猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的 构建及其生物学特性的测定

为筛选猪痘病毒(SWPV)复制非必需区并测定其缺失株的生物学特性,本研究根据同源重组原理分别针对SWPV的TK(ORF063)、ORF 121和ORF 143基因设计引物。应用重叠延伸PCR技术拼接同源重组左右臂及EGFP筛选标记表达盒,将拼接片段分别转染到感染SWPV的PK15细胞。利用荧光显微镜观察标记含EGFP的单个蚀斑,筛选获取重组毒株。应用PCR及Western blotting对重组毒株进行鉴定。分别测定各毒株感染PK15细胞的蚀斑大小和皮下接种保育猪致病性。PCR结果表明,目的基因成功整合到相应位点,成功获得重组毒株rSWPV-TK、rSWPV-121和rSWPV-143;Western blotting结果显示,连续传代的重组毒株在PK15细胞上稳定表达外源蛋白。重组毒株在PK15细胞上形成的痘斑均小于亲本毒株,其中ORF121缺失株差异极显著(P<0.01)。各毒株均可导致保育猪痘斑形成,其中ORF121缺失株引起病变时间短,产生痘斑小,毒力较亲本下降。综上所述,本研究筛选到2个SWPV基因组中可供外源蛋白插入的复制非必需区ORF121和ORF143,为构建SWPV基因工程载体奠定了基础。

乳酸菌对嗜水气单胞菌体外抑制作用试验

[目的]探寻鱼源乳酸菌与嗜水气单胞菌二者之间的相关性。[方法]采用琼脂扩散法开展体外抑制试验,比对法开展影响因素试验。[结果]鱼源乳酸菌对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用;鱼源乳酸菌产酸强度越大,抑制作用越强;嗜水气单胞菌浓度越大,抑制作用越弱。[结论]鱼源乳酸菌可以抑制嗜水气单胞菌的生长,且对低浓度的嗜水气单胞菌抑制效果尤佳。

In Vitro Antibacterial Effect of Effective Microorganisms( EM) on Aeromonas hydrophila

In order to understand in vitro antibacterial effect of antibiotics and EM on Aeromonas hydrophila,14 isolates of A. hydrophila were isolated from diseased fish and aquaculture in the study. PCR amplification results of aerolysin gene( Aero gene) of isolates indicated that 7 out of 14 isolates were pathogenic A.hydrophila. In vitro antibacterial test indicated that 14 isolates were resistance to penicillin G,ampicillin,cephradine,cefazolin,tetracycline,terimethoprim,lincomycin and cephalexin,but showed high sensitivity to cefotaxime and furazolidone. In vitro antibacterial effect of EM on 14 isolates of A. hydrophila was positively correlated with concentration,and EM with the concentration greater than 60% had antibacterial effect on 14 isolates.

猪细菌性呼吸道疾病病原的分离鉴定及抑菌试验

2017年4-7月份,江西某规模化猪场的育肥猪发生呼吸道疾病,为了找出病原,遏制病情扩散,试验对患病猪内脏进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验,用微量生化法结合PCR法鉴定病原菌的种属,用琼脂扩散法进行药敏试验和抑菌试验,用腹腔注射法对小鼠进行攻毒试验。结果表明:共分离得到6株分离菌,其中分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5均不发酵糖类,M.R.、V-P、H_2S等试验均为阴性,尿素、硝酸盐还原等试验均为阳性;分离菌株AP1、AP2发酵果糖、葡萄糖等,不发酵乳糖、鼠李糖等;分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5与波氏杆菌同源性最高,分别为99.2%、99.4%、99.6%、99.5%;分离菌株AP1、AP2与胸膜肺炎放线杆菌同源性最高,分别为97.3%、98.4%。分离菌株JA1、JA2、JA4、JA5对青霉素G、氨苄西林、林可霉素等表现为耐药或中介,分离菌株AP1、AP2对恩诺沙星等表现为中介,对氟苯尼考等表现为敏感。乳酸菌(J2-100-R2、ZCR1-2)对分离菌有明显的抑菌作用,抑菌圈直径为17~26 mm;注射分离菌的小白鼠36 h死亡率为66.67%,耐过小白鼠皮肤出现溃疡。说明该病是由支气管败血波氏杆菌与胸膜肺炎放线杆菌混合感染所致的呼吸道疾病;氟苯尼考与乳酸菌联合用药可以防治由支气管败血波氏杆菌与胸膜肺炎放线杆菌引起的呼吸道疾病。

獭兔巴氏杆菌的分离鉴定及抑菌作用分析

为了确定引起南昌某兔场獭兔发病的病原,并找到有效的防治措施,试验对病死獭兔进行了临床诊断、细菌分离、生化鉴定、16S rRNA分子生物学鉴定、药敏试验、体外抑菌试验及动物回归试验。结果表明:剖检可见肝脏上有针尖状白色坏死点,分离菌瑞氏染色镜检呈两极浓染;菌落在5%兔血琼脂培养基上呈现圆润不溶血现象,为革兰氏阴性短小杆菌;分离菌均能发酵蔗糖,不能发酵乳糖,甲基红、乙酰甲基甲醇试验呈阴性;琼脂糖凝胶电泳得到大小为1 800 bp的目的条带,分离菌与NCBI中巴氏杆菌属的同源性高达97.3%~100%;分离菌对头孢氨苄高度敏感,对乙酰螺旋霉素和氨苄西林耐药;鸡唾液乳杆菌对分离菌的抑制效果较好;分离菌有较强的致病性,攻毒后12 h内小鼠全部死亡。说明分离菌为巴氏杆菌,防治首选头孢曲松或头孢氨苄。

肉鸽唾液乳杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为了寻找具有优势性能的乳酸菌,减少或替代抗生素在肉鸽养殖中的使用,试验采集2只健康肉鸽肠道内容物,用微量生化法结合分子生物学法进行细菌分离鉴定,用比对法进行生长特性试验,用琼脂扩散法进行体外抑菌试验,分离的乳酸菌腹腔接种小鼠进行菌株安全性试验。结果表明:从2只健康肉鸽肠道内容物中分离得到4株生长迅速、产酸能力强的分离菌(分别标记为G2、G3、G4和G5),其生化特性与乳酸菌基本一致;分离菌16S rRNA核苷酸序列与唾液乳杆菌相似性最高,均大于99%;分离菌对氨苄西林等耐药,对罗红霉素高度敏感,对巴氏杆菌等指示菌均有较强的抑制作用;pH值越小分离菌G2发酵液抑菌活性越强,高温会略微降低抑菌活性但变化较小,酶可增加抑菌活性;腹腔接种分离菌发酵液的小鼠生长良好,未见异常。说明分离菌均为唾液乳杆菌,产酸能力强,耐胃蛋白酶和胆盐,对部分病原菌有较强抑制作用,安全无毒,具备成为益生菌的优势。