lux基因发光乳球菌构建方法的研究

研究了构建lux基因发光乳球菌的方法。研究结果表明,利用设计和合成的低聚核苷酸引物及带有luxCDABE基因簇的质粒pSB377为模板,用PCR技术可以扩增出luxAB和luxCDABE基因片断。选作lux基因的媒介物质粒pMG36e,含有一个在革兰氏阴性、阳性菌中都能启动的复制起始点,与乳球菌启动子P32之下的多克隆位点连接,它能使lux基因成功地插入载体上,并在乳球菌中得以表达。在适宜的培养和电击条件下可以将重组质粒pMG36e-luxAB和pMG36e-luxCDABE转入乳球菌中,使普通的乳球菌变成带lux基因的发光乳球菌。lux基因发光乳球菌的理想的培养基是GMl7而不是M17。在液体培养基中培养时大质粒pMG36e-luxCDABE在无选择压力时其遗传特性不稳定,而小质粒pMG36e-luxAB具有稳定的遗传特性。