁建设引起的周边环境风险。

纤维纱加筋黄土一维蠕变特性试验研究

将纺织废旧布料经过开松、分梳、切断制成纤维纱,在黄土中掺入一定比例及长度的纤维纱,制备成纤维纱加筋黄土,利用一维蠕变仪研究在不同竖向荷载作用下,纤维纱加筋黄土的一维蠕变变形特性。试验结果表明:在不同竖向荷载作用下,纤维纱加筋黄土的蠕变应变均小于素黄土的蠕变应变,纤维纱加筋对于抑制黄土的蠕变变形具有积极作用;当竖向荷载大于400k Pa时,纤维纱加筋黄土达到稳定蠕变的时间相较于素黄土更长;随着纤维纱掺加比例及纤维纱掺加长度的增大,纤维纱加筋黄土的蠕变应变呈现出先减小后增大的变化趋势;纤维纱最佳掺加比例为0.3%,纤维纱最佳掺加长度为30 mm。构建可以反映土体进入蠕变阶段后,长期强度稳定性能的蠕变指数表达式,当竖向荷载在400~800 kPa时,蠕变指数增长显著,当竖向荷载大于800 kPa时,蠕变指数随竖向荷载的增大逐渐趋于稳定。结合一维蠕变试验数据,建立了考虑纤维纱掺加比例及纤维纱掺加长度影响的纤维纱加筋黄土一维蠕变经验模型。

纤维纱加筋黄土动力变形动强度及震陷特性试验研究

将人工合成类纺织废弃涤纶布料进行开松、分梳、切断形成涤纶纤维纱,将具有良好抗酸碱腐蚀性能的涤纶纤维纱按照一定掺加比例与素黄土拌合制成纤维纱加筋黄土。利用新型伺服液压缸驱动动单剪仪对素黄土及纤维纱加筋黄土进行动力特性试验研究。分析其动应力-应变关系、阻尼比特性、动强度特性及震陷等变化规律。试验结果表明:同一动剪应变条件下,纤维纱加筋黄土的动剪应力大于素黄土;同一破坏振次条件下,随着纤维纱掺加比例的增加,动剪应力呈现先增大后减小的变化趋势,当纤维纱掺加比例为0.20%时,动剪应力最大;随着法向固结应力的增大,素黄土及纤维纱加筋黄土的动剪应力随之增大;同一法向固结应力条件下,阻尼比随着纤维纱掺加比例的增大而增大;不同纤维纱掺加比例的加筋黄土动剪应力比?d/(2?v)与破坏振次Nf的关系可近似归一化处理;一定振次条件下素黄土及纤维纱加筋黄土的残余应变均随着循环动剪应力的增大而增大;同一循环动剪应力条件下纤维纱加筋黄土的残余应变小于素黄土的残余应变;同一循环动剪应力条件下随着纤维纱掺加比例的提高,加筋黄土的残余应变减小;随着振次的增加,残余应变呈逐渐增大的变化趋势;震陷临界动剪应力随纤维纱掺加比例的增加呈先缓慢增大,再急剧上升,最后趋于稳定的变化趋势;根据试验曲线及相关数据确定出提高黄土抗震陷性能的最佳纤维纱掺加比例为0.20%。

线纹海马源溶藻弧菌的分离、鉴定及药敏分析

为明确深圳某海马养殖基地线纹海马(Hippocampus erectus)突发性死亡病因,本研究从患病死亡线纹海马病灶组织分离到一株优势菌SZVA20190621,随后对分离菌的形态特征、生理生化特性、回归感染、16S r RNA基因进化及药物敏感性进行研究。结果显示,该菌葡萄糖产气、甘露醇、覃糖、蔗糖、氧化酶活性和MR等生理生化鉴定为阳性;与NCBI上溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) KT986151具有98.16%的同源性;回归感染实验表明菌株SZVA20190621对线纹海马具有强致病性,LD_(50)为3.73×10^(5)CFU/mL。综上结果,鉴定该菌为致病性溶藻弧菌。药敏结果显示,该菌株对头孢唑林、头孢噻吩、哌拉西林、大观霉素、阿米卡星、克拉霉素、克林霉素及呋喃妥因耐药;对氨曲南、头孢西丁、头孢呋辛、头孢曲松、卡那霉素、红霉素中度敏感;对头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢吡肟、链霉素、妥布霉素、庆大霉素、复方新诺明、氯霉素等17种抗生素高度敏感。本研究为线纹海马养殖中溶藻弧菌病的防控提供一定的参考依据。