基于NF-κB和STAT3探讨白芍总苷对化学性肝损伤肝阴虚证大鼠的作用机制

[目的]基于核因子-κB(NF-κB)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)研究白芍总苷对化学性肝损伤肝阴虚型大鼠的保护作用机制。[方法]将雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、一贯煎组(6.35 g/kg)、白芍总苷组(50 mg/kg)。采用20%四氯化碳(CCL4)橄榄油溶液联合30 mg/kg甲状腺片造模,造模的同时给药,时间为6周。观察大鼠体质量、肛温、摄食量、摄水量、舌面干湿度,以及测定血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量、cAMP/cGMP。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)的含量变化并取肝脏进行Masson染色评估肝纤维化程度;测定血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的水平及大鼠肝脏NF-κB p65、STAT3 mRNA及蛋白水平。[结果]与模型组相比,白芍总苷组体质量上升(P>0.05);白芍总苷组肛温下降(P<0.01),24 h摄食量和饮水量减少(P<0.01),舌面干湿度增加(P<0.01);白芍总苷组cAMP降低,cGMP升高,cAMP/cGMP下降(P<0.01);白芍总苷组ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL均下降(P<0.01),TBA含量无统计意义(P>0.05);白芍总苷组肝纤维化程度明显减轻;白芍总苷组IL-1、IL-6、TNF-α均下降,IL-10、IL-1Ra水平均上升(P<0.05或P<0.01);白芍总苷组NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.01),STAT3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01)。[结论]研究结果显示,白芍总苷对肝阴虚型肝损伤具有较好的保护作用,可能通过抑制NF-κB的激活,促进STAT3的表达,从而减少促炎细胞因子分泌,增加抗炎细胞因子释放。

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。

羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究

为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。

白芍多糖对肝阴虚证模型大鼠证候表征及内分泌/能量代谢的影响

目的在建立肝阴虚证病证结合实验模型的基础上,研究白芍多糖对大鼠化学性肝损伤肝阴虚证证候表征及内分泌/能量代谢的影响。方法SPF级雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,适应性喂养一周后,根据体质量随机区组法分为空白组、模型组、一贯煎组、白芍多糖组。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射浓度20%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)橄榄油溶液,联合甲状腺片30 mg/kg同时灌胃给药,连续6周。6周后观察大鼠体质量、易激惹程度、毛发光泽度、小便颜色、大便颜色及质地等并进行评分,测量体质量、肛温、舌面干湿度、摄食量、摄水量,测定血清环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量,计算cAMP/cGMP比值。测定血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aliquot aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)的含量变化并取肝脏进行苏木精—伊红染色病理切片检查;测定血清睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E 2)、皮质类固醇(crticosteroid,COR)水平,测定肝脏Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^( 2+)-Mg ^(2+)-ATP酶活性。结果与模型组相比,白芍多糖组大鼠大便评分升高(P<0.01),其余体征评分均显著下降(P<0.01);白芍多糖组体质量均有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05);实验第2、4周,白芍多糖组肛温下降(P<0.01);白芍多糖组舌面干湿度上升(P<0.01),24小时摄食量、饮水量无统计学差异(P>0.05);白芍多糖组血清cAMP降低,cGMP升高,cAMP/cGMP下降(P<0.01),ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL均下降(P<0.01),TBA含量降低但无统计意义(P>0.05);病理染色显示肝组织结构中度异常,视野内部分肝细胞轻度脂肪变性,胞质内可见大量小空泡,部分肝细胞气球样变性,肝实质内少量炎症细胞浸润,且未见明显炎症细胞浸润,肝脏组织病理状态有所恢复。白芍多糖组血清E_(2)水平降低,COR水平升高(P<0.05,P<0.01),T水平升高但差异无统计意义(P>0.05);白芍多糖组肝脏Na^(+)-K^(+)-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性均降低(P<0.01)。结论白芍多糖能有效保护肝阴虚型化学性肝损伤,调节环核苷酸、内分泌紊乱和能量代谢亢进,这可能是白芍发挥保护肝损伤肝阴虚证的作用机制之一,从一定程度上揭示了白芍养肝阴的科学内涵。

基于网络药理学与分子对接探讨渴络欣胶囊“异病同治”治疗糖尿病微血管并发症的作用机制

目的:基于网络药理学与分子对接探讨渴络欣胶囊“异病同治”治疗糖尿病微血管并发症的潜在机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和BATMAN-TCM数据库检索药物的化合物成分及靶点,利用GeneCards、NCBI、OMIM和DisGeNET数据库筛选疾病靶点,绘制韦恩图并取药物-疾病交集靶点。采用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,使用Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点-疾病-通路”网络。采用R 4.1.2软件及微生信平台进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。利用AutoDock Vina和Pymol软件对关键活性成分和核心靶点进行分子对接和可视化处理。结果:共获得药物靶点350个、糖尿病微血管并发症靶点2259个,两者的交集靶点为186个;拓扑分析结果表明,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白细胞介素-6、磷酸甘油醛脱氢酶等靶点度值较大;GO富集分析共获得2973个条目,KEGG信号通路有180条;分子对接结果显示,关键活性成分与核心靶点具有良好的结合能力。结论:渴络欣胶囊可通过多成分、多靶点、多通路治疗糖尿病微血管并发症,其机制可能与有效成分通过磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B、晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体、缺氧诱导因子-1和TNF等通路发挥抗炎、抗氧化应激、调控新生血管生成等“异病同治”作用有关。

我国首例非洲猪瘟的确诊

2018年8月1日,辽宁省报告沈阳市一养猪户饲养的猪陆续发生不明原因死亡,病死猪剖检发现脾脏异常肿大,疑似非洲猪瘟病毒感染。国家外来动物疫病研究中心采集病料进行了检测,确诊为非洲猪瘟病毒核酸阳性,序列分析发现,其B646L/p72基因序列417个碱基与俄罗斯毒株100%匹配,与俄罗斯和东欧目前流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)属于同一进化分支。这是我国发现的首例非洲猪瘟。疫情来源有待进一步调查。

非洲猪瘟病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立

非洲猪瘟是一种跨境动物疫病,对世界养猪业危害严重。目前,该病的流行范围越来越广。为防止该病传入我国,当前急需建立快速、简便、可靠的检测方法。本研究通过分析非洲猪瘟病毒B646L基因保守区域,设计并合成了特异性引物和exo探针,建立了检测非洲猪瘟病毒的实时荧光RPA方法。利用该方法可在20 min内完成检测过程,最低可检测到16拷贝/反应;与猪的其他常见病原核酸无交叉反应;与荧光PCR方法具有相似的灵敏度和特异性;利用该方法对100份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究所建立的非洲猪瘟病毒实时荧光RPA检测方法具有简单、快速、敏感性高、特异性强的优点,在临床鉴别诊断、检验检疫和病原监测等方面具有广泛的应用价值。

塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增技术(RPA)实时荧光检测方法的建立

塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)可感染猪,引起类似口蹄疫病毒感染造成的水疱性病变,新生仔猪病死率达30%~70%。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),针对SVV 3D基因设计了引物和探针,并进行筛选、反应条件优化以及敏感性、特异性和重复性试验,建立了实时荧光RPA方法。结果显示,本方法在40℃、10 min内检测的最低浓度为28拷贝/μL;与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应;通过3次重复试验检测2.8×10~6~2.8×10~1拷贝/μL的6个稀释度样品,在荧光强度达1500 mV所需时间变异系数范围在2.44%~14.95%。该等温、快速扩增方法为猪群出现水疱性疾病的鉴别诊断提供了技术支持,对及时采取适当防控措施具有重要意义。

江苏省首例非洲猪瘟的现场诊断

2018年8月18日,江苏省连云港市某养猪场发生不明原因生猪疫情。技术人员第一时间赶赴现场开展现场诊断和调查工作,从流行病学、临床症状、病理变化等多角度开展现场诊断,判定为非洲猪瘟临床可疑病例。国家外来动物疫病研究中心实验室检测确诊此次疫情。此次疫情符合非洲猪瘟急性发病特点。本报告将为现阶段我国非洲猪瘟疫情排查工作提供重要参考。

泔水传播非洲猪瘟的历史案例与启示

目前我国已有多个省暴发非洲猪瘟(ASF)。根据农业农村部公开的数据,泔水是传播ASF的重要因素之一。泔水传播ASF的风险也已被国际广泛认可。本文通过分析泔水传播ASF的原因,解读泔水传播ASF的国际实例,结合我国泔水饲喂情况,提出了避免ASF通过泔水饲喂扩散,必须依据现实、堵疏兼顾、科学规划整个养殖链条的想法。

我国北方地区部分规模奶牛场Q热流行情况初步调查

为了解我国北方地区规模奶牛场的Q热流行情况,在7个规模奶牛场采集233份奶牛血清,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行Q热抗体检测;采集103份棉拭子,采用荧光定量PCR方法进行Q热病原检测。结果显示:从233份血清中检测到Q热阳性抗体34份,血清学阳性率为14.59%;从103份棉拭子样品中检测到Q热病原核酸12份,病原学阳性率为11.65%;7个规模奶牛场均存在不同程度的Q热病原感染,阳性率介于3%~33%。结果表明,我国北方地区规模奶牛场Q热流行较为广泛,应引起养殖场和相关部门的高度重视,有必要加强Q热的流行病学调查和监测以及新型诊断技术研发,以控制该病在动物间传播,降低人员感染风险。

鹦鹉热衣原体荧光环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)是一种人兽共患病原体,能引起自然疫源性衣原体病,目前广泛分布于世界各地。本研究应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对鹦鹉热衣原体23S RNA基因序列设计引物,并进行筛选以及敏感性和特异性试验,建立了鹦鹉热衣原体恒温荧光扩增方法。该方法在63℃恒温条件下1 h内即可显示结果,操作简单、快速,特异性强,灵敏度可达100拷贝/μL,且与流产衣原体、动物布鲁氏菌、牛结核分枝杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应;用国产仪器可直接通过检测荧光信号判读结果,既增强了准确性,也避免了开盖污染产生假阳性;应用建立的LAMP方法对实验室保存的临床DNA样品进行检测,发现检测结果与QPCR相同。该方法的建立弥补了传统检测技术的不足,为实现鹦鹉热衣原体的现场快速诊断提供了技术支持。

单分子免疫阵列技术在传染病诊断中的应用

单分子免疫阵列(single molecule array,Simoa)技术,又称"数字ELISA",是近年来新开发的一种数字免疫分析方法,将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测。该方法可测量各种不同基质(血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞提取物等)中的蛋白质,检测限可达飞摩尔(fg/mL)数量级,灵敏度较传统ELISA提高约1000倍。目前,该技术在一些重大传染病,如新冠肺炎、结核病、艾滋病、朊病毒病诊断中的优势逐渐凸显。Simoa技术可帮助监测新冠病毒感染进程,有望实现早期高灵敏度诊断,以区分新冠肺炎轻症和重症患者;有望帮助诊断活动性结核病,并可以监测结核病治疗效果;可更准确检测人免疫缺陷病毒(HIV)免疫相关蛋白含量变化,提高早期诊断的灵敏性;可在羊瘙痒病临床症状出现前检测活体动物血清,提高痒病早期检测能力,从而有望用于人类克雅氏症诊断。未来,通过开发相关病种的检测试剂盒,有望利用Simoa技术提高疫病的综合诊断能力,还可进行疫苗免疫效果评价,为疫病防控提供依据。

光强胁迫下六种苔藓植物的叶绿素荧光动力学响应差异

为了解成都市区常见苔藓对不同光照强度的光合响应差异,该研究对狭叶小羽藓(Haplocladium angustifolium)、鳞叶藓(Taxiphyllum taxirameum)、长肋青藓(Brachythecium populeum)、卵叶青藓(Brachythecium rutabulum)、弯叶灰藓(Hypnum hamulosum)和地钱(Marchantia polymorpha L.)6种苔藓植物进行了光照强度胁迫后的光合色素含量和荧光动力学参数测定。结果表明:狭叶小羽藓和卵叶青藓叶片的初始荧光(Fo)在高光(300μmol·m^(-2)·s^(-1))时均明显下降到低光(10μmol·m^(-2)·s^(-1))水平值以下。与低光相比,6种苔藓的PSII原初光能转化效率(Fv/Fm)均随着光强的增大以不同幅度减小,其中显著减少的是鳞叶藓、长肋青藓、卵叶青藓和地钱;6种苔藓的光化学猝灭系数(qP)在中光(100μmol·m^(-2)·s^(-1))时均未发生显著性变化,高光时鳞叶藓、长肋青藓、卵叶青藓和地钱显著下降。此外,狭叶小羽藓的非光化学猝灭系数(NPQ)在3个光强下均无显著变化。综合分析得出狭叶小羽藓和弯叶灰藓更能适应高光照的胁迫,鳞叶藓、长肋青藓、卵叶青藓和地钱相对更适应低光照。

超高分子量聚乙烯和铜合金网衣的污损生物附着特征研究

为研究不同材质网衣的污损生物附着效果,于2022年3—5月(春季)和6—8月(夏季)在福建莆田南日岛海域开展超高分子量聚乙烯网衣和铜合金网衣的现场挂网实验。结果表明:两种网衣污损生物的附着呈现出一定的季节性差异,两种网衣污损生物的密实度、种类数量、优势种种类数、湿质量和密度均表现为春季低于夏季。其中,超高分子量聚乙烯网衣春、夏季的密实度平均值分别为47.19%、86.98%,污损生物的湿质量平均值分别为(144.83±15.69)、(1054.59±34.81)g·网^(−1),密度平均值分别为(2699±49)、(4630±53)个·网^(−1),种类数分别为12、35种,优势种种类数分别为4、6种;铜合金网衣春、夏季的密实度平均值分别为41.04%、74.95%,污损生物的湿质量平均值分别为(118.32±20.13)、(876.25±23.16)g·网^(−1),密度平均值分别为(2678±42)、(3870±64)个·网^(−1),种类数分别为12、19种,优势种种类数分别为3、4种。春、夏季高分子量聚乙烯网衣污损生物的密实度、种类数(春季相同)、优势种种类数(春季相同)、湿质量和密度平均值均高于铜合金网衣。海水温度的变化是污损生物季节性差异的主要原因,铜合金网衣的防污损生物附着效果优于高分子量聚乙烯网衣。

表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定

本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10^9 IFU·m^L^-1;经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。

双馈电机在电网电压不平衡下网侧控制策略研究

双馈电机凭借其良好的发电性能,逐渐成为国际上风力发电的主流机型之一。本文建立了电网电压平衡和不平衡下的双馈电机的数学模型。进一步研究两种情况下的双馈电机的网侧变频器[1]的控制策略。在电网电压不平衡的情况下,仿真研究磁链定向的矢量控制策略和基于正负序分离的矢量控制策略,并比较两者的控制性能。利用Matlab/Simulink和LabVIEW仿真验证了,后者能消除二倍频脉动且谐波总畸变率更低。

几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

为比较几种常用布鲁氏菌病(简称布病)检测方法特性,在某疫苗免疫的奶牛场随机选取40头奶牛,采集血清和奶样各40份,然后对采集的血清进行虎红平板凝集、试管凝集、胶体金、酶联免疫吸附试验(iELISA和cELISA)和琼脂扩散方法检测,对采集的奶样进行病原学检测(qPCR)和抗体检测(胶体金)。结果显示:4种国标方法(虎红平板凝集、试管凝集、iELISA和cELISA)检出的阳性样品数量有较大差距,分别为16、6、23和33份,其中经试管凝集试验检出的阳性血清,经其他3种国标方法也检测为阳性;通过胶体金法检出阳性血清数(9份)略高于试管凝集试验,且血清及牛奶样品经胶体金检测结果基本一致;琼扩法检出12份阳性血清,且显示抽检奶牛中存在野毒感染;qPCR和胶体金试纸条对采集奶样的检测结果有较大差距,经qPCR检测仅1份样品呈阳性。结果表明:国标方法中,试管凝集试验特异性最高,iELISA和cELISA敏感性较高;病原学检测临床样品检出率较低,琼脂扩散试验敏感性有限,胶体金法敏感性适中,操作简便,适合布病免疫奶牛场自检。本研究为牛场布病不同检测目的方法选择提供了参考。

盐胁迫对菌根化沙枣幼苗生长性状的影响

以实生沙枣苗木为供试植物、异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis)为供试菌株,采用盆栽培养方法,设置浓度为0、100、200、300 mmol·L^(-1)的NaCl胁迫菌根化沙枣幼苗,测定不同浓度NaCl胁迫的菌根化沙枣幼苗的株高、基径、生物量、功能叶片生长参数、盐害症状,分析盐胁迫对菌根化植物生长的影响。结果表明:盐胁迫对沙枣苗木生长具有显著的抑制效应,但不同浓度盐处理与对照相比,接种丛枝菌根真菌(AMF)显著提高了沙枣苗木的株高、基径(P<0.05)。在盐浓度为300 mmol·L^(-1)时,沙枣苗木的株高、基径增加幅度,分别为11.30%、4.35%。经浓度为100、200、300 mmol·L^(-1)的盐处理,接种沙枣苗木比不接种沙枣苗木的全株总生物量,分别增加36.30%、52.22%、104.54%。在盐浓度为300 mmol·L^(-1)时,菌根化沙枣苗木的单叶面积、比叶面积、叶面积比率,比对照分别增加138.46%、30.90%、130.27%。相同盐浓度胁迫时,接种沙枣苗木叶片脱落率、枯黄率、盐害率,均显著低于不接种处理(P<0.05)。接种异形根孢囊霉,缓解了盐胁迫对沙枣生长产生的不利影响,提高了植物耐盐胁迫能力。

多杀性巴氏杆菌荧光RAA快速检测方法的建立

为建立一种敏感特异、简便快速的多杀性巴氏杆菌检测方法,根据多杀性巴氏杆菌kmt1基因保守区序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件优化筛选,建立了重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法。结果显示,建立的多杀性巴氏杆菌RAA荧光检测方法在39℃恒温条件下20 min内即可特异性的检出多杀性巴氏杆菌,与鸭疫里默氏杆菌、副猪嗜血杆菌、支原体、链球菌、大肠杆菌、附红细胞体、新孢子虫无交叉反应,方法的最低检出限为10 copies/μL,组内和组间重复性试验的变异系数均小于10%,用该方法对45份临床样本进行检测,结果阳性率为33.33%,与荧光定量PCR方法检测结果一致。本研究建立的多杀性巴氏杆菌荧光RAA检测方法操作简单、反应时间短、具有较高的特异性和敏感性,不依赖于复杂的仪器,适合临床上对多杀性巴氏杆菌的快速检测。