2021年~2022年我国猪盖塔病毒流行情况调查及其E2基因序列遗传变异分析

为了解2021年~2022年我国猪盖塔病毒(GETV)的流行现状和遗传变异情况,本研究对我国16个省份采集2512份临床样品,采用荧光定量RT-PCR方法进行GETV的检测,按照省份和地区进行GETV流行病学调查分析;采用RT-PCR方法对部分GETV阳性样品经PCR扩增E2基因并连接至p MD18-T载体并测序,利用DNAStar软件分析E2基因及其编码氨基酸序列与GETV参考株相应序列的同源性及其氨基酸变异情况;利用MEGA6.0软件构建E2基因的进化树,分析GETV的基因型及遗传进化关系。结果显示,7个省份猪群样品中均检测出GETV阳性样品,阳性率为3.34%(84/2512)。其中,陕西省和黑龙江省为首次在猪中检测到GETV。不同生长阶段猪中,仔猪GETV的检出率最高,达9.52%。同源性分析显示,获得的32个猪源GETV E2基因序列之间的同源性为98.3%~100%,与马来西亚GETV MM2021株相应基因序列的同源性为94.4%~94.9%。氨基酸序列变异分析显示,与参考株相比,本研究测序的E2蛋白有9个氨基酸位点只出现于猪源GETV。遗传演化分析显示,32个GETV株均属于III亚群,与III亚群内早期中国M1株、韩国QIAG9301株、日本Kochi等病毒株相比,本研究鉴定的GETV形成了新的进化分支。本研究揭示了我国当前猪群中GETV的感染现状及流行株的遗传变异情况,为该病毒的分子生物学研究和相关疫病防控策略的制定提供基础数据和参考依据。

我国部分省份牛冠状病毒HE基因遗传变异分析

2020-2023年收集我国14个省份78个临床发病牛群的肛拭子、粪便、组织等样品1819份,用实时荧光RT-PCR方法进行牛冠状病毒(BCoV)检测,并选取部分核酸阳性样品进行HE基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。78个发病牛群中,BCoV阳性场占56.41%,共获得35条HE基因全长序列,与参考序列相比,核苷酸同源性为97.0%~100.0%,氨基酸同源性为97.0%~99.8%。系统进化分析表明,BCoV毒株HE基因在进化上呈现典型的地域性特点,亚洲毒株和美国毒株进化上较为接近,而欧洲毒株位于另一个分支,所测毒株与中国参考毒株处于亚-美型毒株分支中,位置相对较为集中。所测35个HE序列中,有34个没有发生插入或缺失突变,来自宁夏的BCoV/NX13/CHN/2023毒株其HE基因存在12个核苷酸的插入突变,证实了BCoV HE基因插入变异株在我国的存在。基因重组分析显示,该毒株与BCoV/HeB120/CHN/2021的HE基因可能发生了重组,预测重组值分别为0.797和0.759。说明了我国部分省份临床发病牛群BCoV感染及BCoV HE基因的遗传变异,为明晰我国BCoV流行毒株分子特征提供参考。

猪圆环病毒2型实时荧光RAA检测方法的建立及初步应用

根据猪圆环病毒2型(PCV2)Rep基因序列,设计引物及探针,建立了PCV2实时荧光重组酶介导等温扩增(recombinase-aid amplification, RAA)检测方法。该方法能在40℃恒温条件下20 min内对病原进行快速检测,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪传染性胃肠炎病毒、繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒3型和口蹄疫病毒均无交叉反应;对病毒核酸的最低检测限为21.2 copies/μL。用荧光PCR检测方法与建立的荧光RAA检测方法对66份临床样品进行检测,两种方法符合率为90.09%。结果表明,建立的PCV2实时荧光RAA方法适用于PCV2的快速检测。

2021年我国部分省份猪圆环病毒2型流行病学调查和基因分析

为了解2021年我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行情况,本试验于7个地区16个省采集1685份组织样品,采用实时荧光定量PCR检测方法检测PCV2,对其中45份阳性样品进行全基因组序列扩增和遗传演化分析。结果显示,被检样品PCV2总阳性率为9.85%(166/1685),场总阳性率为32.71%(35/107);各地区样品阳性率介于4.29%~19.00%,东北地区样品阳性率最高;各地区场阳性率介于6.90%~60.00%,华中地区场阳性率最高。PCV2a、PCV2b和PCV2d亚型分离毒株占比分别为31.11%、4.44%和64.44%,其中PCV2d亚型为优势流行株,未发现PCV2e和PCV2c亚型。有24株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个赖氨酸(K)延伸,另有1株PCV2分离毒株的Cap蛋白在C末端有1个蛋氨酸(M)延伸。结果表明,2021年我国PCV2感染范围广,污染程度高,且正在不断发生遗传变异,需要持续跟踪监测PCV2的流行情况,以便及时制定有效的防控措施。

穴位局部嘌呤物质介导预电针心俞穴改善大鼠急性心肌缺血

目的探讨穴位局部嘌呤物质在预电针心俞穴改善大鼠急性心肌缺血中的可能作用。方法选用雄性清洁级SD大鼠18只,随机分成生理盐水对照组、急性心肌缺血组、预电针心俞穴组,每组6只。急性心肌缺血组用背部皮下多点位注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)制备急性心肌缺血大鼠模型,预电针心俞穴组在造模前电针双侧心俞穴3 d。全自动生化分析仪测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和超氧化物歧化酶(SOD)活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定心俞穴穴区组织中嘌呤物质三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)浓度。结果与生理盐水对照组比较,急性心肌缺血组血清SOD显著下降(P<0.05);心俞穴穴区组织ATP显著降低(P<0.05),ADP降低,但差异无统计学意义(P>0.05),AMP浓度显著增加(P<0.05)。与急性心肌缺血组比较,预电针心俞穴组血清SOD含量显著增加(P<0.05);心俞穴穴区组织ATP、ADP含量升高,但差异无统计学意义(P>0.05),AMP含量显著降低(P<0.05)。结论预电针心俞穴对大鼠急性心肌缺血损伤具有一定的保护作用,心俞穴穴区组织中嘌呤物质可能启动了针刺信号的转换和起始传递。

塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条检测方法的建立

为建立塞尼卡谷病毒(SVV)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对SVV 3D基因设计了引物和探针,通过反应条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了SVV RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒无交叉反应;在40℃、20 min内可检测的最低浓度为56拷贝/μL质粒标准品;通过3次重复试验检测,LFD检测线灰度值变异系数范围在4.49%~9.73%。利用该方法对120份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究首次建立了检测SVV的等温、快速RPA-LFD方法,读取结果不依赖任何仪器设备,为猪群感染SVV的现场快速诊断、流行病学研究和根除方案的制定提供帮助。

健康猪体内塞尼卡病毒的分离和鉴定

塞尼卡病毒(SVA)属于小核糖RNA病毒科塞尼卡病毒属,可以引起猪的水泡样病变、跛行和新生仔猪突然死亡等。为了解SVA的特性,本研究将从健康猪体内鉴定的SVA阳性样品接种BHK-21细胞分离SVA,采用PCR扩增其VP1基因,并分析其遗传变异特点。结果显示,10份SVA阳性样品中有2份(GXT91和GXT94)能够在BHK-21细胞增殖并产生明显的细胞病变,可达10^7.6TCID50/mL,其VP1基因与SVA参考株NC_011349的核酸同源性为90.2%~90.6%,推导氨基酸同源性为96.7%~97.1%,进化树显示新分离的GXT91和GXT94病毒株属于流行分支II。本研究为SVA的疫苗研制奠定了基础。

一起猪繁殖与呼吸综合征与猪瘟混合感染的紧急流行病学调查

为探寻山东省某猪场暴发的仔猪腹泻、高热、呼吸困难等病症的原因,以及时控制并消除疫情,开展了紧急流行病学调查。对发病猪场进行现场调查、查看相关记录并进行临床诊断;采集病变组织样品,进行实验室检测;用Excel软件整理调查结果,并进行病因分析。结果表明,本次暴发系猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪瘟病毒混合感染所致,引种、购猪车带毒、断奶应激均可能是诱发此次疫情暴发的原因。针对调查结果提出的一系列防控措施建议,促使疫情最终得到控制。

1株NADC30-like重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及遗传变异分析

为研究山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行病毒株的遗传变异情况,本研究从山东省威海市某疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场采集的猪肺脏组织中分离到1株PRRSV,命名为SDwh,并对其进行了全基因组序列测定、遗传演化分析和重组分析.结果显示:该病毒株在Marc-145细胞上生长良好,可见明显细胞病变;全基因组演化分析和同源性比对分析结果显示,SDwh株与美国病毒株NADC30和中国的NADC30-like位于同一分支;与北美病毒株NADC30的同源性最高,为93.1%;与我国分离的NADC30-like病毒株CHsx1401、JL580的同源性分别为91.1%和88.4%;与北美经典病毒株VR2332、中国HP-PRRSV JXA1和HuN4的同源性均为85.3%;与欧洲型病毒株Lelystad-virus(LV)同源性最低,为60.6%.与VR2332相比,Nsp2氨基酸序列比对结果显示,SDwh株存在NADC30-like病毒株典型的131个不连续氨基酸的缺失,同时在584~585位缺失2个氨基酸;GP5氨基酸序列比对结果显示,SDwh在GP5抗原表位上有氨基酸的突变.全基因组重组分析结果显示,SDwh株是一株重组病毒株,为NADC30与JXA1-P80的重组病毒,潜在的重组位点位于Nsp2中(2066 nt).本研究结果为PRRSV流行株的重组、演化分析和防控提供借鉴意义.

Nonlinear analytical solution for one-dimensional consolidation of soft soil under cyclic loading

This paper presents an analytical solution for one-dimensional consolidation of soft soil under some common types of cyclic loading such as trapezoidal cyclic loading, based on the assumptions proposed by Davis and Raymond （1965） that the decrease in permeability is proportional to the decrease in compressibility during the consolidation process of the soil and that the distribution of initial effective stress is constant with depth the solution obtained, some diagrams are prepared and the It is verified by the existing analytical solutions in special cases. Using telex ant consolidation behavior is investigated.

规范化癌痛护理模式改善癌痛患者疼痛程度及负性情绪的效果

目的探讨规范化癌痛护理模式改善癌痛患者疼痛程度及负性情绪的效果。方法选取我院2016年2月至2018年2月收治的70例癌痛患者作为研究对象,按照护理方法不同将其分为观察组(35例,常规护理+规范化癌痛护理)与对照组(35例,常规护理)。比较两组患者的护理效果。结果干预后,观察组疼痛数字评分法(NRS)、焦虑自评量表(SAS)评分、抑郁自评量表(SDS)评分及癌症治疗功能评价量表(FACT-G)评分均明显优于对照组(P<0.05)。结论规范化癌痛护理模式可改善癌痛患者疼痛程度及负性情绪,有助于患者生活质量的改善。

简谐振子模拟中能量的变化

本文以简谐振子为例讨论在计算机模拟中保守系统的能量变化。模拟和解析分析表明常微分方程通用解法使能量随着时间指数地变化,而Verlet算法只带来振子能量的涨落,能量不会单调变化。这些结果为理解分子动力学模拟算法的特性提供了直观的参考。

艾灸命门穴对新西兰家兔督脉循行线上皮肤温度的影响

目的观察艾灸新西兰家兔命门穴对督脉主要经穴皮肤温度的影响。方法使用红外热像仪分别采集10只家兔背部热像图,观察自然状态下、艾灸命门穴30 min时命门、大椎、身柱、至阳、中枢、腰阳关及命门左右旁开皮肤温度变化情况。结果艾灸命门30 min时,督脉的整体温度升高,有显著性差异(P<0.05);命门穴温度高于左右旁开对照点(P<0.05);督脉循行线上的中枢、命门、腰阳关穴位温度明显升高(P<0.05),而大椎、身柱的温度略有下降,但无显著性差异。结论命门作为原气发动之机,生命活动的动力,灸之可以有效提高督脉整体皮肤温度,促进督脉气血运行。

预电针心俞穴对急性心肌缺血大鼠心肌保护作用的研究

目的探讨预电针心俞穴对急性心肌缺血大鼠心肌保护作用的可能机制。方法选用雄性清洁级SD大鼠18只,随机分成生理盐水对照组、急性心肌缺血组、预电针心俞穴组。急性心肌缺血组、预电针心俞穴组用背部皮下多点位注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)制备急性心肌缺血大鼠模型,预电针心俞穴组在造模前电针双侧心俞穴3 d。采用苏木精-伊红染色法(HE染色法)观察大鼠心肌组织病理学变化;q PCR检测心肌组织SP mRNA和CGRP mRNA表达。结果与急性心肌缺血组相比,预电针心俞穴组可改善大鼠心肌组织病理学变化,抑制心肌组织SP mRNA和CGRP mRNA的表达,心肌缺血损伤程度减轻。结论预电针心俞穴对大鼠急性心肌缺血损伤具有一定的保护作用,可能通过调节SP及CGRP表达对心肌缺血损伤起到保护作用。

与急性心肌缺血损伤相关体表敏化穴位的初步分布观察

目的:观察与急性心肌缺血损伤相关的体表伊文思蓝(EB)渗出点的分布,并和大鼠穴位的分布进行比较,为疾病状态下的穴位敏化提供实验依据。方法:SD大鼠80只,分为生理盐水对照组(20只)、模型组(60只)。采用背部皮下多部位注射异丙肾上腺素(60mg/kg)造成急性心肌缺血损伤模型(连续2次,间隔24h),当天尾静脉注射EB。观察造模当天(注射完成4h后)EB渗出点的分布。结果:急性心肌缺血损伤造成体表一些部位的神经源性炎性反应点,即EB渗出点,这些反应点的分布与穴位分布呈现一定的相关性;分布位置主要位于:脾、胃俞(74.41%),心俞(60.46%),肝俞(46.51%),肾俞(39.53%)。但这些EB渗出点在正常状态时很少或者不出现。结论:急性心肌缺血损伤可促使EB在体表渗出,渗出点主要分布在脾、胃俞,心俞等穴位,提示在疾病状态下沉寂的穴位可以被激活。

猪塞尼卡病毒TaqMan探针荧光RT-PCR方法的建立和应用

塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)为小核糖RNA病毒科塞尼卡病毒属的单股正链RNA病毒,可引起猪的水泡样病变、跛行和新生仔猪突然死亡等,我国已经有多个省市检测到了本病毒。为建立一种快速高效、适应范围广的SVA检测方法,本研究以分离到的1株SVA流行病毒株GXT91作为参考毒株,设计合成了TaqMan探针和1对引物建立了SVA的荧光RT-PCR方法,并分别进行该方法的敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:该方法的敏感性达到了17.4个分子拷贝/μL,与口蹄疫病毒、猪瘟病毒等病原无交叉反应,表明它具有较高的特异性,组间和组内重复性试验的变异系数均小于2%,表明其重复性较好。进一步运用该方法对48份临床样本进行检测,从中发现了12份阳性样品。这表明本研究建立的荧光RT-PCR是一种良好的诊断SVA的方法,可用于待测样本中SVA的诊断和流行病学调查监测等。

我国10株猪细小病毒7型全基因组遗传与重组分析

猪细小病毒7型(porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为进一步了解PPV-7的分子流行病学特征,采用分段扩增的方法对来自我国不同省份的10份PPV-7阳性样品进行全基因组扩增和测序,并利用DNAStar、MEGA等软件对这10株PPV-7流行毒株进行分子遗传和重组分析。结果表明,10株PPV-7流行毒株与PPV-7参考毒株的核苷酸序列同源性为92.2%~95.9%,与其他同属的田鼠细小病毒2(KX272741)等参考毒株的同源性为46.1%~50.8%,与细小病毒亚科其他属参考毒株的同源性为29.4%~33.1%;因此作者建议重新将PPV-7归于一个新的病毒属。用RADP软件进一步分析PPV-7流行毒株重组时发现,不同流行毒株的重组位点和父系病毒的来源均不相同,表明这些流行毒株仍在不断发生变异和重组,且这种变异具有不确定性。这无疑增加了PPV-7致病性增强的风险,提示我们应持续重视和关注PPV-7的分子流行病学监测。

嘌呤物质及其受体与哮喘关系的研究进展

在明确了胞外嘌呤物质为重要的信号传导分子的基础上,分析P1、P2两大类特异性嘌呤受体产生的生物学作用,概述嘌呤-受体对哮喘的影响,归纳出嘌呤-受体在哮喘发作与治疗中的作用,并在嘌呤物质及其特异性受体方面,对三伏灸治疗哮喘的理论研究的发展趋势进行分析,提出嘌呤受体的研究,将发展为探讨三伏灸治疗哮喘的作用机制的研究热点。

社区老年人群主观认知下降与握力的相关性研究

目的探讨社区老年人群主观认知下降(SCD)与握力的关系及相关危险因素。方法于2021年1—3月采用方便抽样法选取安徽省宿州市东关社区264名常住居民作为研究对象,根据主观认知下降问卷9(SCD-Q9)评估的结果分为SCD组(153例)和非SCD组(111例)。2组研究对象均进行一般信息问卷调查、体格检查、生化指标等相关检查,采用握力器测量双手握力。收集2组人群的检测结果进行比较,采用logistic回归分析,逐步选择法将性别、年龄等混杂因素纳入回归模型中,分析主观认知下降与握力的相关性。结果(1)264名研究对象中主观认知下降153例,占57.95%。(2)SCD组的握力[(23.08±3.09)kg]明显低于非SCD组[(27.99±4.79)kg],差异有统计学意义(t=8.475,P<0.001)。(3)2组年龄、性别、睡眠情况比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。(4)Logistic回归分析显示,未调整混杂因素,握力与主观认知下降之间有相关性(OR=0.723,95%CI:0.664~0.788,P<0.001);调整相应混杂因素后,握力与主观认知下降仍有相关性(OR=0.716,95%CI:0.653~0.786,P<0.001)。结论低握力、女性、高龄、失眠是SCD的危险因素,握力测量具有简易、低成本、操作性强等优点,可作为社区评估认知功能下降的一项指标。

考虑长径比影响的黄土地区钻孔灌注桩桩侧摩阻力取值研究

为研究长径比对黄土地区钻孔灌注桩桩侧摩阻力的影响,采用1/30的相似比设计了3根长径比不同的模型试验桩MS1,MS2,MS3,并对其进行了室内加载试验,通过分析3根试桩的荷载-沉降曲线、桩身轴力和桩侧摩阻力的变化,研究了其承载和沉降特性。基于荷载传递法建立了单桩荷载传递模型,经过理论分析,推导出双曲线函数中参数a的表达式,拟合出参数b的表达式,利用双曲线函数表达式计算出室内试验用土的桩侧摩阻力。结合2个依托工程,利用推导出的双曲线函数法求解了黄土状土、老黄土的桩侧摩阻力,将实测结果和数值模拟结果进行了对比分析。结果表明:(1)当竖向荷载小于极限荷载时,随着长径比的增大,桩顶沉降量减小,当达到极限荷载以后,随着长径比的增大,桩顶沉降量增大;(2)随长径比的增大,桩端阻力占荷载的比例逐渐减小,桩侧摩阻力达到极限值的位移逐渐下移,并且数值减小,桩身上部的侧摩阻力优先充分发挥作用,随后桩身下部的侧摩阻力开始工作,承担荷载;(3)利用双曲线函数计算的桩侧摩阻力与实测结果的误差最小为7.08%,可以满足工程要求,因此双曲线函数解析法可以用于求解工程中桩基的侧摩阻力;(4)利用双曲线函数法求解的2个依托工程的桩侧摩阻力与实测值、模拟值相比误差均在15%以内,说明可将考虑参数修正的双曲线函数法应用于黄土地区桩基桩侧摩阻力标准值的取值计算。