桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶原基因的初步研究

从桂北五步蛇毒腺中抽提蛇毒总 RNA,采用一步法 (RT- PCR和 PCR在同一试管内进行 )扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因 ,并进行电泳检测 ,可见 3条特异的 DNA条带 ,分别约为 1.5 Kb、 1.3Kb和 80 0 bp,利用平端连接的方法将其中的 80 0 bp PCR产物克隆至 p GEM- T Easy载体 ,挑选白色菌落 ,用酶切和 PCR法对其进行鉴定。

桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析

目的 :克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因 ,并对其进行序列分析。方法 :从桂北五步蛇毒腺中抽提总 RNA,采用一步法 (RT- PCR和 PCR在同一管内进行 )扩增出纤溶酶金属蛋白酶基因 ,利用平端连接的方法将 PCR扩增产物克隆至p GEM- T Easy载体 ,挑选白色菌落 ,用酶切和 PCR法对其进行鉴定 ,直接利用纯化 PCR产物进行测序或提取阳性菌落进行测序。结果 :RT- PCR和 PCR扩增得到一 6 0 0 bp产物 ,并被克隆及测序。结论 :该实验产物和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较 ,有 90 .6 %的同源性 ,这为进一步研究该产物的表达 ,以及表达产物的活性提供条件。

抗乳腺癌单抗CDI315B可变区基因的序列分析

目的 :克隆抗乳腺癌 CDI315 B单抗可变区基因 ,并对其进行序列分析。方法 :利用前导肽序列设计引物 ,采用 RT-PCR技术从分泌抗人乳腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 CDI315 B分离克隆了抗体轻重链可变区基因 ,用 Sanger双脱氧末端终止法测定扩增的 CDI315 B单抗 VK 和 VH 基因的序列 ,对其进行序列分析。结果 :和国际标准的小鼠 Kabat分类体系进行对比分析 ,CDI315 B单抗的 VK属于第 4或第 5组的第 6亚组 (VI) ;CDI315 B单抗的 VH 则属于第 2族 (VH2 )。结论 :抗乳腺癌 CDI315 B单抗可变区基因的克隆及序列分析为构建人鼠嵌合轻链和人鼠嵌合重链打下基础。