华蟾素对HepG_(2)/ADM细胞耐药的抑制作用及其机制研究

目的观察华蟾素对人肝癌细胞HepG_(2)/阿霉素(ADM)耐药性的影响并分析其可能的作用机制。方法用不同浓度的华蟾素处理HepG_(2)和HepG_(2)/ADM细胞24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC 50);倒置显微镜观察细胞形态学变化;药物蓄积实验检测对细胞内药物累积的影响;Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3表达情况。结果华蟾素能对HepG_(2)和HepG_(2)/ADM细胞具有增殖抑制作用,耐药倍数为4.67;随华蟾素处理浓度升高,HepG_(2)/ADM细胞体积变小,细胞皱缩突起减少,细胞间连接减少;与耐药组比较,华蟾素可提高HepG_(2)/ADM细胞对阿霉素的蓄积水平,上调Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达(P<0.05),下调Bcl-2蛋白表达(P<0.01),促进细胞凋亡。结论华蟾素能够显著抑制HepG_(2)/ADM细胞增殖,增加ADM在细胞内的蓄积,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax蛋白表达,诱导细胞凋亡有关。

独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞PANC-1,取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞,随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组,独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预,Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;干预48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果与Control组比较,独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高,而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低(P均<0.05)。随着浓度增加和培养时间延长,独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降,呈现浓度和时间依赖性(P均<0.05)。独角莲醇提物500μg/mL组无论是培养24 h还是培养48 h细胞活力均显著升高,在后续研究中剔除。此外,由于培养48 h独角莲醇提物各浓度组细胞活力降低更显著,故选择培养48 h进行后续研究。与Control组比较,独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组划痕愈合率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax表达上调,EMT相关蛋白E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(P均<0.05)。结论一定浓度的独角莲醇提物不仅能抑制人胰腺癌细胞增殖和迁移并促进其凋亡,还能抑制其EMT。

直链鳞翅目信息素的特点及欧盟登记管理政策概况

信息素农药中,鳞翅目昆虫性信息素种类最多,研究最为详细。其中,直链鳞翅目信息素类别包含了大部分常见的、已知的信息素,并且国内外登记的信息素农药产品大多数活性成分均属于直链鳞翅目信息素。直链鳞翅目信息素具有低毒性、低暴露的特性,很多国家和国际组织大大减少对于直链鳞翅目信息素的登记数据需求。欧盟作为有着较丰富信息素农药管理经验的国际组织,对直链鳞翅目信息素的登记和监管制定了完善的法规和细则。本文整理并概述了直链鳞翅目信息素特点、欧盟对该类信息素的批准登记活性成分以及相关管理政策,同时整理了我国信息素农药的登记情况及要求,旨在为直链鳞翅目信息素的进一步研究应用和登记管理提供参考。

府谷县水资源开发现状与用水潜力分析

府谷县能源化工的快速发展,对县域水资源的需求和影响较大。基于府谷县社会经济发展概况,以2021年水资源开发利用数据为研究对象,在分析用水现状和用水结构的基础上,对府谷县水资源开发中存在的问题和利用潜力进行了探讨,提出2021年府谷县地表水资源开发利用程度为16.2%,地下水开采率44.5%,用水潜力空间仍较大,为区域社会经济发展与水资源的优化配置研究提供了借鉴。

上皮-间质转化在胰腺纤维化中的作用及大柴胡汤的干预机制

目的探索上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)与慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)胰腺纤维化的关系及大柴胡汤防治CP的机制。方法健康昆明小鼠78只,随机分为:空白组(n=18)、CP组(n=30)及大柴胡汤组(n=30)。CP组和大柴胡汤组腹腔注射20%左旋精氨酸(L-arginine,3 g/kg,每周1次),空白组腹腔注射等体积的生理盐水。大柴胡汤组在注射L-arginine 1周后,同时给予注射L-arginine和大柴胡汤灌胃治疗5周(14 g/kg,每日一次)。从给药开始计时,各组分别于第2,4,6周麻醉处死小鼠,摘取小鼠胰腺组织,通过HE染色观察胰腺组织的病理改变,免疫组化观察胰腺组织中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的表达变化,Western blotting检测胰腺组织中E-cadherin、N-cadherin蛋白含量的改变。结果与空白组相比,CP组小鼠胰腺组织中胶原纤维沉积随着造模时间延长不断增加,α-SMA表达逐渐增多,E-cadherin表达逐渐减少,在第4,6周时最为显著(P<0.01),而N-cadherin表达逐渐增多,在第6周最为显著(P<0.01)。与CP组相比,大柴胡汤组第4,6周仅见部分腺泡萎缩及少量炎细胞浸润,胶原纤维沉积明显减轻,α-SMA表达显著减少,E-cadherin在第6周显著升高(P<0.01),而N-cadherin在第6周显著下降(P<0.01)。结论在20%L-arginine刺激作用下,小鼠胰腺实质细胞转化为间质细胞,表明EMT参与CP胰腺纤维化的进展。大柴胡汤可通过抑制EMT转化,减轻胰腺纤维化,对CP有明显治疗作用。

非酒精性脂肪性肝病的中医治疗研究进展

目的基于中医整体观念对非酒精性脂肪性肝病的中医治疗研究进行总结,为该病的临床用药提供理论依据与治疗方向。方法查阅近期相关文献,针对病因病机、辨证分型和治疗进行综述。结果根据非酒精性脂肪性肝病的病因病机及不同的临床表现,总结了单味中药泽泻、丹参、山楂、绞股蓝、大黄和黑果枸杞等,复方药物柴胡疏肝散、加味苓桂术甘汤和温胆汤加减(半夏、茯苓、丹参、生山楂、竹茹、枳壳、莱菔子、陈皮、甘草、夏枯草、生牡蛎和山慈菇)以及其他的辅助治疗方法。结论尽管非酒精性脂肪性肝病的发病机制复杂,且治疗存在巨大挑战,但本研究分别从药物和辅助治疗进行论述,为该病的治疗提供新思路。

干扰素调节因子3基因敲除对伪狂犬病病毒增殖的影响

试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7酶切鉴定后通过有限稀释法获得PK15-IRF3^(-/-)单克隆稳定细胞系。为验证敲除IRF3基因稳定细胞系是否构建成功,采用实时荧光定量PCR、Western blotting方法检测PRV相关基因及蛋白的表达,应用荧光显微镜和流式细胞术观察病毒复制情况并进行病毒滴度检测。结果显示,PK15-IRF3^(-/-)细胞系感染PRV-GFP后PK15-IRF3^(-/-)细胞荧光强度明显强于PK15细胞。感染PRV野毒(PRV-QXX)后PK15-IRF3^(-/-)病毒滴度明显强于PK15细胞,PRV的gE蛋白水平明显高于PK15细胞。在mRNA水平检测两种细胞中PRV TK基因的变化也得到相同的结果。进一步研究表明,在感染PRV-QXX后,PK15细胞中IFN-βmRNA会随着时间增加显著增高(P<0.05),但PK15-IRF3^(-/-)细胞中IFN-βmRNA则无明显变化。上述结果表明,敲除IRF3基因后显著促进PRV的增殖,IRF3在病毒的复制中发挥着重要作用,为伪狂犬病的防控提供了新的方法和策略。

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。

茯砖茶对APOE^(-/-)小鼠肝脂合成和氧化应激影响

观察茯砖茶对非酒精性脂肪肝治疗效果及对肝脂合成和氧化应激的影响。选取2月龄雄性APOE^(-/-)小鼠55只,连续高脂饲料喂养13周后随机抽取5只进行HE染色判断成模率。造模成功后随机分为模型组,阿托伐他汀组,茯砖茶高、中、低剂量组,持续高脂饲料喂养并灌胃干预8周。同时选2月龄C57小鼠作为空白对照组,普通饲料喂养13周后予以生理盐水连续灌胃8周。实验末取小鼠肝脏组织用于肝功能、氧化应激、HE染色及RT-qPCR。病理学显示茯砖茶高、中剂量组小鼠肝脂轻于模型组。与空白对照组比较,模型组肝组织GSH-PX、SOD活力较低;MDA质量摩尔浓度,ALT活力,AST活力,NAS积分,SCD-1、PPAR-γ、HMGCR基因表达较高(P<0.05)。与模型组比较,茯砖茶不同剂量组肝组织MDA质量摩尔浓度,ALT、AST活力,NAS积分,SCD-1、PPAR-γ、HMGCR基因表达较低;GSH-PX、SOD活力较高。茯砖茶通过抑制肝脂合成和减少肝脏氧化应激损伤而达到逆转早期非酒精性脂肪肝的效果。

国际农药残留一律限量研究及对我国一律限量制定的建议

农药最大残留限量标准制定对保障人民身体健康、农产品质量安全,促进食品和农产品公平贸易意义重大,各个国家及组织均对其非常重视。发达国家制定的限量标准体系中,农药的限量并不都是利用本国残留试验数据制定的,也包含进口限量和一律限量,其中一律限量成为发达国家保证本国消费者安全的一种手段,也成为农药残留限量标准体系的有益补充。与发达国家的限量标准相比,我国限量标准数量明显偏少,为加快完善我国农药残留标准体系,我国可借鉴欧盟、日本等的做法,对于在其他国家已登记使用而我国没有登记使用的农药进行分类,根据残留检测方法的定量限,制定一律限量标准。

施氏魮(Barbonymus schwanenfeldii)外周血液及造血器官血细胞发生的观察

为了解施氏魮血细胞组成类型及血细胞发生过程,利用Wright’s-Giemsa和HE染色技术,分别对其外周血涂片,血细胞发生相关器官头肾、体肾、脾脏和肝脏的组织印片及石蜡切片进行观察,并统计了各种血细胞大小,以及上述器官中血细胞各种发育类型的组成比例.观察发现,施氏魮的血细胞包括红细胞和白细胞,白细胞主要有血栓细胞、粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等.血细胞发育历程可分为原始阶段、幼稚阶段和成熟阶段,幼稚阶段的红细胞和粒细胞又可划分为早、中、晚不同时期.施氏魮血细胞随着发育的不断成熟,核内染色质不断凝聚,胞体体积整体呈现由大变小趋势.在各脏器印片中,头肾和体肾可观察到各种类型原始及幼稚阶段血细胞,其中原红细胞在头肾中数量最多;脾脏中观察到大量幼稚阶段淋巴细胞和粒细胞,肝脏中主要为成熟红细胞,因此可见头肾和体肾为施氏魮主要的造血器官,脾为淋巴细胞和粒细胞增殖重要场所.此研究描述了施氏魮血细胞分化特征,对系统了解其免疫应答机制及进一步开展鱼类疾病防控具有重要意义.

内质网应激对大鼠肝星状细胞HSC-T6活化的影响

目的探索内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)作用对肝星状细胞活化的影响及可能机制。方法利用衣霉素(tunicamycin,Tun)对正常培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6进行处理,处理浓度分别为0(空白对照组),0.1,0.5,1.0,2.0,4.0μg/ml。处理24 h,收集细胞,提取RNA和蛋白质,分别利用real-time PCR和Western blot检测内质网应激相关基因分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT增强子结合同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding homologous protein,CHOP),肝纤维化相关基因α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1A1),及TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1、Smad4在RNA转录或蛋白表达水平的变化。结果real-time PCR检测结果表明,与空白对照组相比,Tun处理能够显著上调内质网应激相关基因Grp78、CHOP的转录水平(P<0.01);肝纤维化相关基因α-SMA、TIMP1的转录水平在Tun浓度为2.0μg/ml最高,但Col1A1的转录水平在Tun处理后有所下降(P<0.01或P<0.05);TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1在Tun浓度为2.0μg/ml和4.0μg/ml显著上升(P<0.01或P<0.05)。Western blot检测表明,Tun处理后,与空白对照相比内质网应激相关基因Grp78、CHOP的蛋白水平显著升高(P<0.01或P<0.05);α-SMA的蛋白水平在Tun浓度为1.0μg/ml和2.0μg/ml时明显上调(P<0.01或P<0.05);TGF-β1/Smad通路相关基因Smad4在Tun处理后亦明显上调(P<0.01或P<0.05)。结论内质网应激可促进肝星状细胞的活化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路相关。

基于生物信息学探讨胰腺导管癌患者基因表达谱的变化

目的分析胰腺癌患者癌组织和癌旁组织的差异表达基因特征及其关键调控蛋白,为胰腺癌的预防及治疗提供理论依据。方法从Pubmed基因芯片数据库(GEO Database)中下载胰腺癌患者基因芯片数据,并将数据导入GCBI、networkAnalyst及Genclip等分析软件,分析癌组织和癌旁组织的基因表达谱、基因功能、蛋白质相互作用网络等,筛选两组之间的关键节点基因。结果癌组织和癌旁组织的基因表达谱有明显差异;在分析的28869个基因中,癌组织和癌旁组织之间有4447(15.40%)个差异表达基因;前250个差异表达基因蛋白相互作用网络分析发现5个关键蛋白(SMURF1、MET、BCL2L1、RALA和ERBB4),主要与蛋白结合及细胞外区域信号通路密切相关。结论癌组织和癌旁组织的基因表达谱有明显不同,提示基因转录谱在肿瘤的发生中发挥着调节作用;SMURF1及MET基因对胰腺癌的发生均有一定的预测能力,并可能受到蛋白结合和细胞外区域信号通路的调节而发挥生物学作用。

An Exploration of Teaching Class of Mixed Ability

There has been a long time of debate between the two teaching approaches of homogenous grouping and heterogeneous grouping.Here in the essay,we explored both of the two teaching approaches in Yunnan Province of China whereas the puzzle lies in the question of which method can achieve a relatively-better result in English classes of Yunnan.Some possible solutions are promoted based on the data and analysis collected from a survey.

一节小学英语实习课师生互动的分析

课堂上师生的互动是课堂教学的灵魂。有了师生的互动,才有思维的碰撞和语言的锻炼。文章以某小学一名实习教师的一节英语课为例,从自问自答、小组活动、话轮把控、问题反馈几个方面分析了课堂中的互动问题,并提出相关建议,以期对实习教师提升教学能力有所帮助。

中国、美国及AOAC微生物分析方法确认准则比较

本文比较了中国国家质量监督检验检疫总局(AQSIQ)、美国环保局(EPA)和AOAC发布的三个微生物分析方法确认准则,供相关管理部门及行业在微生物农药管理及分析方法开发、确认及验证过程中提供参考。

基于网络药理学的柴芩承气汤调控TLR4/NF-κB通路防治重症急性胰腺炎机制研究

目的基于网络药理学的方法预测柴芩承气汤(Chai Qin Chengqi decoction,CQCQD)治疗重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)的有效成分、潜在靶点及通路,结合动物实验探讨其治疗SAP的作用机制。方法利用中药系统药理数据库(TCMSP)筛选出柴芩承气汤复方中化合物的有效成分群,针对SAP发病机制,通过Pharm Mapper服务器进行靶点的预测分析。将得到的潜在靶点导入MAS 3.0数据库进行靶点注释与分析,最后结合KEGG数据库进行通路分析,采用Cytoscape软件构建柴芩承气汤治疗SAP的'化合物-靶点-通路'网络模型。筛选出与SAP相关性高的'药物-靶点-通路',继而采用L-精氨酸(L-Arg)诱导复制SAP小鼠模型,并给予柴芩承气汤灌胃,验证柴芩承气汤对SAP小鼠的治疗作用及其对高相关性靶点通路的调控作用。结果共预测得到柴芩承气汤潜在靶点558个和42条信号通路,其中有12个靶点和28条信号通路与SAP相关,包括在SAP中对炎症因子具有调控作用的Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路。动物实验验证结果表明,柴芩承气汤可通过对TLR4及其下游重要介质NF-κB的调节达到对SAP的治疗作用。结论柴芩承气汤通过'多成分、多靶点、多通路'协同发挥抗SAP的作用,其中TLR4/NF-κB是其作用的主要靶点之一。

粉防己碱通过调控SOCE通路对L-精氨酸诱发的小鼠重症急性胰腺炎的防治作用

目的观察粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对L-精氨酸(L-arginine)诱发的重症急性胰腺炎(SAP)小鼠胰腺组织钙库操纵的Ca2+通道(SOCE)的关键效应蛋白基质相互作用分子1(STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)表达的影响,探讨粉防己碱防治重症急性胰腺炎的作用机制。方法将健康昆明小鼠40只随机分为4组:对照组、重症急性胰腺炎模型组、粉防己碱高剂量组及粉防己碱低剂量组,每组10只。除对照组外,其余小鼠均给予腹腔注射20%L-精氨酸复制重症急性胰腺炎模型(3.5 g·kg^(-1),共2次,间隔1 h),在模型复制4 h后粉防己碱治疗组给予腹腔注射粉防己碱高、低剂量治疗(120、60 mg·kg^(-1),每日2次,共3 d)。于模型复制72 h后麻醉动物,收集血清,检测血清淀粉酶水平;完整摘取小鼠胰腺及肺组织,胰腺称质量并计算胰腺脏体比;HE染色观察各组小鼠胰腺及肺组织形态学改变;免疫组化法观察胰腺组织STIM1及ORAI1的阳染表达;Western Blot法检测胰腺组织STIM1及ORAI1蛋白的表达;RT-qPCR法检测胰腺组织STIM1及ORAI1 mRNA的表达。结果与对照组比较,重症急性胰腺炎模型组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比均明显增加(P<0.01);胰腺组织出现明显水肿,腺泡细胞大面积坏死伴胰腺间质出血及大量炎症细胞浸润,肺组织可见肺泡间隔明显水肿、增宽,并伴大量炎症细胞浸润及充血;胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显增高(P<0.01)。与重症急性胰腺炎模型组比较,粉防己碱高、低剂量组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比明显降低,胰腺及肺组织损伤程度减轻,胰腺组织水肿、出血及坏死程度明显减轻,炎性细胞浸润减少,胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。结论重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织SOCE信号通路活化,参与重症急性胰腺炎的病程进展;粉防己碱可通过抑制SOCE信号通路活化,进而减轻重症急性胰腺炎胰腺损伤程度。

“4+7”带量采购在某院的实施现状

目的充分了解药品带量采购在医疗机构的实施现状,望发现问题,为后续工作提供参考及借鉴。方法根据某院"4+7"带量采购政策执行1年期间中选药品的采购数据和销售数据,利用EXCEL对数据统计绘图。结果与规定采购量相比,"4+7"中选药品实际采购完成百分比为100.00%~25171.43%。大部分中选药每月采购量、销售量都趋向平衡,个别中选药的某些月份采购或销售数据波动稍大。结论某院第一轮带量采购工作圆满完成。个别中选药采购或销售数据存在波动,这可能与药品本身性质、医院政策、就诊人次等社会环境相关。医疗机构在执行带量采购政策时,应予以注意,适时调整、保证采购量的完成。