应用CRISPR/Cas9技术构建Raji-Luc CD19 KO淋巴瘤细胞系

目的应用CRISPR/cas9技术构建敲除CD19的Raji-Luc淋巴瘤细胞,并对其免疫逃逸能力进行初步验证。方法构建PB-CRISPR-CD19小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)质粒,筛选最优的sgRNA序列,用pCAG-PBase转座酶、PB-CD19 sgRNA及PB-CRISPR-Cas9共同电转染Raji-Luc细胞,采用流式分选和极限稀释法筛选得到稳定敲除的单克隆细胞株。经过基因序列检测对敲除效果进行验证;酶标仪检测细胞系表面荧光素酶的表达情况;以实验室前期构建的CD19 CAR-T和CD38 CAR-T作为效应细胞,用荧光素酶化学发光法验证Raji-Luc CD19 KO细胞株的免疫逃逸能力。结果电转染制备的Raji-Luc CD19 KO细胞转染效率较高,筛选所得两组单克隆细胞敲除效率均达到99%以上,与原始Raji-Luc细胞的荧光素酶表达无显著差异,且不能激活CD19 CAR-T细胞对其进行杀伤。结论成功构建了Raji-Luc CD19 KO淋巴瘤细胞系。

基于触媒理论的人、生态、工业共生模式研究--以天津市海河柳林片区天津钢厂和天津市中板厂为例

天津钢厂和天津市中板厂位于中心城区与滨海新区之间,交通便利,历史悠久,可有效被激活并带动周边发展。在明确天津市工业遗产保护历程及总体思路的基础上,根据所选场地的触媒特性,构建基于触媒理论的工业遗产研究框架,通过引导触媒效应的发挥,使工业遗产与生态和人群共生,最终达到自身乃至片区可持续发展的目的。围绕工业遗产更新保护的重要方向--人、生态、工业共生,基于触媒理论激发链条式的区块反应,探索触媒理论应用新模式。

增强深层话题语义的对话引导模型

目标导向式开放域对话的核心是根据对话历史与当前话题进行话题序列规划与回复检索,使得对话达到目标话题,话题特征的提取与建模方式影响话题预测的准确性,从而影响回复检索性能。目前常见的方法是引入外部知识来增强语义,但这种方法依赖外部知识质量。提出一种基于图卷积与子图注意力的话题语义增强的对话引导模型(KWGE),该模型首先构建关键词无向图,利用图卷积神经网络对关键词编码以增强话题语义,同时编码对话历史特征,使用对话特征与话题特征做预测与检索任务,每次预测任务后计算与当前话题相关话题子图的注意力权重来更新子图节点表示,用于获取更近于目标的话题。通过对两个真实闲聊数据集进行的广泛实验,表明该模型可以构建话题连贯的对话序列,并以较高的目标达成率实现对话目标。

数字化和信息化背景下的大型工程档案管理策略研究

在档案数字化和信息化管理背景下,如何做好大型工程项目档案管理是值得研究的重要课题。鉴于档案数字化管理的重要性及优势,分析档案数字化管理现状,对实现大型工程档案数字化管理的要求以及保证档案安全的相关措施进行探讨,以期为工程档案数字化管理的发展提供参考。

乡村公共空间网络结构分析--以山西省太原市西怀远村为例

乡村公共空间具有功能复合性和社会联系性,是乡村建设中关注的重点。以往学者对于乡村公共空间的研究多集中在单个空间,近年来开始对公共空间进行整体性研究,有利于乡村公共空间的系统性分析和设计。以财政部农村综合性改革试点试验村--山西省太原市西怀远村为研究对象,运用社会网络分析法,构建西怀远村公共空间网络,从整体网络角度分析乡村公共空间结构特征以及公共空间之间的关系,为指导西怀远公共空间优化提供依据,也作为设计前期分析与设计方向研制的探索。

基于网络点评数据的天津北宁公园文化感知分析

【目的】文化感知已经成为公园文化景观的重要价值构成。游客对公园的文化感知状态直接影响他们对公园的印象和体验。探究游客的文化感知状态对于提升公园形象和传达场所精神具有重要的意义。【方法】以天津北宁公园为研究区域,通过抓取国内4个主要旅游社交类网络平台的点评数据,构建公园评论数据库,对评论文本进行多层级词频分析、情感倾向及公园文化感知程度的重要性—表现性(importance-performance,IPA)分析,有助于自下而上地解读游客的景观认知。【结果】北宁公园使用人群主要为本地游客,公园景观已经成为本地游客集体记忆的一部分。本地游客重视儿时记忆,对于公园景观风貌和公园的年代感有较强的认同度和关注度,但是对于公园涉及的历史人物、事件及其与城市的关联,缺少深入了解。游客对于新建的园林建筑和公园的文化活动具有一定的认可度,但是关注程度较低。【结论】北宁公园是天津城市历史文化景观记忆的重要组成部分。居民与游客对公园的历史文化景点有高关注和认可,但对后期改建和更新景观的关注度较低,可能引发负面情绪。保留历史景点、强调景点风貌和历史性,以及推广相关传统活动可以增强公园的历史文化形象,吸引更多游客的关注和认同。本研究证实了网络点评数据在文化感知方面的可用性,为后续城市公园文化景观更新与保护提供了依据。

基于多层级水环境适应性的绿色城市设计探索--以杭州湘湖地区为例

在探讨城市滨湖地区水文特征的基础上,以水环境分析为脉络,从多层级视角建构水环境分析框架,并以此为基础提出相应的城市设计适应性策略.强调从宏观山水流域、中观水网格局、微观水体优化3个层面对水环境进行分析,借助GIS、DEM、MIKE 21、物理环境模拟和三维建模分析等数字化方法的应用辅助城市设计,进而对滨湖地区的城市空间布局提供支撑.以杭州湘湖地区绿色城市设计为例,阐述了水环境适应性导向绿色城市设计的实际应用场景,旨在探索以水环境量化模拟为脉络,从定量分析视角出发寻求绿色城市设计的水环境适应性新思路.

生活圈视角下的乡村健康设施评估——以太原市清徐县为例

现有的健康设施评估研究多从分布是否合理或居民是否可达的单一视角开展,所用研究数据的精确度、时效性均不足,评估结果容易产生偏差甚至误导。基于此,选取时效性较高的POI数据和OSM开放地图导出的路网数据,分别对市域级、县域级和街道级医疗设施从时间和空间两方面进行分析,以对清徐县医疗设施展开综合评估。

平原型乡村街巷空间特征与行为特征关联性研究--以西怀远村为例

我国乡村地区城镇化发展迅猛,平原型乡村凭借地势平坦、交通便利等优势快速发展,但出现乡村活力下降等问题。街巷空间作为村民社会活动的载体,是促进社会交往、恢复乡村活力的重要途径,而街巷空间中的多元人群是激发乡村社会活力的核心要素。研究以西怀远村为例,采用核密度分析工具获取人群的分布特征,运用SPSS统计分析法总结不同年龄结构与街巷空间环境要素之间的相关性,为提升平原型乡村街巷活力提供参考。

水体与建筑空间的关系——以伊斯兰园林为例

伊斯兰园林是世界三大园林体系之一,具有悠久的历史,人们将其称为天堂花园。其中,水体作为建筑外部空间中最重要的元素之一,发挥着重要的作用。本文从自然、人文、技术层面分析伊斯兰园林中水体的地域化特征。在此基础上,以多个伊斯兰园林庭院为例,研究点、线、面三种形态水体与建筑空间之间的关系,解读水体与建筑空间的不同组合方式与空间塑造的联系,以期学习借鉴伊斯兰园林水体与建筑空间的处理手法,打造出具有地方特色的建筑空间。

甘肃白银冰雹气候特征的南北差异分析

为分析甘肃白银冰雹气候特征的南北差异,利用白银市1978-2020年4个气象观测站和59个乡镇点调查资料,采用线性趋势、变差系数、小波分析、Mann-Kendll法以及相关分析等统计方法对白银市冰雹时空分布及影响因素进行分析。结果表明:冰雹日数空间分布从南向北呈递减趋势,形成“南多北少”的特点。同时,受地形影响,迎风坡和背风坡效应显著,在同一县区或不同县区出现多个相对少发区和多发区,极少区出现在北部地区呈“钳形状”低值区,高发区出现在南部地区最南端;日变化高发时段为14-18时,月变化集中于4-10月,其中7月最多,季变化夏季最多;就冰雹日数的稳定性而言,年变化较季节稳定,夏季较春、秋季稳定,南部较北部地区稳定;存在10~15 a年代际周期,北部另有准5 a短周期,南部存在突变特征,突变时间2006年;近43 a冰雹日数年际变化呈减少趋势且北部较南部显著,年代际变化21世纪10、20年代较20世纪80、90年代明显减少。

单侧内耳Mondini畸形并发脑脊液耳漏1例报告及文献复习

目的:探讨单侧内耳Mondini畸形并发脑脊液耳漏患者的发病机制、临床表现、诊断和手术方法,提高对其临床特征的认识。方法:收集1例单侧内耳Mondini畸形并发脑脊液耳漏患者的临床资料,结合国内外相关文献,分析其临床特征、影像学表现、诊断和手术方法。结果:患者因“左侧鼻腔流水、头痛20年,加重1个月”就诊。查体见左耳鼓膜内陷、完整,左耳听力下降。鼻内镜下,颅内压增加时左侧咽鼓管咽口有脑脊液流出。结合患者相关检查结果和临床表现初步考虑左耳Mondini畸形并脑脊液耳漏。行左脑脊液耳漏修补术,患者术后听力良好,无鼻腔流液和头痛不适。随访1年,患者未复发脑膜炎。结论:反复发作不明原因的脑膜炎患者应考虑先天性内耳畸形的可能。颞骨薄层CT与MRI检查是确诊的主要手段,鼓室探查修补术是填补漏口的有效方法,手术是主要的治疗方法。

光伏水泵系统中Z源逆变器的应用研究

针对传统光伏水泵系统中逆变器存在桥臂易直通、开关管和驱动电路数量多、电力电子器件易受电磁干扰损坏等问题,采用Z源逆变器替代传统的Boost变换器。文中具体分别搭建基于Boost变换器的传统光伏水泵系统和基于Z源逆变器的光伏水泵系统的仿真模型,进一步对比两种系统的升压能力、调速性能和工作效率。结果表明,Z源逆变器直流侧最大超调电压减少了150 V,输出转矩稳态误差和波动明显减小,运行效率提高了10%。基于Z源逆变器光伏水泵系统比传统光伏水泵系统具有更好的性能。

基于多源数据的城市公园时空活力与影响因素测度——以南京为例

公园绿地是城市中重要的公共活动场所,其使用会受到公园自身及其所处城市空间等多种因素的影响。利用手机大数据,通过对城市个体活动轨迹的识别,提取人们到访城市公园的交通出行方式,从而探寻公园出行的时空差异性。同时,通过对网络开源数据的获取,将公园的城市区位、周边环境、业态布局、自身条件和交通可达性等特征进行量化处理,并构建一组线性回归模型来确定影响公园使用的相关因素。结果表明:时间上,工作日和休息日的公园使用特征有较大差异;空间上,城市建成环境较完善地区的城市公园使用频率较高。通过回归模型,发现城市区位对公园使用的影响最大,而公园周边的交通设施并不会对公园使用产生显著影响。研究结果将有助于政策制定者优化城市公园的规划设计与维护管理。

GCM预测模式下黑河流域潜在蒸散发的演变分析

以Penman-Monteith模型为基准,通过参数修正从7个温度类模型中优选出适用于黑河流域潜在蒸散发(PET)估算的最优模型,再根据CMIP5中CSIRO-Mk3.6.0气候模式输出的研究区未来气候情景数据,对黑河流域历史时期(1961-2015年)和未来2021-2050年(T1)、2051-2080年(T2)2个时段的PET值进行估算,并从时间和空间尺度2个方面分析其变化特征.结果表明:1)研究区气象数据资料缺乏时(例如仅有气温数据),参数修正后的Hargreaves-Samani模型可以作为Penman-Monteith的替代模型;2)黑河流域历史时期多年平均PET为1102 mm,空间上由上游向下游逐渐增加,与多年平均气温的空间分布具有较强的一致性;3)流域未来多年平均PET空间分布特征基本不变.受流域未来最高、最低气温增加的影响,流域多年平均PET在T1和T2时段较历史时期分别增加15%和20%.不同空间位置处,PET变化存在差异:T1时段中游酒泉站较历史时期有所下降,而其余站点则有所上升,T2时段所有站点较历史时期则均有上升;且未来2个时段流域上游PET增幅均大于流域下游,这种空间差异性与流域未来最高、最低气温变幅的空间差异性较为一致.

shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞构建及其功能的初步鉴定

目的:探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能。方法:构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子,利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞,制备CAR-T细胞。实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组(shR-NC-CD38 CAR-T细胞)。采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平,计算CAR-T细胞培养0~14 d的增殖倍数,CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-luc共培养时的增殖情况,荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比(1∶1、1∶2、1∶4、1∶8)时对Raji-luc和RPMI-8226-luc细胞的杀伤效率,ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-luc细胞时上清液中IFN-γ水平,FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平。结果:shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-CD38 CAR和shRNA2-CD38 CAR逆转录病毒载体的滴度均为1×107拷贝/mL,转导T细胞后,shR-NC-CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T细胞的转导效率(CAR的阳性率)分别为60.3%、67.0%和57.4%。与对照组比较,shRNA2-CD38 CAR-T组细胞中CD38 m RNA的表达水平显著降低(P<0.01),显示shRNA-CD38 CAR-T细胞构建成功。shRNA2-CD38 CAR-T组细胞在体外培养增殖能力更强(P<0.05),对2种CD38阳性的肿瘤细胞的杀伤效率更高(均P<0.05)、IFN-γ释放水平更高(均P<0.05)、细胞表面PD-1的表达水平更低(P<0.05)。结论:成功构建一种shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞,其抗癌功能表现出明显的优势。

shRNA靶向抑制PTPN2增强抗CD38 CAR-T细胞抗肿瘤活性

目的构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞并对其体外抗肿瘤活性进行初步研究。方法构建shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T的CAR分子,包装为逆病毒载体,转导人原代T细胞,制备CAR-T细胞。将2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞作为实验组,未转导的T细胞和CD38 CAR-T细胞作为对照组。采用RT-QPCR法检测CART细胞PTPN2 mRNA抑制效率;计算CAR-T细胞体外培养0~12 d的生长倍数;采用CFSE法检测CAR-T细胞与Raji-luc(人Burkitt淋巴瘤)或RPMI-GFP(人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞)细胞共培养时的增殖情况;采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面激活标志物CD69的表达水平;采用流式细胞术和荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比(1∶1、1∶2、1∶4)时对Raji-luc、RPMI-GFP细胞的杀伤效率;采用ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-GFP后上清中干扰素γ(IFN-γ)水平;采用流式细胞术检测CAR-T细胞表面耗竭性T细胞生物标志PD-1的表达水平。结果CD38 CAR、PTPN2-shRNA1 CD38 CAR和PTPN2-shRNA2 CD38 CAR逆病毒载体的滴度均大于1×107 copies/ml,转导T细胞后,CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T的转导效率(CAR阳性率)分别为45.4%、60.6%、48.6%。与CD38 CAR-T组相比,2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞PTPN2 mRNA的表达量显著降低(P<0.01),在2种CD38阳性的肿瘤细胞的刺激下,3组CART细胞的CD69表达明显上升,增殖加快,CAR-T细胞构建成功。2组PTPN2-shRNA CD38 CAR-T细胞杀伤效率更高(P均<0.01);γ干扰素的释放水平更高(P均<0.01);表面PD-1的表达水平更低(P<0.01)。结论本研究成功构建一种shRNA靶向抑制PTPN2的抗CD38 CAR-T细胞,该细胞能够有效地杀伤CD38阳性的多发性骨髓瘤细胞,且与抗CD38 CAR-T细胞相比,抗肿瘤能力更强,改善了CAR-T细胞的耗竭情况。

交往与空间理论下近郊型乡村公共空间优化探析--以山西省清徐县西怀远村为例

随着城镇化不断推进,近郊型乡村居民的生活方式呈现“亦城亦乡”的特征,同时也存在公共生活不断式微、社会活力不断衰弱的现状。乡村公共空间作为村民社会交往的主要载体,其空间优化是促进社会交往、恢复乡村活力的重要途径。借用交往与空间理论,以西怀远村为研究案例,从更加人性化的角度出发,对公共生活和公共空间进行分析,并以人的行为特征为依据从公共空间的愉悦性、防护性、舒适性3个维度提出针对性的优化建议,以期为近郊型乡村空间活力的提升提供参考。

大型水利工程招标投标阶段投资控制措施

投资控制贯穿于工程项目建设的全过程,其主要目的是在不同的阶段通过合理控制有效实现项目投资的最大利益.在整个工程建设过程中,招标投标阶段是影响工程投资控制的关键阶段.梳理了当前大型水利工程项目招标投标阶段投资控制存在的问题,对提高招标阶段设计成果、组织对招标阶段设计成果进行评审及提高评标决标质量等投资控制措施进行了分析,供同行业参考.

干扰TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞的构建及其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响

目的构建干扰胸腺细胞选择相关高迁移率群体盒(TOX)基因联合抗CD38 CAR-T细胞,观察其对血液肿瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法采集健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),提取原代T淋巴细胞。构建以shRNA技术靶向抑制TOX的抗CD38 CAR分子,分别命名为TOX-shRNA1-CD38 CAR和TOX-shRNA2-CD38 CAR,另设计一条不针对任何靶点的无意义RNA序列作为对照,命名为CD38 CAR分子。将分子酶切并连接逆病毒载体包装质粒pMFG,获得pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYC-CD38 CAR。将人原代T淋巴细胞分为CD38 TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组、CAR-T组,分别转导pMFG-TOX-shRNA1-MYC-CD38 CAR、pMFG-TOX-shRNA2-MYC-CD38 CAR和pMFG-MYCCD38 CAR质粒,获得CD38 CAR-T细胞、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T细胞和TOX-shRNA2-CD38 CAR-T细胞。采用RT-QPCR法检测三组细胞中TOX mRNA的相对表达量;记录三组细胞0~10 d体外培养生长倍数,观察细胞增殖能力。选取CD38高表达的人多发性骨髓瘤荧光素酶标记细胞RPMI-Luc、人Burkitt’s淋巴瘤荧光素酶标记细胞Raji-Luc作为靶细胞,与三组CAR-T细胞分别共培养48 h;另取三组CAR-T细胞单独培养作为对照,不加肿瘤细胞。采用流式细胞术检测三组CAR-T细胞表面CD69的表达效率,评价CAR-T细胞活化情况;对三组细胞进行CFSE染色,采用流式细胞术观察CAR-T细胞增殖能力;荧光素酶化学发光法观察CAR-T细胞在不同效靶比(1∶2、1∶4、1∶8)时对肿瘤细胞的杀伤效率;ELISA法检测三组CAR-T细胞上清中IFN-γ释放量;流式细胞术检测三组细胞表面PD-1表达量,评估CAR-T细胞的耗竭程度。结果 CD38 CAR-T组、TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组、TOXshRNA2-CD38 CAR-T组的转导效率分别为41.51%、41.28%、44.84%,均超过40%。与CD38 CAR-T组比较,TOXshRNA2-CD38 CAR-T组TOX mRNA表达水平降低(P <0.05),TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组无明显变化(P>0.05)。三组CAR-T细胞体外培养0~10 d均稳定增殖,三组间生长倍数比较差异无统计学意义(P <0.05)。三组与肿瘤细胞共培养后,CD69表达效率均升高(P均<0.01)。与单独培养的CAR-T细胞相比,三组CAR-T细胞与Raji-Luc、RPMI-Luc细胞共培养后FITC信号左移,增殖加快,三组增殖能力比较无统计学差异(P> 0.05)。与CD38 CAR-T组相比,TOX-shRNA2-CD38 CAR-T组在不同效靶比时对肿瘤细胞的杀伤效率均提高,γ干扰素释放水平升高,细胞表面PD-1表达水平降低(P <0.05或<0.01),而TOX-shRNA1-CD38 CAR-T组与CD38 CAR-T组比较,肿瘤细胞的杀伤效率、γ干扰素释放水平、细胞表面PD-1表达水平均无统计学差异(P均>0.05)。结论成功构建了靶向抑制TOX基因联合抗CD38 CAR-T细胞,TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞能够有效抑制TOX表达;经肿瘤细胞激活后,其体外增殖活性及抗肿瘤能力显著增强,且TOX-shRNA-CD38 CAR-T细胞耗竭也得到改善。