硝酸银诱导的大豆子叶中大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂的研究

采用二维电泳技术对硝酸银诱导的大豆子叶微粒体膜蛋白进行分离,利用四极杆-飞行时间串联质谱,对仅存在于诱导样品而不存在于对照样品中的蛋白质点进行氨基酸序列测定和分析,以期研究硝酸银处理对大豆子叶微粒体蛋白质的影响。结果显示:硝酸银可以诱导大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(SKTI)的产生,在诱导处理的子叶中大量存在其成熟形式,也存在其5 kDa小亚基,小亚基含有“GIGTIISSPER”和“FIAEGNPLR”氨基酸序列。该研究结果为SKTI的深入研究提供了实践依据,并为其分离纯化提供了简便途径,从而有利于对其更多性质的进一步研究。

二维电泳技术在大豆子叶微粒体膜结合蛋白研究中的应用

以硝酸银诱导的大豆子叶为材料,初步探讨了二维电泳技术在分离大豆子叶微粒体膜结合蛋白中的应用,研究了重新水化溶液的组成、加样量、等电聚焦的total voltage hours以及不同pH梯度范围IPG(固相pH梯度)胶条等因素对膜蛋白的溶解和二维电泳图像的影响。结果表明对于70×3×0.5mmIPG胶条,能够溶解较多蛋白质和获得高质量二维电泳图像的优化条件为:由尿素、硫脲、三丁基膦和C7BZO组成的重新水化溶液(TUC7T2)、80μg的加样量和20000vhr的totalvoltage hour。在此优化条件下,与宽范围pH梯度IPG胶条相比,使用窄范围pH梯度胶条可以观察到更多的和质量更好的蛋白质点,结果发现至少有13个点只存在于硝酸银诱导的样品中,而不存在于对照中,其代表的蛋白质的等电点在4.0-8.0。