桦褐孔菌黄酮类化合物的提取工艺优化及抗氧化活性

以桦褐孔菌为试材,采用乙醇热回流进行黄酮类化合物的提取,研究了单因素(料液比、提取温度、乙醇浓度以及提取时间)对桦褐孔菌中黄酮类化合物提取率的影响,通过正交实验对其提取工艺进行优化,利用FRAP、DPPH·、ABTS+·三种方法测定其抗氧化活性。结果表明:桦褐孔菌黄酮类化合物提取率影响因素为提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比,最佳工艺为提取温度75℃,乙醇浓度60%,提取时间2.0 h,料液比1∶25 g/m L,在此工艺下提取桦褐孔菌黄酮类化合物含量为53.25 mg/m L,提取率为10.66%。桦褐孔菌黄酮类化合物浓度为200μg/m L时,其总抗氧化能力相当于464.53μmol/L Fe SO4。对DPPH自由基清除率的EC50为36.44μg/m L;对ABTS+自由基清除率的EC50为299.89μg/m L。研究表明桦褐孔菌中黄酮类化合物对DPPH·和ABTS+·的清除率接近VC,具有较强的抗氧化活性,有潜力作为天然抗氧化剂推广应用。

复方北冬虫夏草提取工艺及其对链尿佐菌素诱导1型糖尿病大鼠的降血糖作用研究

目的:优化复方北冬虫夏草的提取工艺,并对其降血糖作用进行研究。方法:采用水煎煮法提取复方北冬虫夏草,通过单因素实验和正交试验优化提取工艺;以链尿佐菌素诱导Wistar雄性大鼠为1型糖尿病模型,成模后随机分为模型组,复方北冬虫夏草低、中、高剂量组,另取10只正常大鼠作为空白对照组,给药12周后分别称定各组大鼠体重,检测血清胰岛素、血糖,肝脏丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及肾脏甘油三酯、总胆固醇水平,通过HE染色观察肾脏组织形态变化。结果:复方北冬虫夏草最佳提取工艺为:料液比1∶10 g/mL,提取3次、每次提取1.5 h、提取温度为70℃,经三次平行试验验证平均提取率为53.1%,平均多糖得率为5.1%,平均总皂苷得率为1.3%;与模型组比较,复方北冬虫夏草各给药组均可改善糖尿病大鼠的相关指标,其中高剂量组大鼠体重、胰岛素水平和GSH-Px活力显著增加(P<0.05),SOD活力极显著提高(P<0.01),而血糖值、肝脏MDA及肾脏TG、TC水平则极显著降低(P<0.01);各给药组大鼠的肾损伤程度均得到明显改善。结论:优化了复方北冬虫夏草的提取工艺,最佳提取工艺条件下所得提取物对链尿佐菌素诱导的1型糖尿病大鼠具有显著的降糖功效。

姬松茸多糖的提取及其对D-半乳糖诱导衰老小鼠的免疫调节作用

建立姬松茸多糖(Agaricus blazei polysaccharides,ABP)的提取方法,并研究姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老小鼠免疫调节作用。采用水提醇沉法提取姬松茸多糖,通过单因素实验和正交试验筛选并优化姬松茸多糖的最佳提取工艺;采用D-半乳糖(400 mg/kg)构建衰老小鼠模型,将小鼠随机分为5组,空白对照组(CON)、模型组(MOD)、姬松茸多糖低剂量组(ABP-L,200 mg/kg/d)、姬松茸多糖中剂量组(ABP-M,400 mg/kg/d)、姬松茸多糖高剂量组(ABP-H,800 mg/kg/d);分别测定各组小鼠胸腺和脾脏指数;CCK-8法测定ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化;ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6含量。结果表明,姬松茸多糖最佳提取工艺为:提取温度100℃,提取时间3 h,料液比1∶20 g/mL,提取次数3次,此时姬松茸多糖的平均得率为8.814%±0.109%;与模型组相比,姬松茸多糖高剂量组显著提高小鼠脾脏(p<0.01)和胸腺指数(p<0.05),姬松茸多糖高剂量组极显著促进衰老小鼠脾细胞增殖(p<0.01),增加衰老小鼠血清中TNF-α(p<0.01)、IL-6(p<0.01)含量。姬松茸多糖对D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型具有免疫增强作用。

反枝苋水提物对高脂饮食小鼠的降血脂作用

目的:研究反枝苋水提物调节高脂血症小鼠血脂的功效。方法:通过高脂肪饮食(high fatdiet,HFD)构建高脂血症小鼠模型,随机分为空白对照组(Con)、高脂模型组(Mod)、洛伐他汀组(Lovastatin,10 mg/kg/d)、反枝苋低剂量组(AR-L,430 mg/kg/d)、反枝苋高剂量组(AR-H,740 mg/kg/d)。空白组给予普通饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,同时按相应剂量灌胃给药。干预8周后,检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,肝脏HE染色观察组织病理学变化。结果:与空白组相比,模型组小鼠肝脏指数以及血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、MDA水平极显著升高(P<0.01),HDL-C、SOD水平极显著降低(P<0.01);与模型组比较,反枝苋高剂量组小鼠的肝脏指数以及血清中TC、TG、ALT水平极显著降低(P<0.01),SOD、HDL-C水平极显著升高(P<0.01),LDL-C、MDA、AST水平显著降低(P<0.05);与模型比较,反枝苋低剂量组小鼠的肝脏指数以及血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P<0.05),SOD、HDL-C水平极显著升高(P<0.01),ALT水平极显著降低(P<0.01),MDA、AST水平无显著性差异(P>0.05);HE染色结果显示,反枝苋水提物可明显减轻肝细胞内脂质沉积和肝脏脂肪变性程度。结论:反枝苋水提物能显著降低高脂血症模型小鼠的血脂水平,并能改善其肝功能。

Peptidase Activities of Tripeptidyl Peptidase Ⅰ (TPP Ⅰ): Exopeptidase and Endopeptidase

The defect of TPP Ⅰ causes a disease, late infantile neuronal ceroid lipofuscinosis（LINCL, CLN2）. To investigate the bio-activity of tripeptidyl peptidase Ⅰ （TPP Ⅰ ） from rat kidneys, the effects of digestion of angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ ） and a synthetic endo-type substrate（ Gly^1-Lys-Pro^5-lie-Pro^5-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys^10） via TPP I were ana- lyzed by HPLC and TOF-MS. The data suggest that the degradation rate of Ang I1 can reach 18. 2% by the rat TPP I and DRV（Asp-Arg-Val） can be released from N-termini of Ang Ⅱ within 16 h. In addition, the synthetic endotype substrate is cleaved at the same position between Phe6 and Phe^7. Accordingly, TPP Ⅰ shows two kinds of peptidase activities. One is a tripeptidyl peptidase activity and the other is a pepstatin insensitive carboxyl endopeptidase activity. Tripeptidyl peptidase activity and pepstatin insensitive carboxyl endopeptidase activity seem to be dual phases of one enzyme, TPP Ⅰ.

冬虫夏草与蛹虫草的表面增强拉曼光谱结合化学计量学鉴定研究

目的:利用表面增强拉曼光谱和化学计量学方法(surface enhanced laser Raman spectroscopy,SERS)对冬虫夏草(Cordyceps sinensis)和不同来源蛹虫草(Cordyceps militaris,柞蚕、大米培养蛹虫草和野生蛹虫草)进行定性研究,以建立一种可快速鉴定冬虫夏草和蛹虫草的方法。方法:设置激光拉曼光谱仪的光谱测量范围0~3200 cm^(-1),激光波长633 nm,总功率20 mW,物镜50倍,激发光源的强度为0.5%,扫描时间1 min,采集样品经表面增强技术处理前后的激光拉曼光谱,应用Origin 8.0软件对光谱进行降噪和归一化处理;进一步通过方差分析结合聚类分析和主成分分析,建立冬虫夏草与蛹虫草的品种判定方法。结果:4种样品的SERS有7个共有峰:150、228、812、934、1041、1395、2929 cm^(-1),其中冬虫夏草的150、228、812、934 cm^(-1)4个吸收峰强度显著弱于蛹虫草,而1041、2929 cm^(-1)2个吸收峰强度显著强于蛹虫草;3种蛹虫草在1625~2929cm;范围内均有较强的吸收峰,而冬虫夏草则没有。主成分分析和聚类分析结果表明,3种蛹虫草归为一类,冬虫夏草为一类。结论:本方法操作简便、快速准确、检测过程无损,所得图谱特征及区别明显,可用于冬虫夏草和蛹虫草的定性鉴定。