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鸭疫里默氏菌噬菌体宿主谱的拓宽
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作者 程龙飞 江南松 +6 位作者 刘荣昌 傅秋玲 梁齐章 万春和 黄瑜 傅光华 陈红梅 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期34-38,共5页
为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合... 为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合液中单一噬菌体的噬菌谱。结果表明,30代噬菌体混合液可裂解79.2%(19/24)的鸭疫里默氏菌试验菌株;30代噬菌体混合液中分离出的单一噬菌体能裂解的试验菌株数量为2~9株;裂解数最多的5株单一噬菌体,以各自宿主菌传代10次,噬菌谱没有发生变化;将裂解谱互补的单一噬菌体混合,4株噬菌体即可裂解19株试验菌株,与30代噬菌体混合液相同。说明建立的方法可以拓宽噬菌体混合液、单一噬菌体的噬菌谱,为噬菌体鸡尾酒制剂的毒株选择奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 噬菌体 噬菌谱 拓宽
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教育现象学审视下教师教学敏感的意涵、价值及其实现 被引量:2
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作者 付光槐 彭玉青 《教育理论与实践》 北大核心 2024年第1期37-42,共6页
教育现象学以注重体验现实生活,关注教育情境,强调他者性的体验等为出发点和归宿,为教学敏感提供了理论诠释的基础。从教育现象学的角度出发,教学敏感源于体验儿童的现实生活,既是一种情境性的智慧行动,又是一种他者性的实践能力。教育... 教育现象学以注重体验现实生活,关注教育情境,强调他者性的体验等为出发点和归宿,为教学敏感提供了理论诠释的基础。从教育现象学的角度出发,教学敏感源于体验儿童的现实生活,既是一种情境性的智慧行动,又是一种他者性的实践能力。教育现象学视域下,教师教学敏感的目的是指向儿童成长,动力是教师对学生的情感,归宿是引导学生构建人生意义,关键在于教师置悬已有观念。教育现象学视域下,教学敏感的生成需要教师加强教育生活体验,关注教育情境的复杂性与多变性,通过实践中的反思唤醒自身的爱与智慧。 展开更多
关键词 教育现象学 教师教学敏感 专业意识 教学情境 教育生活体验
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鸭三种病毒性疾病多重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
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作者 李海琴 傅光华 +5 位作者 黄江南 傅秋玲 谢金防 程龙飞 黄瑜 韦启鹏 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第7期655-659,共5页
为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PC... 为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PCR检测方法。特异性检验表明,该多重PCR方法可同时扩增出NDV(510bp)、DPV(400bp)、DTMUV(300bp)的特异片段,对其他鸭常感染病毒扩增结果均为阴性;敏感性测定表明,该多重PCR技术最低能检出1.02×10~4拷贝·μL^(-1) NDV、3.50×10~3拷贝·μL^(-1) DPV和1.17×10~4拷贝·μL^(-1) DTMUV。采用建立的多重PCR方法对250份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法具有快速、特异性强、敏感性高等优点,适用于临床样品中上述3种病原的检测。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸭瘟病毒 鸭坦布苏病毒 多重PCR
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鸭瘟病毒新近分离毒株部分基因变异分析 被引量:5
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作者 傅光华 陈翠腾 +10 位作者 刘荣昌 卢立志 施少华 江斌 傅秋玲 程龙飞 沈军达 田勇 万春和 陈红梅 黄瑜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2215-2222,共8页
旨在研究鸭群中新流行的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)感染状况及其分子特征。本研究对2016—2017年福建不同地区疑似感染DPV的发病鸭组织样品进行了检测、病毒分离和部分基因的序列分析。从临床样品中分离获得24株DPV,发现确诊感染... 旨在研究鸭群中新流行的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)感染状况及其分子特征。本研究对2016—2017年福建不同地区疑似感染DPV的发病鸭组织样品进行了检测、病毒分离和部分基因的序列分析。从临床样品中分离获得24株DPV,发现确诊感染DPV鸭的日龄存在品种差异性,其中半番鸭和番鸭感染DPV的日龄中位值分别为90和88d,而麻鸭感染DPV的日龄中位值为287d。对DPVUL56/LORF5基因、TK/gH基因及UL2区域的序列分析表明,分离毒株均未出现基因片段缺失,与我国DPV参考强毒株的序列相似性均在99%以上,但在UL56/LORF5基因及TK基因上存在有规律性的核苷酸变异。经分子系统进化分析发现,新近流行的DPV毒株与我国参考强毒株(GroupⅠ)处于不同进化分支,为GroupⅡ进化分支,且可进一步细分为两个不同的亚分支(GroupⅡa、GroupⅡb)。以上结果揭示,新近流行的DPV毒株感染不同品种鸭存在日龄差异性,与我国DPV参考强毒株相比已出现不同程度的变异,应加强对该病毒的分子流行病学监测,实时了解其流行变异情况,为新流行鸭瘟的快速准确诊断和防控提供科学依据。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分离鉴定 分子特征
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鸭腺病毒3型LAMP快速检测方法的建立 被引量:4
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作者 陈翠腾 黄瑜 +6 位作者 陈珍 朱春华 傅光华 程龙飞 刘荣昌 刘斌琼 万春和 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期289-294,共6页
鸭腺病毒3型(DAdV-3)是我国鸭群中出现的一种新型腺病毒,属于腺病毒科禽腺病毒属成员。为建立DAdV-3的快速检测方法,本研究根据DAdV-3的fiber2基因,设计特异性的LAMP检测引物,构建重组质粒标准品pT-DAdV-3,经各反应条件优化,建立了DAdV-... 鸭腺病毒3型(DAdV-3)是我国鸭群中出现的一种新型腺病毒,属于腺病毒科禽腺病毒属成员。为建立DAdV-3的快速检测方法,本研究根据DAdV-3的fiber2基因,设计特异性的LAMP检测引物,构建重组质粒标准品pT-DAdV-3,经各反应条件优化,建立了DAdV-3 LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP检测方法最佳反应条件为64℃40 min;该方法仅对DAdV-3呈阳性反应,与番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源减蛋综合征病毒等其他常见鸭源传染病病原均无交叉反应,特异性强。该方法对重组质粒标准品的最低检测限为50拷贝/μL;利用本研究建立的LAMP方法、前期建立的PCR方法和基于MGB探针的荧光定量PCR方法对临床收集的66份鸭组织病料样品进行检测,结果显示阳性率分别为13.63%(9/66)、13.63%(9/66)和15.15%(10/66);且LAMP检测的阳性样品经PCR方法检测和荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究首次建立了检测DAdV-3的LAMP方法,该方法快速敏感、特异性强,为该病的流行病学调查提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭腺病毒3型 fiber2基因 LAMP 检测
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鸭肠炎病毒强毒和疫苗弱毒鉴别诊断PCR方法的建立 被引量:3
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作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第3期219-224,共6页
为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0... 为建立鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)强毒和疫苗弱毒的鉴别诊断方法,通过分析比较GenBank数据库中上传的DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因核苷酸序列,分析DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上的核苷酸序列,利用引物设计软件Oligo 7.0,设计一组可对DEV强毒株和疫苗弱毒株UL2基因进行编码区全长扩增的特异性引物,经条件优化后建立DEV强毒和疫苗弱毒鉴别诊断的PCR方法。结果表明,DEV疫苗弱毒和DEV强毒在UL2基因上存在528bp的连续核苷酸序列缺失。优化后的PCR方法最佳退火温度为55℃,对DEV强毒和疫苗弱毒扩增片段大小分别为1 019bp和491bp;敏感性强,最低检测限为15.3pg;特异性好,对鸭源常见传染病(如番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)均无特异性扩增。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 强毒 疫苗弱毒 UL2基因 PCR 鉴别诊断
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检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用 被引量:3
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 江南松 傅光华 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期374-378,共5页
为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结... 为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示,胶体金标记兔抗鸡IgG的最佳pH为8.5,最佳标记浓度为7μg/mL;rPlpB和羊抗兔IgG抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/mL。利用该方法检测SPF鸡血清,鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清,结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性,其他均为阴性,表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测,结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性,表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时,同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异,表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测,结果显示,二者阳性符合率为91.5%,阴性符合率为100%,总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采用该方法能够检出抗体阳性,免疫后21 d,所有鸡均检出抗体阳性。本研究首次基于rPlpB建立了检测鸡血清Pm抗体的CGTS方法,该方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,适合在基层推广,为评价禽霍乱疫苗的免疫效果提供了可行技术。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 重组脂蛋白B
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鸭源H7N9亚型禽流感病毒感染SPF鸡转录组学分析 被引量:2
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作者 施少华 陈珍 +6 位作者 程龙飞 傅光华 傅秋玲 刘荣昌 万春和 陈红梅 黄瑜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期886-893,共8页
目的为了分析鸭源H7N9亚型禽流感病毒感染SPF鸡后宿主基因表达水平的变化。方法以鸭源H7N9亚型禽流感病毒感染SPF鸡,收集肺脏进行高通量测序。结果与对照组相比,感染组得到差异表达基因740个,其中上调基因有602个,下调基因有138个。GO... 目的为了分析鸭源H7N9亚型禽流感病毒感染SPF鸡后宿主基因表达水平的变化。方法以鸭源H7N9亚型禽流感病毒感染SPF鸡,收集肺脏进行高通量测序。结果与对照组相比,感染组得到差异表达基因740个,其中上调基因有602个,下调基因有138个。GO条目分析发现,差异基因主要涉及免疫应答反应和炎症反应等。经KEGG数据库比对注释及富集分析显示有7个通路富集显著,其中Toll-like信号通路有11个基因表达上调,分别为IL-6、TLR4、PIK3、IRF7、MD-2、IRF5、MYD88、CD86、STAT1、TLR2和CCL4,NOD-like受体信号通路有7个基因表达上调,分别为IRF7、CTSB、P2RX7、CYBB、PSTPIP1、HSP90AA1和NAMPT。结论鸭源H7N9亚型病毒感染SPF鸡后,免疫相关基因表达明显增强。在Toll-like信号通路中,TLR4在MD-2的协助下被激活,随后依赖MYD88途径激活下游的IRF5,继而引起CCL4、IL-6显著表达。同时NLRP3炎症体在H7N9亚型病毒感染过程中也发挥着重要作用。 展开更多
关键词 鸭源 禽流感病毒 H7N9亚型 转录组学
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鸭多杀性巴氏杆菌抗体检测胶体金试纸条的研制及应用 被引量:3
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 傅光华 江南松 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期65-69,共5页
为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示... 为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示,仅鸭抗多杀性巴氏杆菌血清检测为阳性,阴性血清、鸭抗大肠埃希氏菌、鸭抗鸭疫里默氏菌、鸭抗沙门氏菌和鸭抗金黄色葡萄球菌血清的检测结果均为阴性,表明D-CGTS的特异性良好。敏感性试验结果显示,对效价1∶16(琼脂扩散试验)的鸭抗多杀性巴氏杆菌血清1∶320倍稀释后采用制备的试纸条检测结果仍为阳性,表明D-CGTS的敏感性较高。重复性试验结果显示,同批次的不同试纸条和不同批次的试纸条,检测阴性血清和鸭抗多杀性巴氏杆菌血清的结果相同,表明D-CGTS的重复性好。对92份鸭血清采用D-CGTS和ELISA进行检测,结果显示,阳性符合率为94.03%,阴性符合率为100%,总符合率为95.65%。结果表明,制备的D-CGTS操作简单,具有较强的特异性、较高的敏感性和较好的重复性,适合在兽医临床推广应用。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 荚膜
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禽坦布苏病毒单克隆抗体的制备与初步分析 被引量:1
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作者 施少华 程龙飞 +6 位作者 傅光华 陈珍 傅秋玲 刘荣昌 万春和 陈红梅 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第6期551-555,共5页
为进一步建立基于禽坦布苏病毒E囊膜蛋白的快速检测方法,本研究通过纯化的禽坦布苏病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,获得2株杂交瘤细胞株(2F6和4E11),其分泌的单抗效价可达1∶64 000,并可有效识别禽坦布苏病毒感染的Vero细胞;原核表达的囊膜E... 为进一步建立基于禽坦布苏病毒E囊膜蛋白的快速检测方法,本研究通过纯化的禽坦布苏病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,获得2株杂交瘤细胞株(2F6和4E11),其分泌的单抗效价可达1∶64 000,并可有效识别禽坦布苏病毒感染的Vero细胞;原核表达的囊膜E经SDS-PAGE电泳后可与单抗进行Western-blot发生反应,初步表明制备的单克隆抗体为禽坦布苏病毒E蛋白单抗,为该病分子流行病学研究及新型诊断方法建立奠定基础。 展开更多
关键词 禽坦布苏病毒 单克隆抗体 E蛋白
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鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立
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作者 万春和 刘荣昌 +5 位作者 程龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1558-1566,共9页
鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工... 鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前,尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点,明确DEV疫苗株在UL2基因上存在528bp连续核苷酸缺失,设计针对该差异的实时荧光定量PCR引物,建立了EvaGreen实时荧光定量PCR检测DEV疫苗株的方法。结果表明,建立的检测DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,当UL2基因含量为5.25×101~5.25×106拷贝·μL^(-1)时有良好的线性扩增,其标准曲线方程Y轴截距为34.95,斜率为-3.218,扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%;敏感性强,最低检测限为52.5拷贝·μL^(-1);特异性好,对DEV疫苗株扩增产物的熔解曲线分析,仅出现1个单特异峰值[Tm=(90.62±0.28)℃],无引物二聚体,对其他鸭源传染病病原(如鸭肠炎病毒强毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、番鸭源鹅细小病毒、新型基因重组型鸭细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭源鹅多瘤病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.55%~1.72%和0.92%~2.49%。本研究建立了DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,为评价DEV活载体基因工程疫苗免疫防控机制提供参考。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 疫苗株 UL2基因 EvaGreen 实时荧光定量PCR方法
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红毛鸭胚源鹅细小病毒江西株的分离鉴定与NS基因的分析
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作者 傅秋玲 傅光华 +9 位作者 万春和 韦启鹏 陈红梅 黄江南 程龙飞 施少华 刘荣昌 陈翠腾 李海琴 黄瑜 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第12期6-9,共4页
自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株... 自死亡的红毛鸭胚中分离获得1株病毒株(命名为JX-JA-2017株),经胶体金试纸条检测呈鹅细小病毒(GPV)阳性,经中和试验测定可被GPV阳性血清特异性中和,表明该毒株为GPV。对其进行非结构基因(NS)特征分析发现,其NS基因与GenBank登入的13株鹅细小病毒核苷酸序列同源性为94%~99.6%,氨基酸同源性为94.8%~99.5%;经分子进化分析发现,该株病毒与亚洲型GPV分离株共处于一个进化分支。以上结果揭示,红毛鸭胚存在GPV感染,且其JX-JA-2017株病毒与经典的GPV具有共同的遗传起源,丰富了GPV的流行病学与分子生态学内涵,为加强我国鹅细小病毒病的防控提供科学依据。 展开更多
关键词 红毛鸭胚 鹅细小病毒 胶体金试纸条 NS 基因分析
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我国部分地区鸭1型甲肝病毒流行株遗传变异分析
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作者 傅光华 陈翠腾 +7 位作者 温名根 施少华 陈红梅 万春和 傅秋玲 程龙飞 刘荣昌 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第2期109-113,共5页
为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;... 为了解鸭群中鸭1型甲肝病毒(DHAV-1)的流行及其分子变异情况,对2015-2016年福建、广东、浙江及江西鸭群采集的327份临床样品进行检测、病毒分离鉴定、序列测定与分析。结果表明,自327份临床样品中检出DHAV-1阳性样品35份,阳性率10.7%;从阳性样品中分离获得23株DHAV-1,主要来自30日龄以内的麻鸭和半番鸭。对DHAV-1的VP1基因分子特征及遗传变异分析,表明23株病毒VP1基因核苷酸序列同源性介于93.3%~99.9%,分属2个病毒亚群,两亚群间的遗传距离为0.06。23株临床分离株中有18株与引起雏鸭胰腺泛黄的毒株(MPZJ1206株)处于同一亚群,为目前流行的优势毒株,与国内外疫苗株核苷酸同源性在91.3%~96.2%,存在较大差异。由此可见,我国福建省及周边地区鸭群中不同DHAV-1流行株之间及流行毒株与疫苗株间均存在不同程度的差异。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒 VP1基因 变异分析
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番鸭细小病毒和鸭3型腺病毒的分离鉴定及其全基因组序列分析 被引量:1
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作者 张瑞 陈长福 +7 位作者 刘荣昌 程龙飞 傅光华 施少华 陈红梅 万春和 傅秋玲 黄瑜 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期20-26,共7页
广东省湛江市某鸭场饲养的15日龄番鸭发病,病鸭主要表现张口呼吸、腹泻等症状,病死率达40%左右。为明确其病原,采集病死鸭肝脏、脾脏等组织进行PCR检测,病原分离鉴定,全基因组序列测定与分析,动物回归试验。结果显示,从该群病死鸭中同... 广东省湛江市某鸭场饲养的15日龄番鸭发病,病鸭主要表现张口呼吸、腹泻等症状,病死率达40%左右。为明确其病原,采集病死鸭肝脏、脾脏等组织进行PCR检测,病原分离鉴定,全基因组序列测定与分析,动物回归试验。结果显示,从该群病死鸭中同时分离到1株番鸭细小病毒(MDPV)与1株鸭3型腺病毒(DAdV-3),分别命名为MDPV GDZJ1901株和DAdV-3 GDZJ201901株。全基因组序列分析显示,MDPV GDZJ1901株基因组全长为5067 bp,G+C含量为45.69%,与MDPV分离株的同源性介于98.1%~99.51%,其中与MDPV分离株M8株的核苷酸同源性最高,为99.51%;对其进行遗传重组分析发现,GDZJ1901以经典MDPV YY株为骨架,在P9启动子和VP3区域经历重组。DAdV-3 GDZJ201901株基因组全长为43860 bp,含27个开放阅读框(ORF)。全基因组序列比对分析显示,GDZJ201901株与已报道的DAdV-3同源性最高,为99.89%~99.91%,且含有2个fiber基因,符合DAdV-3基因组特征。动物回归试验结果显示,新分离的MDPV和DAdV-3毒株对3日龄雏番鸭的致死率分别为28.6%和21.4%。结果表明,从同一群发病雏鸭中同时分离到MDPV和DAdV-3野毒株。 展开更多
关键词 番鸭 番鸭细小病毒 鸭3型腺病毒 全基因组
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基于TCGA数据库胆管癌自噬-临床预后模型的构建和评估 被引量:1
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作者 邹文强 符广华 +1 位作者 杨艳梅 张新宇 《肝胆胰外科杂志》 CAS 2021年第7期411-418,共8页
目的探讨自噬相关基因(autophagy-related genes,ATGs)在临床预后方面的价值,并构建自噬基因的预后风险模型,评估胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)患者的生存及预后状况。方法在癌症基因组图谱数据库(TCGA)中下载CCA的转录组数据和临床数... 目的探讨自噬相关基因(autophagy-related genes,ATGs)在临床预后方面的价值,并构建自噬基因的预后风险模型,评估胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)患者的生存及预后状况。方法在癌症基因组图谱数据库(TCGA)中下载CCA的转录组数据和临床数据,从人类自噬数据库(HADb)中提取自噬相关基因,筛选出CCA样本中差异表达的自噬相关基因(DEATGs);GO富集分析与KEGG通路分析进一步阐明DEATGs在CCA中的作用;通过Cox回归分析构建自噬预后风险评分模型,并运用生存分析、风险曲线、ROC曲线及独立预后分析验证预后模型的准确性。结果CCA组织样本和非肿瘤组织样本一共筛选出49个DEATGs(上调的基因48个,下调的基因1个);通过单因素Cox回归分析及多因素Cox回归分析筛选出5个最有预后价值的基因(RHEB、PPP1R15A、ATG101、BNIP3、NRG1),并基于这5个基因构建自噬预后风险评分模型,模型公式为:风险值=NRG1表达量×1.1207+BNIP3表达量×1.4002+ATG101表达量×1.3457-PPP1R15A表达量×1.1613-RHEB表达量×1.3279。生存分析表明低风险组的生存率要显著高于高风险组,风险曲线表明患者风险值与生存时间及生存状态显著相关,ROC曲线提示自噬预后模型具有良好的准确性,是一个独立的预后因素(HR 1.427,95%CI 1.161~1.756,P<0.001)。结论5个自噬基因(RHEB、PPP1R15A、ATG101、BNIP3、NRG1)构建的自噬相关预后风险模型,可以有效预测CCA患者的预后情况。 展开更多
关键词 胆管癌 癌症基因组图谱数据库(TCGA) 人类自噬数据库(HADb) 自噬差异基因 COX回归分析 ROC曲线 预后模型
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红景天苷单克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫方法的建立 被引量:1
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作者 王伟 胡立新 +1 位作者 伏光华 张海丽 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期595-599,共5页
【目的】制备红景天苷单克隆抗体,建立红景天苷间接竞争酶联免疫方法,实现经济、高效、简便快速批量检测红景天药材及其制品中的红景天苷含量,为其商品化检测试剂盒开发奠定基础。【方法】用已经成功偶联的红景天苷-BSA作为免疫原,免疫... 【目的】制备红景天苷单克隆抗体,建立红景天苷间接竞争酶联免疫方法,实现经济、高效、简便快速批量检测红景天药材及其制品中的红景天苷含量,为其商品化检测试剂盒开发奠定基础。【方法】用已经成功偶联的红景天苷-BSA作为免疫原,免疫6~8周龄Balb/c小鼠,ELISA检测血清效价,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法筛选、克隆后获得能够稳定产生红景天苷单克隆抗体的细胞株,体内诱生腹水制备大量红景天苷单克隆抗体。利用该抗体,建立红景天苷间接竞争酶联免疫分析方法并进行方法学确认,包括日内精密度、日间精密度、回收率等指标。【结果】建立的间接竞争酶联免疫吸附分析方法的线性范围为4.07~598.45ng·mL-1,检测限IC10为1.77ng·mL-1,半数抑制率IC50为49.33ng·mL-1,日内精密度和日间精密度均小于4.5%,加标样品的平均回收率为94.3%,红景天苷含量检测结果与高效液相色谱法一致。【结论】本研究成功制备了红景天苷单克隆抗体,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,能够用于为红景天苷含量的快速检测提供依据。 展开更多
关键词 红景天苷 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫法
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CASC5通过BUB1促进乳腺癌发生发展的分子机制研究 被引量:1
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作者 何贵省 陈恒余 +7 位作者 吕小玲 宋韬 陈秀秀 符广华 吴煌福 陈运景 苏亚静 郑武平 《局解手术学杂志》 2023年第4期297-303,共7页
目的探究易感性癌症候选基因5(CASC5)对乳腺癌发生发展的作用及其相关机制。方法收集50例乳腺癌患者的肿瘤组织及其癌旁组织,采用qRT-PCR检测CASC5的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过脂质体转染法将si-CASC5、si-BUB1和... 目的探究易感性癌症候选基因5(CASC5)对乳腺癌发生发展的作用及其相关机制。方法收集50例乳腺癌患者的肿瘤组织及其癌旁组织,采用qRT-PCR检测CASC5的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过脂质体转染法将si-CASC5、si-BUB1和si-NC转染至MDA-MB-231和MCF-7细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞CASC5、BUB1表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力。利用String数据库分析CASC5相关蛋白,并在MCF7细胞中验证。通过免疫共沉淀检测CASC5与BUB1的结合情况,qRT-PCR验证BUB1在肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,及其与CASC5表达水平的相关性。结果与癌旁组织相比,肿瘤组织中CASC5表达水平升高(P<0.05),CASC5表达水平与患者TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。与si-NC组相比,si-CASC5组MDA-MB-231和MCF-7细胞中CASC5表达水平降低(P<0.05),细胞增殖能力及侵袭能力减弱(P<0.05)。生物信息学预测CASC5可能与BUB1、NSL1、NDC80和MIS12等相互作用。与si-NC组相比,si-CASC5组MDA-MB-231细胞中BUB1表达水平降低(P<0.05),NSL1、NDC80和MIS12表达水平无统计学差异(P>0.05)。CASC5免疫沉淀产物中可检测到BUB1蛋白,BUB1免疫沉淀产物中可检测到CASC5蛋白。与si-NC组相比,si-BUB1组MDA-MB-231细胞中BUB1表达水平降低(P<0.05),细胞增殖能力及侵袭能力减弱(P<0.05)。与癌旁组织相比,肿瘤组织中BUB1表达水平升高(P<0.05),CASC5表达水平与BUB1表达水平呈正相关(r=0.4815)。结论CASC5可通过与BUB1相互作用,调控BUB1蛋白表达从而促进乳腺癌发生发展。 展开更多
关键词 乳腺癌 易感性癌症候选基因5 BUB1 免疫共沉淀
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硅酸盐重防腐涂料的改性研究 被引量:1
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作者 傅光华 陈刚 《现代涂料与涂装》 CAS 2019年第11期1-4,共4页
采用物理共混的方式分别将自制和市售的硅丙乳液添加至无机硅酸钾溶液中,制备硅酸钾-硅丙杂化乳液,然后配以锌粉制备硅酸盐重防腐涂料。通过FT-IR、TGA、SEM、XRD等化学表征方法对杂化乳液及其涂膜进行分析讨论,结果表明:自制的硅丙乳... 采用物理共混的方式分别将自制和市售的硅丙乳液添加至无机硅酸钾溶液中,制备硅酸钾-硅丙杂化乳液,然后配以锌粉制备硅酸盐重防腐涂料。通过FT-IR、TGA、SEM、XRD等化学表征方法对杂化乳液及其涂膜进行分析讨论,结果表明:自制的硅丙乳液与硅酸钾溶液具有更好的相容性,以此制备的硅酸盐重防腐涂料综合性能优异。 展开更多
关键词 物理共混 硅丙乳液 杂化 相容性
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含GMA耐热改性剂的合成及性能研究 被引量:1
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作者 石如珠 陶齐 +2 位作者 傅光华 王天晴 樊庆春 《现代涂料与涂装》 CAS 2018年第12期4-7,共4页
以BPO为引发剂、二甲苯为溶剂,采用溶液聚合的方法合成了N-环己基马来酰亚胺(CHMI)-苯乙烯(St)-甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)共聚物,并详细研究了聚合反应温度、聚合反应时间、引发剂浓度、溶剂用量及单体配比对聚合反应过程的影响。结果... 以BPO为引发剂、二甲苯为溶剂,采用溶液聚合的方法合成了N-环己基马来酰亚胺(CHMI)-苯乙烯(St)-甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)共聚物,并详细研究了聚合反应温度、聚合反应时间、引发剂浓度、溶剂用量及单体配比对聚合反应过程的影响。结果表明:当温度为105℃,BPO的使用量占总单体量的0.6%,反应4 h可得到耐热改性剂CHGS;常温下,含有甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)的聚合物在很多极性溶剂中基本不溶解,表现出了较好的耐溶剂性,并且,耐热改性剂CHMI-St-GMA的玻璃转变温度(T_g)达200℃,高于其他含CHMI耐热改性的T_g,表现出了良好的耐热性。 展开更多
关键词 耐热剂 优化条件 耐溶剂 耐热性
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布地奈德联合不同药物雾化吸入治疗儿童哮喘临床分析 被引量:2
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作者 傅光华 谭清 +2 位作者 李黎 余韶卫 梁美嫦 《罕少疾病杂志》 2019年第3期55-57,63,共4页
目的观察评价布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗哮喘的临床果。方法选择2017年2月-2018年3月期间我院收治的哮喘患儿86例,按照数字表法随机分为两组,对照组43例给予布地奈德联合特布他林雾化吸入治疗;观察组43例在对照组基... 目的观察评价布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗哮喘的临床果。方法选择2017年2月-2018年3月期间我院收治的哮喘患儿86例,按照数字表法随机分为两组,对照组43例给予布地奈德联合特布他林雾化吸入治疗;观察组43例在对照组基础上给予异丙托溴铵雾化吸入治疗,并比较两组治疗后的临床效果。结果观察组总有效率为95.35%显著地高于对照组的63.79%(χ^2=13.7712,P=0.0000),观察组气喘、咳嗽和哮鸣音消失时间及住院时间均显著地短于对照组(分别t=2.1735、3.0986、2.7142、2.2106,P<0.05),两组患儿FVC、FEV1、FEV1/FVC均明显的升高,且治疗后观察组均明显的高于对照组(分别t=1.9758、2.1642、8.4136,P<0.05)。结论布地奈德联合特布他林及异丙托溴铵雾化吸入治疗儿童哮喘疗效确切,能够有效的降低机体炎症反应并改善肺功能,显著地缩短临床症状消失时间,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 儿童哮喘 布地奈德 特布他林 异丙托溴铵 雾化吸入
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