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中试制备临床级别第三代慢病毒 被引量:4
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作者 段德明 季永飘 +1 位作者 周梦洁 高基民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1307-1316,共10页
基因治疗是一个快速发展的领域,其中关于慢病毒介导的外源基因导入研究得最为广泛。随着研发技术的不断发展,在安全性方面慢病毒已经从第一代发展至第三代,而如何工程化获得高滴度慢病毒仍是当今技术一大瓶颈。运用Fibra-Cel片状载体作... 基因治疗是一个快速发展的领域,其中关于慢病毒介导的外源基因导入研究得最为广泛。随着研发技术的不断发展,在安全性方面慢病毒已经从第一代发展至第三代,而如何工程化获得高滴度慢病毒仍是当今技术一大瓶颈。运用Fibra-Cel片状载体作为HEK293T细胞载体基质,联合多个无菌细胞转瓶在滚瓶机上培养,对贴壁细胞进行规模放大化生产。通过对第三代慢病毒包装过程中影响慢病毒滴度的因素进行逐一筛选,使病毒滴度达到最优。研究结果成功运用Fibra-Cel片状载体作为HEK293T细胞粘附载体基质,作为一种贴壁细胞规模放大的方法,筛选出了利用滚瓶机制备第三代慢病毒的最优条件,规模化生产了3批慢病毒。在时间上,将慢病毒的生产时间从质粒转染到病毒收集的120 h缩短至54 h;在成本上,利用滚瓶机代替生物反应器实现了无需反复灭菌、全程一次性产品的安全有效低成本的运行,为慢病毒的规模化制备提供了技术上的支持,为临床应用奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 慢病毒 规模化制备 Fibra-Cel 基因治疗 CAR-T
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A new method for improving the accuracy of miRNA detection with NaYF4:Yb,Er upconversion nanoparticles
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作者 Lanlan Mao Zhuoxuan Lu +3 位作者 Nongyue He Liming Zhang Yan Deng deming duan 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第1期157-162,共6页
MicroRNAs(miRNAs)are small noncoding RNAs,which play a central role in gene expression regulation and have been considered as excellent biomarker candidates for clinical diagnosis and prognosis.So far,many miRNAs dete... MicroRNAs(miRNAs)are small noncoding RNAs,which play a central role in gene expression regulation and have been considered as excellent biomarker candidates for clinical diagnosis and prognosis.So far,many miRNAs detection methods require polymerase chain reaction(PCR)amplification following reverse transcription of miRNAs.These processes are complicated and time-consuming.In this work,we have developed a simpler method for miRNA detection based on base stacking hybridization happening on the surface of NaYF_4:Yb,Er upconversion nanoparticles.In this method,the fluorescence of NaYF_4:Yb,Er upconversion nanoparticles were functionalized as a reference standard,which can improve the accuracy of miRNA detection.On the basis of these findings,we suggest this novel approach for miRNA detection could be applied as an accurate and specific technique for miRNAs detection. 展开更多
关键词 microRNAs detection NaYF4:Yb Er reference standard base stacking hybridization
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