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鸽腺病毒通用型实时荧光PCR检测方法的建立与应用
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作者 陈璐 朱明慧 +8 位作者 丁雨 李阳 亓丽红 房立春 蒋文明 王静静 刘华雷 李建亮 于晓慧 《中国动物检疫》 CAS 2024年第3期89-95,共7页
鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAdV)是影响鸽产业健康发展的重要病原之一。为实现PiAdV的高通量快速检测,根据GeneBank登录的PiAdV-A种和PiAdV-B种病毒pⅧ基因序列的共同保守区域设计特异性检测引物和探针,经反应条件优化,建立了一种Pi... 鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAdV)是影响鸽产业健康发展的重要病原之一。为实现PiAdV的高通量快速检测,根据GeneBank登录的PiAdV-A种和PiAdV-B种病毒pⅧ基因序列的共同保守区域设计特异性检测引物和探针,经反应条件优化,建立了一种PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果显示:该方法的最佳探针浓度为0.2μmol/L,与鸽群其他常见病毒无交叉反应,对PiAdV的最低检测限为56.9 copies/μL,比常规PCR敏感性高100倍,组内和组间重复变异系数均小于1.8%。利用该方法和常规PCR方法对20份疑似PiAdV感染样品进行检测,发现PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法的病毒阳性检出率高于常规PCR方法。结果表明,本研究建立的PiAdV通用型实时荧光PCR检测方法特异性强、敏感性高、可靠性好,可用于PiAdV感染的临床检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 鸽腺病毒 通用型 实时荧光PCR 检测方法
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禽腺病毒载体疫苗研究进展
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作者 孟鸽 封莹洁 +9 位作者 房立春 尚佳静 罗娟 刘冠慧 范春艳 于晓慧 蒋文明 刘华雷 张永英 李阳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第6期82-89,共8页
禽腺病毒(FAdV)是危害家禽养殖业的重要病原之一,具有高致病性和传染性。近年来,随着基因工程技术的发展,已研发出许多新型疫苗,其中病毒载体疫苗因具有用量少、成本低等独特的优势以及广阔的应用前景,成为当今与未来疫苗研发的重要方... 禽腺病毒(FAdV)是危害家禽养殖业的重要病原之一,具有高致病性和传染性。近年来,随着基因工程技术的发展,已研发出许多新型疫苗,其中病毒载体疫苗因具有用量少、成本低等独特的优势以及广阔的应用前景,成为当今与未来疫苗研发的重要方向。腺病毒具有结构简单、宿主范围广泛、外源基因容载量大、易进行遗传操作、易转染等特点而被广泛用作疫苗载体。其中FAdV基因组比哺乳动物腺病毒大10 kb左右,且具有更大的外源DNA容载量,因此对FAdV载体的深入研究将对禽类疫病预防起到重要作用。本文综述了FAdV的病原特点以及国内外FAdV载体研究现状,以期为进一步研发FAdV载体疫苗提供理论基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒 病毒载体 疫苗
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针对非洲猪瘟病毒p30基因CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建和初步鉴定 被引量:1
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作者 于海男 崔帅 +5 位作者 王洋 刘雪婷 高新桃 房立春 郭晓宇 朱鸿飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期59-66,共8页
构建针对非洲猪瘟病毒(ASFV)p30(CP204L)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,探究该系统对p30蛋白真核表达的影响。以含p30基因序列的质粒p30-IRES为模板,定向扩增目的基因片段并克隆至pmCherry-N1载体,构建含有p30、红色荧光报告基因的融... 构建针对非洲猪瘟病毒(ASFV)p30(CP204L)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,探究该系统对p30蛋白真核表达的影响。以含p30基因序列的质粒p30-IRES为模板,定向扩增目的基因片段并克隆至pmCherry-N1载体,构建含有p30、红色荧光报告基因的融合表达质粒;通过网站http://crispr.mit.edu/设计靶向CP204L的单导向RNA(sgRNA),并克隆至Cas9表达质粒eSpCas9-2A-GFP(PX458)中。将融合表达质粒与Cas9表达质粒共转染HEK 293T细胞,同时设置对照组,转染48 h后通过Western blot和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测转染细胞中p30蛋白和mRNA表达水平。由于CRISPR/Cas9基因编辑系统靶向切割p30基因,Western blot和qPCR结果显示转染靶向p30基因的Cas9质粒后,p30蛋白的真核表达受到抑制,具有显著性差异(P<0.05)。结果表明,CRISPR/Cas9基因编辑系统可以高效切割非洲猪瘟p30基因,抑制该蛋白的真核表达水平,该体系为抑制病毒生长和疫情防控提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 P30基因 CRISPR/Cas9 单导向RNA 真核表达
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不同分子生物学方法在H5亚型禽流感病毒检测中的应用比较
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作者 尚佳静 罗娟 +8 位作者 于晓慧 房立春 亓丽红 孟鸽 封莹洁 蒋文明 刘华雷 刘冠慧 李阳 《中国动物检疫》 CAS 2023年第11期100-106,共7页
H5亚型高致病性禽流感(H5-HPAI)是严重危害家禽养殖业和公共卫生健康的一类动物疫病,也是我国高度重视、严格防控的人兽共患病。目前常用检测H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)的分子生物学技术包括反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量P... H5亚型高致病性禽流感(H5-HPAI)是严重危害家禽养殖业和公共卫生健康的一类动物疫病,也是我国高度重视、严格防控的人兽共患病。目前常用检测H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)的分子生物学技术包括反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、反转录重组酶辅助扩增(RT-RAA)、RT-RAA结合侧流层析试纸条(RT-RAA-LFD)、RT-RAA-簇状规则间隔短回文重复序列及其相关蛋白结合侧流层析试纸条(RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD)等。为比较不同检测方法对H5-AIV检测的灵敏度差异,将制备的cRNA标准品进行倍比稀释,分别用RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD进行检测。结果显示:RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD与RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD方法的检测灵敏度分别为10^(2)、10^(-1)、10^(0)、10^(0)、10^(-1)copies/μL。与RT-qPCR相比,RT-PCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD在临床样本检测上具有较高的符合率,分别为85.00%、93.75%、88.75%、91.25%。结果表明,5种方法均对H5-AIV具有良好的检出率,但RT-qPCR与RT-RAA-CRISPRCas13a-LFD灵敏度更高,分别适合在实验室与基层养殖场进行临床检测。本研究评估了不同方法在H5-AIV检测中的应用效果,为在不同场景下选择准确可靠的检测方法提供了参考,也为H5-AIV感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5亚型 检测方法 灵敏度
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血清4型禽腺病毒山东株基因组序列的克隆及遗传演化分析 被引量:2
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作者 宋玲玲 于可响 +9 位作者 刘涛 鞠艳 吕俊峰 房立春 吴家强 艾武 袁小远 亓丽红 贺鹏 岳耀辉 《家禽科学》 2020年第11期12-18,共7页
从山东某地区发生心包积液综合征的发病鸡中收集病料,按常规方法处理后接种SPF鸡胚,分离到1株病毒,经PCR和测序分析鉴定该分离株为Ⅰ群禽腺病毒、血清4型禽腺病毒,命名为FAV-SD。合成引物成功扩增病毒全基因组序列,并进行序列的测定与分... 从山东某地区发生心包积液综合征的发病鸡中收集病料,按常规方法处理后接种SPF鸡胚,分离到1株病毒,经PCR和测序分析鉴定该分离株为Ⅰ群禽腺病毒、血清4型禽腺病毒,命名为FAV-SD。合成引物成功扩增病毒全基因组序列,并进行序列的测定与分析,结果表明FAVSD株全基因组大小为43752 bp,通过hexon基因同源性比对,FAV-SD与我国今年报道的禽腺病毒血清4型同源性最高;遗传进化分析结果表明,FAV-SD分离株与我国禽腺病毒血清4型流行毒株处于同一分支,而与国外禽腺病毒血清4型毒株不在同一分支,存在遗传差异,说明中国流行的血清4型禽腺病毒具有自身地域特点。该病毒株的分离鉴定为禽腺病毒疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 血清4型 分离鉴定 同源性
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牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备 被引量:1
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作者 林伟东 隋修锟 +5 位作者 王召阳 贾红 房立春 王海春 朱良全 鑫婷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1774-1782,共9页
为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠... 为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性。结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性。具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应。本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 抗酸 抗酸蛋白酶(MarP) 单克隆抗体(MAb) 丝氨酸蛋白酶
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鸭特异性CpG ODNs的筛选与初步应用 被引量:3
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作者 任肖 张姗 +1 位作者 房立春 侯绍华 《中国家禽》 北大核心 2019年第19期23-27,共5页
研究旨在以鸭外周血淋巴细胞为模型对设计的18条CpGODNs进行筛选获得鸭特异性的CpGODN,并与鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)联用评价免疫效果。分别通过淋巴细胞增殖试验和实时荧光定量PCR测定CpG作用后的刺激指数和相关免疫基因的mRNA表... 研究旨在以鸭外周血淋巴细胞为模型对设计的18条CpGODNs进行筛选获得鸭特异性的CpGODN,并与鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)联用评价免疫效果。分别通过淋巴细胞增殖试验和实时荧光定量PCR测定CpG作用后的刺激指数和相关免疫基因的mRNA表达水平,从而确定最优的CpGODN,后用阻断ELISA测定其与HB株灭活苗联用免疫北京鸭的抗体水平。结果显示,通过细胞增殖试验初筛发现刺激指数最高的CpGODN为B-2、C-3和P-4;实时荧光定量PCR检测发现P-4刺激的外周血淋巴细胞中,IL-4、IL-6、IL-10和IFN-α以及TLR21mRNA表达水平最高;P-4与灭活苗联用后,第14、28、42和56天的抗体阻断率PI值均显著高于对照组(P<0.05)。以上结果表明,P-4对鸭外周血淋巴细胞具有较强的免疫刺激活性,与鸭坦布苏病毒病灭活苗联用可促进早期抗体的产生并提高抗体水平。 展开更多
关键词 CPGODN 佐剂 鸭坦布苏病毒病灭活疫苗
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基于iTRAQ定量蛋白质组学技术的不同感染状态结核病牛血清蛋白质组学分析
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作者 房立春 高新桃 +6 位作者 林伟东 贾红 郭晓宇 侯邵华 姜一曈 朱鸿飞 鑫婷 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期30-38,共9页
为了探明不同感染状态结核病牛血清蛋白质水平的差异,揭示结核病牛在不同感染状态下的生理状态。本研究通过皮内变态反应、IFN-γ释放试验从临床筛选结核病阳性牛(TB)和阴性牛(NC),根据牛鼻拭子巢式PCR检测结果将临床阳性牛(TB)分为PCR... 为了探明不同感染状态结核病牛血清蛋白质水平的差异,揭示结核病牛在不同感染状态下的生理状态。本研究通过皮内变态反应、IFN-γ释放试验从临床筛选结核病阳性牛(TB)和阴性牛(NC),根据牛鼻拭子巢式PCR检测结果将临床阳性牛(TB)分为PCR阳性结核病牛(TBP)和PCR阴性结核病牛(TBN),每组20头,采集血清。应用同位素标记绝对定量(iTRAQ)/质谱(MS)联用技术,筛选不同感染状态结核病牛血清中的差异蛋白,结合平行反应监测技术(PRM)对6个差异蛋白进行鉴定。结果表明:TB/NC组共筛选到223个差异蛋白(差异倍数≥1.5或者≤0.67倍,P≤0.05),其中上调蛋白112个,下调蛋白111个;TBP/TBN组共筛选到74个差异蛋白,其中上调蛋白46个,下调蛋白28个;PRM成功鉴定到了6个差异蛋白且变化趋势与iTRAQ结果一致;同时,生物信息学分析表明,牛感染结核分枝杆菌后补体系统和凝血系统发生了显著改变。本研究证实了不同感染状态结核病牛在血清蛋白质组成上的差异巨大,表明了牛结核病不同感染状态下不同的生理状态,为牛结核病的不同感染状态的区分提供了理论支持,同时为牛结核病的防控奠定了一定基础。 展开更多
关键词 牛结核病 感染状态 血清 差异蛋白 iTRAQ技术
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免疫增强剂CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF鸡H9亚型禽流感灭活疫苗免疫效应的影响
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作者 房立春 胡宇航 +5 位作者 李月涛 刘涛 亓丽红 吴家强 赵鹏 朱鸿飞 《中国动物检疫》 CAS 2022年第8期97-102,共6页
为分析CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG DNA)对H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)灭活疫苗的免疫增强作用,利用商品化的含有CpG DNA的重组质粒作为AIV-H9灭活抗原的免疫佐剂,经肌内注射1、7、21日龄的SPF鸡,通过检测鸡血清中HI抗体和外周血淋巴细胞CD... 为分析CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG DNA)对H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)灭活疫苗的免疫增强作用,利用商品化的含有CpG DNA的重组质粒作为AIV-H9灭活抗原的免疫佐剂,经肌内注射1、7、21日龄的SPF鸡,通过检测鸡血清中HI抗体和外周血淋巴细胞CD4、CD8基因相对表达量,分析CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF雏鸡首次免疫AIV-H9灭活疫苗免疫效果的影响。结果显示:1、7和21日龄SPF鸡首免后,CpG DNA免疫增强剂添加组的HI抗体滴度明显高于未添加组(P≤0.05),HI抗体峰值滴度升高了近2log2滴度,差异极显著(P≤0.01),且上升速度更快;CpG DNA免疫增强剂添加组,在21日龄免疫时的免疫效果明显优于1日龄和7日龄免疫组,表现为HI抗体上升速度更快,峰值更高,离散度更小;首免3周后,7日龄和21日龄SPF鸡CpG DNA免疫增强剂添加组的CD4、CD8基因相对表达量均高于同日龄未添加组,且明显高于1日龄SPF鸡组(P≤0.01)。结果表明,CpG DNA能显著增强鸡对AIV-H9灭活疫苗的特异性体液免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂,尤其在21日龄使用时免疫效果更好。本研究为CpG DNA重组质粒在禽流感疫苗上的联合应用以及研制新型复合佐剂疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 CPG DNA 免疫增强剂 禽流感 免疫效应
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非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备 被引量:1
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作者 蒋思文 房立春 +5 位作者 冯泽新 焦鹏 王玥超 梁艳 史东宇 陈青 《北京农学院学报》 2021年第4期1-6,共6页
【目的】为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)泛素结合酶(UBCv1)的生物学功能及致病机制奠定基础。【方法】以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,... 【目的】为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)泛素结合酶(UBCv1)的生物学功能及致病机制奠定基础。【方法】以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白。重组蛋白经His柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】成功构建了重组质粒pET-28a-I215L,重组菌经IPTG诱导后能够可溶性表达重组蛋白,产物约28 kDa,与预测大小一致。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶7290000;Western blot结果显示抗体具有较好的特异性。【结论】成功表达纯化了ASFV的泛素结合酶并制备其多克隆抗体,为后期解析ASFV泛素结合酶的结构、功能及病毒相关致病机制提供了重要的生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 泛素结合酶 原核表达 多克隆抗体
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Effects of Shear Fracture on In-depth Profile Modification of Weak Gels 被引量:2
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作者 Li Xianjie Song Xinwang +3 位作者 Yue Xiang'an Hou Jirui fang lichun Zhang Huazhen 《Petroleum Science》 SCIE CAS CSCD 2007年第1期55-60,共6页
Two sand packs were filled with fine glass beads and quartz sand respectively. The characteristics of crosslinked polymer flowing through the sand packs as well as the influence of shear fracture of porous media on th... Two sand packs were filled with fine glass beads and quartz sand respectively. The characteristics of crosslinked polymer flowing through the sand packs as well as the influence of shear fracture of porous media on the indepth profile modification of the weak gel generated from the crosslinked polymer were investigated. The results indicated that under the dynamic condition crosslinking reaction happened in both sand packs, and the weak gels in these two cases became small gel particles after water flooding. The differences were: the dynamic gelation time in the quartz sand pack was longer than that in the glass bead pack. Residual resistance factor (FRR) caused by the weak gel in the quartz sand pack was smaller than that in the glass bead pack. The weak gel became gel particles after being scoured by subsequent flood water. A weak gel with uniform apparent viscosity and sealing characteristics was generated in every part of the glass bead pack, which could not only move deeply into the sand pack but also seal the high capacity channels again when it reached the deep part. The weak gel performed in-depth profile modification in the glass bead pack, while in the quartz sand pack, the weak gel was concentrated with 100 cm from the entrance of the sand pack. When propelled by the subsequent flood water, the weak gel could move towards the deep part of the sand pack but then became tiny gel particles and could not effectively seal the high capacity channels there. The in-depth profile modification of the weak gel was very weak in the quartz sand pack. It was the shear fracture of porous media that mainly affected the properties and weakened the in-depth profile modification of the weak gel. 展开更多
关键词 Weak gel shear fracture in-depth profile modification glass bead pack quartz sand pack
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河道淤泥制备免烧砖试验研究 被引量:7
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作者 俞毅 方丽春 +2 位作者 张凯 应晓猛 祝志雄 《新型建筑材料》 2021年第2期150-153,共4页
将河道淤泥替代石硝并外掺一定量的磷石膏制备免烧砖,研究了免烧砖的含水率、吸水率、密度、收缩率、软化系数、抗压强度、抗冻性等性能,分析河道淤泥与磷石膏掺量对免烧砖性能的影响。研究表明:河道淤泥掺量为18%时,免烧砖的各项性能... 将河道淤泥替代石硝并外掺一定量的磷石膏制备免烧砖,研究了免烧砖的含水率、吸水率、密度、收缩率、软化系数、抗压强度、抗冻性等性能,分析河道淤泥与磷石膏掺量对免烧砖性能的影响。研究表明:河道淤泥掺量为18%时,免烧砖的各项性能均有所提高,磷石膏的掺入会影响免烧砖的性能,但控制一定量后,可符合GB/T 21144—2007《混凝土实心砖》的要求。 展开更多
关键词 河道淤泥 磷石膏 免烧砖 性能研究
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鸭瘟病毒载体疫苗研究进展
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作者 封莹洁 孟鸽 +7 位作者 房立春 罗娟 尚佳静 于晓慧 蒋文明 刘华雷 范春艳 李阳 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期61-68,共8页
疫苗接种是控制疫病的有效方法一,其中病毒载体疫苗以其转染效率高、外源基因表达水平高等优点成为当前疫苗的重要研究方向。鸭瘟病毒基因非常适合作为插入和表达其他病原体的外源抗原基因,并且随着CRISPR/Cas9技术、细菌人工染色体技... 疫苗接种是控制疫病的有效方法一,其中病毒载体疫苗以其转染效率高、外源基因表达水平高等优点成为当前疫苗的重要研究方向。鸭瘟病毒基因非常适合作为插入和表达其他病原体的外源抗原基因,并且随着CRISPR/Cas9技术、细菌人工染色体技术、同源重组技术等基因编辑技术的发展,鸭瘟病毒作为最有前途的载体被广泛应用于传染病疫苗研发。经试验验证,基于重组鸭瘟病毒载体的禽细菌病疫苗以及禽流感、鸭病毒性肝炎等多种病毒病疫苗均具有较好的免疫效果和安全性。本文综述了鸭瘟病毒作为疫苗载体的特点、鸭瘟病毒的基因编辑技术和鸭瘟病毒载体疫苗应用研究进展情况,以期为进一步研发鸭瘟病毒载体疫苗提供理论基础,同时也为新发传染病预防提供新策略。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 病毒载体疫苗 基因编辑技术 疫苗研发
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鹅星状病毒与新型鸭呼肠孤病毒双重RT-PCR检测方法的建立及应用
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作者 张景辉 武景琦 +10 位作者 房立春 刘涛 吴家强 于可响 徐怀英 吕俊峰 艾武 郭慧君 邱建华 亓丽红 宋玲玲 《中国兽医科学》 CAS 2024年第6期749-756,共8页
根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×1... 根据鹅星状病毒(GAstV)ORF1b基因与鹅源新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC基因的保守序列设计特异性引物,建立GAstV与NDRV双重RT-PCR检测方法,该方法具有较高的特异性,在903 bp(GAstV)和226 bp(NDRV)可检测到特异性条带,最低灵敏度为1.0×10^(3)copies/μL。在鲁中、鲁西北及鲁南地区不同规模的养鹅场中随机采取320份样本,GAstV的阳性率为21.56%(69/320),NDRV的阳性率为3.44%(11/320),混合感染阳性率为2.81%(9/320),单一RT-PCR结果与双重RT-PCR方法一致。该方法的建立为快速诊断GAstV和NDRV提供了可靠的手段。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 鹅源新型鸭呼肠孤病毒 双重RT-PCR
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