KSH VRTA通过GC/Sp1和p53顺式元件上调survivin表达

目的:定位survivin基因启动子中参与卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)上调survivin表达的重要元件。方法:构建survivin基因启动子的突变报告质粒,采用萤光素酶报告基因检测和染色质免疫共沉淀技术,定位survivin基因启动子区域能与RTA相互作用的顺式元件。结果:突变GC/Sp1和p53两个结合位点启动子活性几乎完全关闭,p53顺式作用元件对RTA上调survivin基因启动子活性具有协同作用。结论:KSHV RTA能够与survivin基因启动子中的GC/Sp1和p53顺式元件相互作用,特异性地增强survivin基因启动子活性。

KSHV RTA介导的宿主细胞Bcl-2表达上调促进病毒的溶解性感染

目的研究卡泼肉瘤病毒(kaposis's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制及其生物学意义。方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(western blotting)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平;采用荧光素酶报告基因技术检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节。构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的BC3细胞,TPA诱导48 h后,分别用PCR、PI染色流式细胞术检测病毒子DNA和细胞凋亡率。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA反式激活Bcl-2基因启动子,这种激活作用具有剂量依赖性。用RNA干扰技术抑制Bcl-2基因后,TPA诱导的KSHV阳性细胞与对照组细胞相比凋亡率增加,病毒子产生减少。结论KSHV RTA能够调控内源性细胞凋亡信号通路,延缓溶解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子产生。

KSHV RTA上调宿主细胞Bcl-2表达的分子机制研究

目的研究卡波氏肉瘤病毒(Kaposis's Sarcoma-Associated Herpesvirus,KSHV)编码的复制转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)调控宿主细胞Bcl-2表达的分子机制。方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平;采用PCR定点突变和荧光素酶报告基因技术,检测RTA对Bcl-2基因启动子活性的调节,并鉴定启动子序列中对RTA调控具有重要作用的顺式反应元件。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞Bcl-2 mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA通过与Bcl-2基因启动子中CCN9GG反应元件结合激活Bcl-2的转录,这种激活作用呈剂量依赖性,并且P2启动子对RTA反式激活Bcl-2基因不可或缺。结论 KSHVRTA能够上调宿主细胞Bcl-2表达,CCN9GG样RTA反应元件和P2启动子对RTA调控Bcl-2表达具有重要作用。

卡泼氏肉瘤病毒复制转录激活因子上调宿主细胞survivin表达的机制

目的研究卡泼肉瘤病毒(KSHV)编码的复制转录激活因子(RTA)对宿主细胞survivin表达的调控及机制。方法用实时聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot)技术检测RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平;采用荧光素酶报告基因技术,检测RTA对survivin基因启动子活性的调节。结果 RTA转染的细胞、TPA诱导的KSHV阳性细胞survivin mRNA和蛋白质表达水平显著增高。RTA通过增强survivin基因启动子活性反式激活survivin表达。结论 KSHV RTA能够特异性地增强survivin基因启动子活性,上调宿主细胞survivin表达。

KSHV RTA通过上调宿主细胞survivin表达促进病毒子代产生

目的:研究卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)复制及转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)上调宿主细胞存活蛋白(survivin)表达的生物学意义。方法:构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的JSC细胞,用Western blot证实survivin抑制的KSHV阳性细胞成功构建。Survivin抑制的JSC细胞经TPA诱导48 h后,用PCR检测病毒子DNA;在TPA诱导24、48和72 h后分别用realtime PCR和PI染色流式细胞术检测病毒裂解基因ORF57和TK表达及细胞凋亡率。结果:TPA诱导的JSC-shSur细胞与对照组细胞相比,病毒子代产生减少,病毒裂解基因表达下调,细胞凋亡率增加(P <0. 05)。结论:KSHV RTA能够利用survivin信号通路延缓裂解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子代产生。