细胞型DNA特异结合蛋白的快速分离

本文建立了一个改良的凝胶洗脱法,用以分离细胞型DNA特异结合蛋白质。采用小型平板SDS凝胶电泳分离和银染鉴定,用硝酸纤维素滤膜结合法和迁移率改变法检测DNA活性。此法具有快速、经济和保留DNA活性等优点,适用于分离纯化象细胞型DNA特异结合这样含量极微的蛋白质。

人Ha-ras基因中蛋白质特异结合DNA位点的鉴定

利用迁移率改变法和DNaseⅠ足纹法观察了Ha-ras癌基因5’端上游序列与特异结合蛋白的相互作用。用限制性内切酶XmaⅠ消化6.6kb Ha-ras基因得到约10个片段,进行3’-末端标记,与T24细胞核提取液反应,经低离子强度聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现与蛋白质特异结合的416bp片段,位于Ha-ras基因5’-端上游1230—1646区域内,靠近转录起始点1660bp处(CAP位置)。另一个与蛋白质特异结合的389bp片段,位于转录起始点上游162—551处。