基于网络药理学探讨益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制

目的:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的分子机制。方法:通过TCMSP数据库获取益气养阴化浊通络方相关药物靶点,GeneCard、OMIM及PharmGkb数据库获取糖尿病肾病相关靶点。Venny R软件获取益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的潜在靶点,Cytoscape 3.8.0软件构建药物-有效成分-靶点-疾病网络图。对潜在靶点进行PPI互作网络分析、GO功能及KEGG通路富集分析。结果:共获取益气养阴化浊通络方有效成分66个,有效靶点254个,糖尿病肾病相关靶点4755个,取交集后获取潜在靶点179个。PPI分析获取核心靶点MAPK3、TP53、MAPK1、HSP90AA1、JUN、AKT1、RELA、MAPK14等;GO功能富集分析体现在对氧化应激的反应、细胞对化学压力的反应、对外来刺激的反应、对活性氧的反应等;细胞组分多在膜筏、膜微域、转录调节因子、复合囊泡腔等;分子功能多在DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶II特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活性等;KEGG通路富集分析多在糖尿病并发症中的脂质与动脉粥样硬化、年龄-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、前列腺癌、乙肝、人巨细胞病毒感染、化学致癌-受体激活及流体切应力与动脉粥样硬化等通路。结论:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制,为后续相关研究提供理论依据和数据支撑。

芍药内酯苷对人卵巢癌多药耐药的逆转作用

目的研究芍药内酯苷(albiflorin,AL)逆转人卵巢癌多药耐药的作用和潜在机制。方法采用CCK-8试剂盒检测AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用,采用流式细胞术检测AL对P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)功能的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测AL对SKOV3/DDP细胞中MYC、WWP1和ABCB1/P-gp的影响。采用RNA干扰技术构建MYC敲低的SKOV3/DDP细胞株,观察其耐药性、P-gp功能及相关基因和蛋白表达变化。结果AL对SKOV3/DDP细胞有耐药逆转作用,对P-gp功能抑制作用具有浓度依赖性。AL 25、50、100μmol·L^(-1)对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均逐渐增强。MYC抑制剂MYCi975对ABCB1/P-gp、MYC和WWP1的抑制作用均强于或相当于AL 100μmol·L^(-1)组。SKOV3/DDP细胞敲低MYC后,细胞耐药性、P-gp功能以及相关基因和蛋白表达均受到抑制。结论AL对SKOV3/DDP细胞的耐药逆转作用可能与抑制P-gp功能和ABCB1/P-gp、MYC、WWP1表达有关,为AL作为耐药逆转剂用于卵巢癌的临床治疗提供了实验基础。

Sema3A在风湿免疫性疾病中的研究进展

风湿免疫性疾病是机体免疫系统对自身抗原成分发生异常免疫反应,导致自身组织器官损伤或功能异常的一类疾病,其发病机制尚未完全阐明,但发病率和患病率在逐年升高。信号素(Sema)家族蛋白被称为轴突导向分子,在多个生物过程中发挥重要作用,其分泌成员Sema3A作为负向调节因子参与调控风湿免疫性疾病免疫反应。就Sema3A的结构、受体、功能及Sema3A在风湿免疫性疾病中的作用进行综述,为风湿免疫性疾病的新型靶向治疗药物提供依据。

温阳化浊通络方对硬皮病小鼠肺微血管损伤的影响

目的研究温阳化浊通络方基于线粒体自噬对硬皮病小鼠肺微血管损伤的影响。方法将50只小鼠随机分为空白对照组(0.9%NaCl,灌胃)、对照组(0.9%NaCl,灌胃)、模型组(0.9%NaCl,灌胃)、温阳化浊通络方组(47 mg·kg^(-1)·d^(-1)温阳化浊通络方,灌胃)、阳性对照组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)KC7F2溶解于磷酸盐缓冲液,腹腔注射),持续给药4周。以免疫组化法检测肺组织线粒体外膜易位酶20(TOMM20)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、B细胞淋巴瘤-2/腺病毒E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)、PTEN诱导性肌酶蛋白1(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达水平;以蛋白质印迹(Western blot,WB)法检测肺组织微血管内皮细胞线粒体自噬相关蛋白TOMM20、LC3B及HIF-1α/BNIP3/PINK1/Parkin通路蛋白表达水平。结果对照组、模型组、温阳化浊通络方组和阳性对照组小鼠肺组织微血管内皮细胞HIF-1α相对含量分别为0.17±0.02、0.98±0.01、0.66±0.03和0.48±0.01,BNIP3相对含量分别为0.40±0.02、0.74±0.01、0.56±0.01和0.60±0.02,PINK1相对含量分别为0.26±0.04、0.88±0.01、0.65±0.02和0.67±0.02,Parkin相对含量为分别为0.33±0.02、0.89±0.01、0.65±0.02和0.77±0.02,TOMM20相对含量分别为1.10±0.02、0.58±0.01、1.02±0.01和0.98±0.03,LC3B-Ⅰ/LC3B-Ⅱ相对含量分别为0.24±0.01、0.80±0.01、0.53±0.02和0.70±0.02。模型组中HIF-1α、BNIP3、PINK1、Parkin、LC3B-Ⅰ/LC3B-Ⅱ蛋白含量高于对照组,温阳化浊通络方可有效降低其含量;模型组中TOMM20含量低于对照组,温阳化浊通络方可有效提高其含量。结论温阳化浊通络方可能通过增加TOMM20和抑制LC3B及HIF-1α/BNIP3/PINK1/Parkin信号通路的蛋白表达,进而抑制线粒体自噬,改善SSc肺微血管损伤。

基于STAT3信号通路调节Th17细胞增殖探讨温阳化浊通络方治疗系统性硬化病机制

目的:研究温阳化浊通络方对Th17细胞增殖的影响,探讨其对STAT3信号通路的调控作用,明确该方治疗系统性硬化病(SSc)的免疫调控机制。方法:收集SSc患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,人Th17分选试剂盒分选Th17细胞,同时制备温阳化浊通络方含药血清。荧光染料CFSE标记Th17细胞后,流式细胞术检测含药血清对Th17细胞增殖的影响。采用RT-qPCR和细胞免疫荧光技术检测含药血清对Th17细胞中JAK2、STAT3/p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,各剂量含药血清组可剂量依赖性地抑制Th17细胞的增殖(P<0.01);阳性对照组对Th17细胞的增殖抑制作用介于含药血清低剂量和高剂量组之间(P<0.01,P<0.05);各含药血清组可剂量依赖性地降低JAK2和STAT3 mRNA和蛋白的表达,并可剂量依赖性地降低p-STAT3的表达(P<0.05,P<0.01);阳性对照组抑制JAK2和STAT3/p-STAT3表达的作用强于各含药血清组(P<0.01)。结论:温阳化浊通络方可抑制Th17细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

芍药内酯苷调控NF-κB抑制卵巢癌转移的作用研究

目的:研究芍药内酯苷(albiflorin,AL)抑制人卵巢癌转移的作用及其潜在机制。方法:卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞分为5组:AL 25,50,100μmol·L^(-1)组、18μmol·L^(-1) NF-κB抑制剂SN50组和空白对照组。采用划痕试验检测AL对迁移的影响,采用流式细胞术检测AL对凋亡的影响,采用RT-qPCR和western blot检测AL对CDH1、CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。结果:AL各组均可明显抑制SKOV3/DDP细胞迁移,增加细胞凋亡,具有浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。随着AL浓度增加,其对CDH2和NF-κB的抑制作用,及其对CDH1的诱导作用均逐渐增强(P<0.05)。AL 100μmol·L^(-1)组抑制迁移、诱导凋亡和抑制CDH2和NF-κB mRNA和蛋白表达的作用与SN50组相当(P>0.05),诱导CDH1 mRNA作用弱于SN50组(P<0.05),但诱导CDH1蛋白表达的作用与SN50组相当(P>0.05)。结论:AL抑制SKOV3/DDP迁移作用可能与其诱导凋亡和CDH1表达,抑制CDH2和NF-κB表达有关。

温阳化浊通络方调控DNA甲基转移酶对硬皮病患者Treg细胞增殖的影响

目的:研究温阳化浊通络方(WYHZTLF)对DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)及叉头翼状螺旋转录因子3(forkhead box protein 3,FOXP3)表达的影响,探讨其调控硬皮病患者调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)细胞增殖的作用机制。方法:用Wistar雌性大鼠制备温阳化浊通络方含药血清。收集硬皮病患者外周血,分选Treg细胞,用含药血清处理后,通过CCK-8法检测含药血清对Treg细胞增殖的影响,免疫荧光法检测FOXP3蛋白表达,qRT-PCR法和Western blot法检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA及蛋白表达。结果:与空白血清组相比,低、中、高剂量含药血清组均可促进Treg细胞的增殖,中、高剂量组促进作用更加显著(P<0.05,P<0.01);低、中、高剂量含药血清组均可促进FOXP3蛋白表达(P<0.01);中、高剂量含药血清组明显抑制DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA表达(P<0.05);高剂量含药血清组显著抑制DNMT1蛋白表达水平(P<0.05),低、中、高剂量组显著抑制DNMT3A和DNMT3B蛋白表达(P<0.01,P<0.01)。结论:温阳化浊通络方促进硬皮病患者Treg细胞增殖可能与抑制DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达从而促进FOXP3表达有关。

温阳化浊通络方抑制FOXP3甲基化促进Treg增殖治疗系统性硬化病的作用机制

目的:研究温阳化浊通络方对FOXP3甲基化的影响,探讨其调控Treg细胞增殖治疗系统性硬化病(SSc)的作用机制。方法:收集SSc患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,用试剂盒分选Treg细胞,同时制备温阳化浊通络方含药血清。含药血清处理Treg细胞后,分别采用CCK-8检测Treg细胞增殖,qRTPCR检测FOXP3和IL-10 mRNA表达,Western blot检测FOXP3蛋白表达,ELISA法检测IL-10水平,甲基化特异性PCR检测FOXP3基因启动子区和TSDR区甲基化水平。结果:与空白组比较,温阳化浊通络方低、中、高剂量组显著促进Treg细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),促进IL-10 mRNA和FOXP3蛋白表达(P<0.05,P<0.01);温阳化浊通络方高剂量组显著促进FOXP3 mRNA表达(P<0.01),抑制FOXP3 TSDR区甲基化水平(P<0.05);温阳化浊通络方中、高剂量组显著增加IL-10水平(P<0.05,P<0.01)。结论:温阳化浊通络方可促进Treg细胞的增殖,其机制可能与抑制FOXP3甲基化、促进FOXP3表达有关。