牦牛小脑不同区域神经营养素-4及其受体的表达特征与定位研究

神经营养素-4(NT-4)及其神经营养性酪氨酸激酶受体2(NTRK2)在小脑神经元存活、生长以及功能方面发挥着重要作用。为探讨NT-4和NTRK2在牦牛高原低氧适应中的作用,本研究以高原牦牛(Bos grunniens)和平原黄牛(Bos taurus)小脑为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹技术(WB)、苏木精-伊红染色(HE)和免疫组织化学(IHC)对NT-4和NTRK2在牦牛与黄牛小脑不同区域中的表达分布进行分析。qRT-PCR和WB结果表明,NT-4基因和蛋白在牦牛小脑半球皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);NTRK2基因和蛋白在牦牛小脑蚓部皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05)。与黄牛相比,牦牛NT-4蛋白在小脑各区域中的表达均显著高于黄牛(P<0.05);牦牛NTRK2蛋白在蚓部髓质和小脑半球髓质中的表达量低于黄牛或无差异,其余区域均显著高于黄牛(P<0.05)。IHC结果显示,NT-4和NTRK2蛋白阳性表达特征基本一致,皮质区主要分布于分子层的篮状细胞、浦肯野细胞层以及颗粒细胞层,而髓质区则散在分布于神经胶质细胞以及神经纤维中。由上述结果可知,NT-4和NTRK2在小脑各区域的表达差异可能与其参与脑组织生理功能以及适应高原低氧环境有关。在低氧环境下,NT-4和NTRK2通过上调激活相关通路以发挥内源性神经保护作用,进而保护脑组织免受低氧损伤。本研究结果可为探究牦牛脑组织低氧适应机制提供基础。

神经生长因子及其受体在高原牦牛与平原黄牛端脑中的比较分析

为探究神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶A(TrkA)在高原牦牛(Bos grunniens)与平原黄牛(Bos taurus)端脑组织中表达与分布的差异,本研究采集不同海拔地区的成年牦牛与黄牛端脑不同组织(n=5),利用免疫组织化学技术(IHC)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)以及蛋白免疫印迹技术(WB)对NGF和TrkA在牦牛与黄牛端脑各区中的定位特征及表达水平进行比较。IHC结果显示,两种因子在牦牛与黄牛端脑各区中的分布与定位特征基本一致,主要在神经元胞质、神经胶质细胞及血管内壁中表达,其蛋白免疫阳性反应强度整体表现为牦牛高于黄牛。qRT-PCR结果显示,牦牛的NGF基因表达量在额叶皮质、大脑白质及枕叶皮质中低于黄牛或无差异,在其余区域中显著高于黄牛(P<0.05);TrkA基因表达量仅在大脑白质中与黄牛无显著差异,其余区域中显著高于黄牛(P<0.05)。WB结果显示,牦牛的NGF蛋白表达量仅在大脑白质中低于黄牛,其余区域均显著高于黄牛(P<0.05);牦牛的TrkA蛋白表达量在额叶皮质、大脑白质及枕叶皮质中低于黄牛或无差异,其余区域中显著高于黄牛(P<0.05)。综上,两种因子在牦牛端脑部分组织表达上调可能与低氧刺激有关,推测二者在低氧条件下协同发挥内源性神经保护作用,以维持动物机体正常的生理活动。本研究结果为进一步探究NGF和TrkA在牦牛低氧适应性方面发挥作用提供了理论依据。

金鱼体内吡虫啉及其代谢产物的检测方法

本研究采用高效液相色谱-质谱联用法建立了金鱼体内吡虫啉及其代谢产物的测定方法。选用Eclipse C18柱,甲醇-0.1%甲酸作为流动相进行梯度洗脱,离子源为ESI源,选择离子扫描模式(SIM)进行检测,利用外标法进行分析和定量。经质谱数据分析,吡虫啉在金鱼体内的代谢产物主要有吡虫啉脲、烯式吡虫啉、5-羟基吡虫啉和6-氯烟酸。上述方法中吡虫啉、吡虫啉脲、烯式吡虫啉、5-羟基吡虫啉、6-氯烟酸质量浓度与峰面积间的线性相关系数均大于0.99,相对标准偏差分别为3.41%、1.98%、3.79%、2.84%和2.64%。提取方法进行优化后,选用了乙酸乙酯∶水(2∶1,V/V)对金鱼组织进行提取,上述5种物质的平均添加回收率分别为96.08%、99.77%、85.25%、87.24%和100.23%。该方法的精密度和准确度都较高,线性相关性好,可用于金鱼体内吡虫啉及其代谢产物的定量分析。

化瘀滞行气血理论指导下治疗膝骨关节炎

膝骨关节炎的病机虚实夹杂,本虚标实,以“瘀”为标,以“虚”为本,因“瘀”所致的疼痛不适严重影响着患者生活质量,故提出先“化瘀滞”后“行气血”的思路治疗膝骨关节炎,运用刃针灭活肌筋膜触发点、平衡针及动气针法相结合,多法合用以标本同治,从而更快改善患者症状。此法操作简便,治疗时间短,效果显著,不良反应少,其思路值得进一步探讨。

CBCL教学法在呼吸内科实习中的应用

目的探讨案例式协作教学法(case-based collaborative learning,CBCL)在呼吸内科实习中的作用。方法 64名昆明医科大学本科实习生纳入了本研究。根据不同的教学方法分为两组:实验组(CBCL组,n=32)、对照组(PBL组,n=32)。实验组进行4周的CBCL教学,对照组进行4周的PBL教学。教学后进行考核,获得两组学生基础知识、病例分析知识以及新进展知识的得分;应用问卷调查,获得两组学生自我评价(提高医患沟通能力、激发学习兴趣、提高诊断能力、提高治疗方案制定能力)得分以及学生对两种教学法的满意度得分。比较两组同学对得分差异。结果考核结果比较显示,实验组考核总分高于对照组[(69.31±9.15)分vs.(61.66±7.63)分,P=0.001];考核分项比较显示,在基础知识、病例分析知识、新进展知识得分方面,实验组均高于对照组;问卷得分比较显示,实验组的自我评价总分高于对照组[(16.47±2.02)分vs.(13.50±2.54)分,P <0.001];自我评价的分项比较结果显示,激发学习兴趣、提高医患沟通能力、提高诊断能力以及提高治疗方案制定能力的得分,实验组均高于对照组;对两种教学方法的满意度调查结果显示,实验组的满意度得分明显高于对照组。结论 CBCL教学法更有利于提高呼吸内科实习教学效果。

脑红蛋白和缺氧诱导因子-1α在牦牛后脑的表达与定位研究

脑红蛋白(neuroglobin,NGB)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是存在于脊椎动物神经系统中的两种关键性神经保护因子,在低氧适应过程中具有重要的生理功能。为探究牦牛(Bos grunniens)脑组织中对机体运动、呼吸、感觉等生理活动起重要调节作用的后脑在适应低氧过程中NGB和HIF-1α的表达与分布关系,本研究利用RT-qPCR、Western blot及免疫组织化学技术,对NGB和HIF-1α在牦牛后脑不同区域的表达与定位特征进行了研究。RT-qPCR和Western blot结果显示,牦牛后脑中,NGB和HIF-1α基因与蛋白表达趋势基本一致,在小脑蚓前叶中的表达量最高,并显著高于延髓、脑桥及小脑其他部位(P<0.05),小脑半球皮质次之(P<0.05),蚓小叶表达量最低,其他不同区域间两种因子的表达量也存在一定差异。免疫组化结果显示,NGB和HIF-1α阳性产物分布特征相似,且HIF-1α蛋白免疫阳性反应的整体强度高于NGB蛋白。各区域NGB和HIF-1α主要散在表达于特定层次的神经元胞质中,如延髓、脑桥神经元,小脑半球、蚓部皮质分子层、浦肯野细胞层及颗粒层神经元等。小脑半球髓质区的神经胶质细胞内也见有少量NGB和HIF-1α阳性表达,阴性对照均无表达。上述结果提示,牦牛后脑不同区域NGB和HIF-1α的表达在长期适应低氧环境过程中存在一定的选择性差异,蚓前叶对缺氧具有较高的耐受性,小脑半球皮质次之,蚓小叶的缺氧耐受性最弱,这种差异的产生可能与后脑相关区域承担的特定功能有关联,但其具体机制尚有待进一步探讨。各区域低氧适应性功能的发挥主要依赖其特定的神经元结构。

低温处理对牡丹花瓣细胞核形态及生理指标的影响

为解析不同温度下牡丹凤丹粉切花衰老的细胞学机制及生理原因,以凤丹粉切花为材料,研究(25±1)℃(室温对照)、2℃、4℃和8℃处理对牡丹凤丹粉切花瓶插寿命的影响;采用DAPI染色观察分析花瓣细胞核形态变化规律并分析瓶插过程中保护酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)]活性、丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量以及超氧阴离子(O_(2)·^(-))产生速率的变化。结果表明,与对照[室温(25±1)℃]相比,4、2℃处理切花瓶插寿命最长,达17 d,低温处理下切花瓶插寿命依次为4℃=2℃>8℃。低温处理不同程度影响切花细胞核正常率,细胞核正常率基本为4℃>2℃>8℃,细胞核正常率可作为衡量切花健康程度的指标。花瓣SOD、CAT、POD活性保持较高水平,花瓣能有效清除过多的活性氧、自由基,代谢基本保持平衡,是4℃下切花寿命较长的生理原因。

双峰驼NGB基因克隆及序列分析

对双峰驼NGB基因进行克隆和序列分析,同时探讨双峰驼NGB的生理功能。在血样中提取双峰驼全基因组,采用分段TA克隆法获得NGB基因,运用多种软件对其基因序列及编码产物的结构、功能进行生物信息学分析。结果表明:双峰驼NGB基因序列全长5 210 bp,存在4个外显子(长度为89 bp、112 bp、120 bp、135 bp)、3个内含子(长度为1 505 bp、618 bp、1 437 bp)以及1个长度为257 bp的CpG岛。对双峰驼NGB肽链分析结果显示,包含所有基本氨基酸,各氨基酸数目相差较大,其中亮氨酸(L)占整个氨基酸组成的13.91%,天冬酰胺(N)占1.32%。双峰驼NGB相对分子质量为17 076.62,pI值5.39,半衰期30 h,不稳定系数56.50;蛋白整体呈现亲水性(-0.108),是可溶性蛋白。双峰驼NGB蛋白二级结构预测结果显示,α-螺旋所占比例76.16%,β-折叠所占比例0%,属于全α类蛋白质。双峰驼NGB在细胞骨架中占33.3%,在细胞质中占33.3%,在细胞核中占22.2%,在过氧化物酶体中占11.1%。双峰驼NGB与人亲缘关系最近(98.01%),与其他哺乳动物亲缘关系也较高(97.35%~94.03%),与斑马鱼亲缘关系较低(55.62%),说明NGB在哺乳动物长期进化过程中趋于保守。双峰驼NGB基因的成功克隆及序列分析,为进一步探究双峰驼应对极端环境过程中NGB基因可能发挥的生理功能提供理论基础。

嗜硫小红卵菌与噻虫嗪组合对番茄病毒病的预防和防控效果

2019—2020年连续两年在内蒙古自治区赤峰市进行了番茄病毒病的预防和防控试验。采用嗜硫小红卵菌HNI-1菌剂喷雾和噻虫嗪蘸(灌)根的方法,从控制病毒病介体昆虫烟粉虱和增强植物抗病性的角度来提高番茄病毒病的防控效果。两年的预防试验结果表明,使用HNI-1菌剂喷雾和噻虫嗪蘸根后,番茄病毒病的病情指数均控制在1.6以下,番茄上烟粉虱的数量维持在6头·株^(-1)以下;防控试验结果表明,使用HNI-1菌剂喷雾和噻虫嗪灌根,与对照相比,用药15 d后番茄病毒病发病症状明显减轻,病情指数显著降低,为5.94~7.48,番茄上烟粉虱的数量降低为64.3~84.3头·株^(-1),表明该防控技术可有效预防和防控番茄病毒病。

基于表面等离子体共振(SPR)技术实时分析RGD基序与整联蛋白的相互作用

旨在研究口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)结构蛋白VP1上的RGD(Arg-Gly-Asp)基序与宿主细胞表面受体整联蛋白的结合特异性,作者应用基于表面等离子共振技术(SPR)的Biacore 3000系统实时研究RGD基序分别与猪源整联蛋白α_vβ_6胞外区结构域、α_v亚基胞外区结构域和β_6亚基胞外区结构域的亲和力。首先通过结合试验筛选与RGD基序有结合的整联蛋白结构域,再对有结合的整联蛋白与RGD基序开展动力学分析。结果显示,合成的RGD基序与猪源整联蛋白α_vβ_6胞外区结构域有结合,结合动力学常数K_a、K_d、K_D分别为42.3 M~(-1)s~(-1)、3.1×10~(-4)s~(-1)和7.33×10~(-6)M;与整联蛋白α_v亚基胞外区结构域之间亦有结合,结合动力学常数K_a、K_d、K_D分别为21.8 M~(-1)s~(-1)、2.13×10~(-4)s~(-1)和9.79×10~(-5)M;与β_6亚基胞外区结构域几乎没有结合。综上表明,RGD与整联蛋白α_vβ_6胞外区结构域的结合比与整联蛋白α_v亚基胞外区结构域之间的结合快且亲和力强。本研究将为进一步探讨FMDV与宿主细胞表面受体的相互作用提供参考。

猪源组织蛋白酶S抑制O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞因子的影响。FMDV-O感染PK-15细胞,利用RT-qPCR和Western blot分别在转录和翻译水平探究FMDV-O感染对内源性CTSS表达的影响;使用CTSS活性检测试剂盒测定FMDV-O感染对CTSS酶活性的影响;根据GenBank公布的 CTSS 基因序列(XM_021089893.1)构建CTSS真核表达质粒,利用脂质体方法转染PK-15细胞,通过Western blot检测CTSS表达情况,并在此基础上通过Western blot和RT-qPCR检测过表达CTSS对FMDV-O复制及FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子mRNA水平的影响;进一步针对CTSS设计合成3对特异性siRNA,利用Western blot和RT-qPCR检测CTSS和FMDV-O的变化。结果表明,FMDV-O感染PK-15细胞能显著上调猪源CTSS表达并增强CTSS酶活性;过表达CTSS能抑制FMDV-O在 PK-15 细胞中复制,这种抑制作用可能是通过促进FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子产生而发挥功能的;干扰序列siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进FMDV-O的复制。猪源CTSS促进宿主抗病毒细胞因子产生可能是抑制FMDV-O复制的原因之一,本研究为深入探究宿主CTSS在抗FMDV天然免疫应答中的作用及机制提供依据。

慢性阻塞性肺疾病动物模型研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)已成为人类健康第三大杀手,迫切需要深入研究揭示其病理分子机制及防治药物。一般COPD分为稳定期及急性加重期COPD(AECOPD),目前在该领域尚未有统一的COPD、AECOPD动物模型造模方法。通过查阅近年来各类与COPD、AECOPD动物模型相关的文献,从单因素诱导方法和复合因素诱导方法两个方面综述几种比较常用的COPD、AECOPD动物模型造模方法,并简述其造模机制、方法及一些优缺点,为COPD动物模型建立和完善提供参考。

电子商务背景下生鲜农产品物流配送模式研究

随着网络移动设备的普及及人们生活水平日益提高,电子商务开始出现,并逐步发展为推动社会经济发展的重要因素之一。电子商务也带动了生鲜农产品行业的发展,物流行业中的物流配送则成为生鲜农产品电子商务发展的关键因素,二者相互依赖,相辅相成。文章从物流配送环节进行分析,研究生鲜农产品物流配送的发展现状及存在的问题,针对这些问题结合现阶段的相关物流配送模式,提出相应的优化对策,使生鲜农产品的物流配送以优质、高效的服务,为电商和消费者带来最好的体验。

基于村庄类型的全域土地综合整治研究

研究目的:从功能视角揭示村庄类型的复杂性与多元性,形成“目标导向—问题导向—效果导向”下村庄分类与全域土地综合整治内在逻辑建构框架,提出基于村庄类型的差异化全域土地综合整治实践路径,为开展全域土地综合整治和全面推进乡村振兴提供理论与实践参考。研究方法:文献法、归纳演绎法、空间叠加分析法、案例法。研究结果:(1)中国乡村可分为集聚提升类、城郊融合类、特色保护类、搬迁撤并类、生态保护类5种类型,不同类型村庄的全域土地综合整治内在逻辑有很大差异,需要坚持目标导向、问题导向与效果导向相结合,考虑村庄的自然本底供给条件和社会经济发展需求,开展差异化的全域土地综合整治;(2)分析整治潜力与整治需求空间匹配,生成基于村庄类型的差异化全域土地综合整治实践路径,包括土地整治+融合发展、土地整治+现代农业、土地整治+乡村旅游等。研究结论:不同类型乡村实施差异化的全域土地综合整治实践有利于优化国土空间开发保护格局,促进农业农村高质量发展。

刺儿菜对三种堇菜属植物的化感作用

为探讨刺儿菜对三色堇生长的化感作用,以刺儿菜不同器官浓度水浸提液对角堇(JP)、三色堇(08 H)、大花三色堇(EYO)的种子和幼苗进行化感试验。结果表明,不同器官水浸提液对三种堇菜属植物的化感作用效应不同;不同器官浓度浸提液对种子萌发化感作用有JP>EYO>08 H的趋势;叶、根浸提液对JP胚轴、胚根呈现低促高抑的浓度效应,茎浸提液呈现促进作用;叶、茎浸提液对08 H胚轴均有促进作用,对胚根则是低促高抑作用,根浸提液对胚轴、胚根均有低促高抑的浓度效应;叶浸提液对EYO胚轴有促进作用,对胚根作用规律不明显,茎浸提液对胚轴、胚根均有促进作用,而根浸提液则呈现明显的低促高抑作用。

角堇与大花三色堇染色体核型分析

以2份角堇与4份大花三色堇自交系为试验材料,采用染色体常规压片方法,观察和分析了它们的细胞染色体数目、相对长度、平均臂比等核型指标,以明确两种植物细胞学特点,为分类以及育种提供理论依据。结果表明:(1)2份角堇自交系染色体数目均为2n=2x=26,染色体基数为x=13,染色体核型公式分别为2n=2x=26=8m+12sm+6st、2n=2x=26=4m+16sm+6st,核型不对称系数为67.20%~70.10%,核型分类均属于3B。(2)4份大花三色堇自交系均为四倍体,其中2份(EYO-1-2-1-4、DSRFY-1-1-2)染色体数目为44,核型公式为2n=4x=44=4m+16sm+6st、2n=4x=44=16m+24sm+4st;2份(G10-1-3-1-4、XXL-YB-1-1-1-1)染色体数目为48,核型公式分别为2n=4x=48=8m+20sm+20st、2n=4x=48=4m+36sm+8st,核型不对称系数为66.74%~71.77%,核型分类属于2B、3B。

不同耐热三色堇材料HSP70基因克隆及热胁迫下的表达分析

以三色堇耐热材料DFM-16和热敏材料08H为试材,采用PCR技术扩增到VtHSP 70基因的cDNA和gDNA序列,通过real-time PCR技术分析了该基因在热胁迫下的表达。结果表明,2种材料中的VtHSP 70 cDNA序列长度和开放阅读框长度相同,编码649个氨基酸,氨基酸序列相似性为98.61%。2个材料中的VtHSP 70 gDNA结构相似,均包含1个内含子。同源比对和系统进化树表明,VtHSP 70基因与拟南芥和水稻中胞质HSP 70基因同源性较高。42℃热激处理0、1、2、6、12 h后,2种材料中VtHSP 70基因表达量都明显上升,但耐热材料DFM-16的升高幅度显著高于热敏材料08H。

试论园艺专业大学生的能力培养

当今知识经济时代,大学生能力培养已成为全社会广泛关注的热点之一。园艺专业是实践性很强的农科类专业之一,如何加强园艺专业大学生能力培养,使产业对人才的需求与大学人才培养紧密衔接起来,是摆在园艺专业大学教育者面前的重要课题。从能力要素出发,根据园艺专业大学生的能力结构,建议从自主学习与信息处理能力培养、创新能力培养、处理人际关系能力培养、就业与创业能力培养和专业实践能力培养等方面加强园艺专业大学生的能力培养。

氯虫苯甲酰胺衍生物的合成及杀虫活性

为了开发新的杀虫化合物,以氯虫苯甲酰胺为先导,通过引入氨基酸片段合成了12个新化合物,通过^(1)H NMR,^(13)C NMR和HRMS等手段进行结构表征。室内杀虫活性初步测试结果表明:在500 mg/L测试质量浓度下,多数目标化合物对黏虫(Oriental armyworm)有着较高的杀虫活性,其中化合物b在20,4 mg/L质量浓度下对黏虫分别有90%和80%的杀虫活性,化合物f在20,4 mg/L质量浓度下对黏虫分别有80%和70%的杀虫活性。

急倾斜薄煤层采煤机关键技术研究与应用

针对急倾斜薄煤层综合机械化开采难度大,存在牵引力不够、截割功率小、设备防滑与防倒难、工作面飞煤矸易伤人及损坏设备、采场空间对设备性能要求高等问题。设计了一款安全、可靠、高质量的急倾斜薄煤层采煤机,解决了功率小、几何尺寸大、防滑性能不足、润滑系统不够完善等一系列急倾斜薄煤层采煤机在实践中所存在的问题,并在重庆松藻煤电公司逢春煤矿S2611工作面取得了工业性试验的成功。