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E6-AP基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中调节膜联蛋白A2的表达
被引量:
3
1
作者
侯令密
谢少利
+6 位作者
陈茂山
李敬东
emmanuel ajedichiga aduah
王明浩
邓世山
幸天勇
赵小波
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2016年第6期326-332,共7页
目的检测E6-AP基因及膜联蛋白A2(Annexin A2)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,探讨其对癌细胞增殖、凋亡及浸润转移的影响。方法设计1条无关序列Negative-siRNA作为阴性对照组和针对E6-AP基因的3条特异性E6-AP-siRNAs片段转染至MDA-MB-...
目的检测E6-AP基因及膜联蛋白A2(Annexin A2)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,探讨其对癌细胞增殖、凋亡及浸润转移的影响。方法设计1条无关序列Negative-siRNA作为阴性对照组和针对E6-AP基因的3条特异性E6-AP-siRNAs片段转染至MDA-MB-231细胞内作为实验组,未经处理细胞作为空白对照组,加入脂质体处理的细胞为脂质体组,利用RT-PCR检测干扰E6-AP后在MDA-MB-231细胞中E6-AP和Annexin A2 mRNA相对表达水平。选择出转染效率最高的E6-APsiRNA1组及阴性对照组、空白对照组继续行后续实验。Western blot检测干扰E6-AP后E6-AP和Annexin A2在MDA-MB-231细胞中的蛋白的相对表达水平。利用CCK-8试剂盒法、流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测干扰E6-AP后MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡、侵袭能力。基因的mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞数的组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD法,吸光度比较采用重复测量的方差分析。结果转染72 h后,E6-AP基因干扰后各实验组(E6-AP-siRNA1组、E6-AP-siRNA2组、E6-AP-siRNA3组)及空白对照组、阴性对照组及脂质体组中的E6-AP mRNA相对表达水平分别为0.159±0.003、0.325±0.006、0.229±0.007、0.593±0.031、0.594±0.012、0.612±0.016,Annexin A2 mRNA相对表达水平分别为0.929±0.017、1.013±0.082、0.992±0.024、1.341±0.037、1.323±0.010、1.326±0.012,差异均有统计学意义(F=850.792、417.447,P均<0.050)。转染72 h后,E6-AP-siRNA1组、空白对照组和阴性对照组中E6-AP及Annexin A2蛋白相对表达水平为分别为0.271±0.017、0.492±0.018、0.477±0.016及0.447±0.034、0.887±0.022、0.849±0.033,组间差异均有统计学意义(F=256.850、350.149,P均<0.050)。转染24、48、72、96 h后,E6-AP-siRNA1组、阴性对照组和空白对照组间比较,不同时间点之间比较,细胞吸光度差异均有统计学意义(F=524.828,P<0.001;F=904.079,P<0.001);分组与时间点存在交互作用(F=28.116,P<0.001)。转染72 h后,空白对照组、阴性对照组、E6-AP-siRNA1组的凋亡率分别为2.959±0.117、3.097±0.070、10.812±0.199,组间差异有统计学意义(F=3110.005,P<0.050)。Transwell检测E6-AP-siRNA1组、空白对照组、阴性对照组中细胞穿透Matrigel胶到达Transwell下室的细胞数分别为99±5、96±6、62±7,组间差异有统计学意义(F=55.404,P<0.001)。结论干扰E6-AP基因可使Annexin A2表达下调,同时可诱导MDA-MB-231细胞的凋亡,其增殖、侵袭能力也受到抑制。
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关键词
乳腺肿瘤
细胞增殖
细胞凋亡
肿瘤侵润
原文传递
题名
E6-AP基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中调节膜联蛋白A2的表达
被引量:
3
1
作者
侯令密
谢少利
陈茂山
李敬东
emmanuel ajedichiga aduah
王明浩
邓世山
幸天勇
赵小波
机构
川北医学院附属医院甲状腺乳腺外科
川北医学院附属医院肝胆胰肠研究所
遂宁市中心医院乳腺甲状腺外科
第三军医大学附属西南医院乳腺外科
川北医学院附属医院解剖学教研室
出处
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2016年第6期326-332,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(81172496)
四川省教育厅重点项目(13ZA0228)
四川省科技厅科技创新苗子工程项目(2016060)
文摘
目的检测E6-AP基因及膜联蛋白A2(Annexin A2)在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达,探讨其对癌细胞增殖、凋亡及浸润转移的影响。方法设计1条无关序列Negative-siRNA作为阴性对照组和针对E6-AP基因的3条特异性E6-AP-siRNAs片段转染至MDA-MB-231细胞内作为实验组,未经处理细胞作为空白对照组,加入脂质体处理的细胞为脂质体组,利用RT-PCR检测干扰E6-AP后在MDA-MB-231细胞中E6-AP和Annexin A2 mRNA相对表达水平。选择出转染效率最高的E6-APsiRNA1组及阴性对照组、空白对照组继续行后续实验。Western blot检测干扰E6-AP后E6-AP和Annexin A2在MDA-MB-231细胞中的蛋白的相对表达水平。利用CCK-8试剂盒法、流式细胞术、Transwell小室侵袭实验分别检测干扰E6-AP后MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡、侵袭能力。基因的mRNA及蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞数的组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD法,吸光度比较采用重复测量的方差分析。结果转染72 h后,E6-AP基因干扰后各实验组(E6-AP-siRNA1组、E6-AP-siRNA2组、E6-AP-siRNA3组)及空白对照组、阴性对照组及脂质体组中的E6-AP mRNA相对表达水平分别为0.159±0.003、0.325±0.006、0.229±0.007、0.593±0.031、0.594±0.012、0.612±0.016,Annexin A2 mRNA相对表达水平分别为0.929±0.017、1.013±0.082、0.992±0.024、1.341±0.037、1.323±0.010、1.326±0.012,差异均有统计学意义(F=850.792、417.447,P均<0.050)。转染72 h后,E6-AP-siRNA1组、空白对照组和阴性对照组中E6-AP及Annexin A2蛋白相对表达水平为分别为0.271±0.017、0.492±0.018、0.477±0.016及0.447±0.034、0.887±0.022、0.849±0.033,组间差异均有统计学意义(F=256.850、350.149,P均<0.050)。转染24、48、72、96 h后,E6-AP-siRNA1组、阴性对照组和空白对照组间比较,不同时间点之间比较,细胞吸光度差异均有统计学意义(F=524.828,P<0.001;F=904.079,P<0.001);分组与时间点存在交互作用(F=28.116,P<0.001)。转染72 h后,空白对照组、阴性对照组、E6-AP-siRNA1组的凋亡率分别为2.959±0.117、3.097±0.070、10.812±0.199,组间差异有统计学意义(F=3110.005,P<0.050)。Transwell检测E6-AP-siRNA1组、空白对照组、阴性对照组中细胞穿透Matrigel胶到达Transwell下室的细胞数分别为99±5、96±6、62±7,组间差异有统计学意义(F=55.404,P<0.001)。结论干扰E6-AP基因可使Annexin A2表达下调,同时可诱导MDA-MB-231细胞的凋亡,其增殖、侵袭能力也受到抑制。
关键词
乳腺肿瘤
细胞增殖
细胞凋亡
肿瘤侵润
Keywords
Breast neoplasms
Cell proliferation
Apoptosis
Neoplasm invasiveness
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
E6-AP基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中调节膜联蛋白A2的表达
侯令密
谢少利
陈茂山
李敬东
emmanuel ajedichiga aduah
王明浩
邓世山
幸天勇
赵小波
《中华乳腺病杂志(电子版)》
CAS
CSCD
2016
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