一株基因Ⅲ型禽呼肠孤病毒变异株的分离及其灭活疫苗免疫原性初步评价

为了解禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)变异株在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,试验采集黑龙江省某企业送检的病鸡关节组织进行病毒分离,通过RT-PCR、序列分析及常见禽类外源病毒检测鉴定,进一步通过对体外复制能力、致病性、血清交叉中和能力及灭活疫苗免疫抗体水平检测,分析其致病性、抗原性和免疫原性。结果显示:成功从病鸡关节组织中分离到1株ARV,命名为ARV-HLJ21-1690401,该分离株位于基因Ⅲ型分支,与基因Ⅲ型参考株ISR5233和42563-4-2005遗传距离较近,氨基酸序列相似性为83.4%和81.7%,而与其他基因型分离株遗传距离较远;该分离株在LMH细胞上增殖良好,对鸡胚和SPF鸡均具有明显的致病性,可引起接种鸡胚90%死亡,接种6周龄SPF鸡可引起100%发病;该分离株具有良好的免疫原性,其制备的灭活疫苗免疫SPF鸡可诱导产生较好的抗体水平。综上所述,研究成功分离到一株具有致病性和良好免疫原性的基因Ⅲ型ARV变异株,为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要理论依据。

我国部分地区A2dB1型传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定及序列分析

为持续了解传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant infectious bursal disease virus,nVarIBDV)在我国流行情况,研究收集2021—2022年6个主要养禽地区疑似传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)鸡病料,采用RT-PCR进行检测,并对11株IBDV代表毒株的基因组双节段代表区段VP2-HVR和VP1-B-marker进行基因测序及序列分析。结果显示:所检测病料的IBDV阳性率为20.65%(19/92),其中11株IBDV代表毒株均为A2dB1型nVarIBDV。研究表明,nVarIBDV在我国主要养禽地区仍持续流行,而且出现了值得注意的新的突变位点,有必要进行持续的IBDV流行病学监测。

鸡pro-IL-1β表达、多克隆抗体制备与初步应用

为研究禽类疫病病原触发炎症的分子机制,试验克隆和分析鸡源白细胞介素-1β前体(Interleukin-1β precursors,pro-IL-1β)基因,原核表达和纯化pro-IL-1β蛋白,用纯化的pro-IL-1β蛋白免疫小鼠制备pro-IL-1β多克隆抗体,对该抗体进行ELISA效价检测和鉴定,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验和Western blot试验中的应用效果。结果显示:重组蛋白pro-IL-1β成功表达,分子量约37 ku,能与His标签抗体发生特异性结合反应;获得了ELISA效价高于1∶32 000的鼠抗pro-IL-1β多克隆抗体,该抗体可通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到pro-IL-1β真核表达蛋白,也可通过Western blot试验检测到pro-IL-1β原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可通过Western blot和IFA检测到传染性法氏囊病病毒(IBDV)诱发的巨噬细胞HD11内源性pro-IL-1β蛋白的表达。研究表明,试验成功制备鸡pro-IL-1β多克隆抗体,为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。

鸡NLRP3蛋白表达、多克隆抗体制备与初步应用

为探究禽病病原触发炎症的分子机制,通过克隆和分析鸡源NLRP3基因,原核表达和纯化了NLRP3蛋白,随后用纯化的NLRP3蛋白免疫小鼠制备了NLRP3多克隆抗体,对该抗体进行了ELISA效价检测,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot试验中的应用效果。结果显示:成功表达重组蛋白NLRP3,其相对分子质量约87 kDa,能与His标签抗体发生特异性结合反应;成功制备鸡NLRP3蛋白多克隆抗体,其ELISA效价高达1:32 000;Western blot和IFA检测中,NLRP3多克隆抗体可与NLRP3原核表达蛋白和真核表达蛋白发生特异性反应,还可检测到由IBDV触发的以及LPS刺激产生的巨噬细胞HD11内源性NLRP3蛋白的上调表达。结果表明,制备的鸡NLRP3蛋白多克隆抗体免疫原性较好、效价较高。本试验为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。

基于316L过渡层的431不锈钢激光熔覆层组织与性能研究

采用激光熔覆技术制备316L不锈钢涂层作为过渡层,在过渡层表面激光熔覆431马氏体不锈钢作为表面熔覆层.通过OM和SEM观察分析了熔覆层截面的微观组织特征,并借助XRD分析了熔覆层和过渡层的物相组成,利用显微硬度仪和电化学工作站测试熔覆层的硬度分布和耐腐蚀性.试验结果表明:加入过渡层后获得的熔覆层表面光滑平整,没有气孔裂纹等缺陷;表面熔覆层由马氏体、铁素体和少量残余奥氏体组成,过渡层由奥氏体组成;整个熔覆层的硬度从顶端向下呈现出梯度减小,表面熔覆层的硬度为538 HV,比基材提高了3倍,过渡层的平均硬度为300 HV;熔覆层的腐蚀电流为0.9569×10^(-6) A/cm^(2),腐蚀电位为-0.16644 V,熔覆层的耐腐蚀性优于基材.

鸡传染性法氏囊病病毒VP5的原核表达、多抗制备及初步应用

传染性法氏囊病(infectious bursal disease virus,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种主要危害雏鸡的急性传染病。在IBDV编码的5个蛋白中,VP5是IBDV唯一可以缺失基因的蛋白。本研究克隆了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白编码基因,利用原核表达系统表达了VP5蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备VP5多抗,并对多抗进行了鉴定和检测不同IBDV毒株的应用。结果显示,IBDV优势流行毒株的VP5蛋白实现了可溶性表达,分子质量约为17 kDa;制备的VP5多抗特异性良好,ELISA效价可达1:64000;VP5多抗可通过IFA和Western Blot检测识别IBDV rHLJ0504-HT株,不识别VP5基因缺失株。结果表明:试验成功表达了IBDV优势流行毒株的VP5蛋白,并制备了VP5多抗;VP5多抗可对IBDV及其VP5编码基因缺失毒株进行鉴别检测。本研究对于IBDV检测方法的建立以及VP5编码基因功能的进一步研究提供了物质基础。

基于超球面三元组编码的干扰模式开集识别

干扰模式识别是现代军事通信对抗中必不可少的一环,随着复杂电磁环境当中各种新型恶意干扰样式层出不穷,对于未知型干扰的判决也变得愈发重要。因此,要求干扰模式识别算法保持对于已知型干扰高精度识别的同时,也能够完成对于未知型干扰的判决,以排除未知型恶意干扰的影响。基于此,该文将未知型干扰存在时的干扰模式识别问题建模为开集识别问题,并提出一种基于超球面3元组编码的干扰模式开集识别方法。所提方法基于超球面3元组对输入的时频图像进行降维编码以提高识别精度,然后采用元识别分类器准确地完成干扰模式开集识别任务。通过仿真试验证明该算法在干信比大于–2 dB时能够高效地完成开放空间中的干扰模式识别任务。

自适应大流量安全阀的流固耦合分析与保压实验

为提高自适应大流量安全阀关键零件的可靠性及寿命,利用UG软件建立自适应大流量安全阀关键零件的三维模型,并借助ANSYS Fluent软件对其进行了网格划分,通过单向流固耦合分析得到了一级锥阀、二级差动阀芯等关键零件的应力、应变云图;为进一步研究自适应大流量安全阀的低压密封性,利用ZF-2WG液压支架阀综合实验台对其进行了6、14 MPa 2种不同压力的打压实验。仿真及实验结果表明:一级锥阀的锥面附近区域为应力集中区域,锥尖附近区域为应变集中区域;二级阀芯4个阻尼孔靠差动腔侧的出口处为应力集中区域,二级阀芯外环形差动腔接触流体区域为应变集中区域;通过操作控制P口压力为6、14 MPa,保压时间为120 s,压力值基本保持在设定值,保压效果非常理想。

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP 2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒(HVT)活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。

爆炸荷载下路堑岩质边坡振动效应研究

为研究路堑边坡岩体爆破振动效应,以109国道新线高速公路路基开挖工程为背景,开展了现场爆破振动监测,结合数值模拟,系统分析路堑边坡岩体爆破振动传播规律及振动效应。结果表明,随着爆源距离的增加,路堑边坡岩体质点峰值振速呈现衰减趋势,且质点垂直峰值振速大于水平径向和切向峰值振速;同一级边坡台阶平台处,受“鞭梢效应”影响,台阶外缘质点峰值振速明显大于其他位置,距离爆源越近,台阶外缘相较于坡脚处的质点峰值振速放大倍数越大;随着边坡坡度的增大,各级边坡台阶外缘质点峰值振速呈现增大趋势,坡度为1∶0.3时坡顶处质点峰值振速是坡度为1∶1时的3.43倍;路堑边坡设计,应综合考虑岩体地质条件变化及爆破振动对边坡稳定性的影响。

滞针动态施治疗法治疗神经根型颈椎病风寒痹阻证的随机对照试验

目的:探讨神经肌肉控制理论指导下滞针动态施治疗法治疗神经根型颈椎病风寒痹阻证的临床效果及安全性。方法:将70例神经根型颈椎病风寒痹阻证患者随机分为治疗组和对照组,每组35例,对照组患者予常规毫针治疗,治疗组患者予滞针动态施治疗法治疗,比较治疗前、治疗后和治疗后1个月的简化McGill疼痛量表评分(PRI评分、PPI评分、VAS评分)、颈椎病临床评价量表(CASCS)评分(主观症状评分、生活工作和社会适应能力评分、临床体征评分)。结果:治疗后治疗组总有效率为97.14%(34/35),对照组总有效率为85.71%(30/35),治疗组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后1个月治疗组总有效率为94.29%(33/35),对照组总有效率为80.00%(28/35),治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗组患者治疗后、治疗后1个月McGill各评分均低于对照组(P<0.05),CASCS评分均高于对照组(P<0.05);两组患者治疗后、治疗后1个月McGill评分均低于治疗前,CASCS评分均高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,治疗组患者CASCS评分(主观症状评分、生活工作和社会适应能力评分、临床体征评分)的增长趋势更明显(P<0.05)。两组均无不良事件发生。结论:滞针动态施治疗法治疗神经根型颈椎病风寒痹阻证有较好疗效,能有效改善患者疼痛程度、颈椎功能,提升患者生活工作和社会适应能力,且安全性高。

结石CT值在输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石患者清除率预测中的应用

目的:探讨结石CT值在输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石患者清除率预测中的应用价值。方法:回顾性分析2020年3月—2022年10月行输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石112例患者的临床资料,根据CT检查下测量的结石CT值不同将112例患者分为低值组(结石CT值<800 HU)63例和高值组(结石CT值≥800 HU)49例。比较两组患者的一般资料、结石清除率、碎石时间、总手术时间、并发症发生率,并采用Pearson相关性系数分析结石CT值与输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石清除率的相关性。结果:两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05);低值组的结石清除率高于高值组,并发症发生率低于高值组,差异有统计学意义(P<0.05);低值组的碎石时间、总手术时间均短于高值组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结石CT值与输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石清除率呈负相关(r=-0.658,P<0.05)。结论:结石CT值会影响输尿管软镜钬激光治疗单发肾结石清除率、手术时间和并发症发生率,术前准确测量患者的结石CT值对术后结石清除具有一定的预测价值。

基于单脉冲跟踪体制的V频段宽带角跟踪接收机设计与验证

随着高通量通信卫星系统对星间数据传输速率需求的不断提高,星间链路的工作频段将由Ka频段逐渐向频率资源更加丰富的毫米波频段发展。为了满足星间链路对毫米波频段自动角跟踪系统的发展应用需求,给出了一种基于单通道单脉冲角跟踪技术的V频段宽带角跟踪接收机的设计方案。采用LTCC和MCM技术实现了V频段接收组件的集成一体化设计;采用基于IQ正交混频的跟踪调制器结合数字相位补偿的单通道单脉冲角误差信号处理技术完成了宽带输入信号的角误差信号解调。在产品研制基础上,搭建了V频段角跟踪接收机测试系统,测试结果表明该V频段宽带角跟踪接收机可以完成对-95 dBm~-55 dBm输入信号电平范围内多种宽带数据传输信号的角误差信号解调,角误差信号抖动优于±250 mV;表征输入信号电平强弱的AGC遥测电压随输入信号电平的增大而单调递增,各项指标满足V频段星间链路建链需求,为我国后续将要发展的毫米波星间链路系统奠定了扎实的技术基础。

残余压应力对车轴表面裂纹扩展的仿真研究

为了研究残余压应力对裂纹扩展的影响,通过子程序引入初始残余压应力,利用裂纹扩展仿真技术XFEM与VCCT相结合的方法进行裂纹扩展仿真计算,证实了残余压应力对裂纹扩展有显著的抑制作用;基于Zencrack仿真软件,结合S38C材质车轴试验得到的裂纹扩展参数,预测了CRH2型动车组用S38C材质车轴裂纹扩展寿命,并提出了车轴裂纹检测周期建议。

一种宽范围非合作目标中频角跟踪接收机的设计与实现

为实现对非合作星间目标信号的捕获跟踪,提出了一种基于单通道单脉冲跟踪技术的非合作目标中频角跟踪接收机软硬件设计方案。硬件平台设计方案结合了FPGA与DSP在算法处理上的优势,涵盖高速ADC设计、系统时钟设计等。针对非合作星间目标信号的特征,提出了不同调制体制、不同码速率的非合作宽带数据传输信号的检测识别、角误差信号提取与分离方案,涵盖数字预处理、数字信道化、信道判决、信号检测估计、角误差信号提取等处理环节。系统捕获跟踪试验结果表明该非合作目标角跟踪接收机可以完成对多种调制体制(BPSK、QPSK、SQPSK等载波相位调制)、不同码速率(1 kbps~300 Mbps)的非合作宽带数据传输信号的角误差信号提取与分离,载频估计精度优于100 kHz,码速率估计精度优于100 kbps。本系统可实现对非合作目标信号的有效跟踪,为开展非合作目标角跟踪接收机的工程化研究奠定了扎实基础。

星载角跟踪接收机角误差包络检测

针对星载角跟踪接收机中角误差合成信号的特点,提出一种基于复Morlet组合小波的角误差信息提取方法。该方法首先对星载角跟踪接收机中角误差合成信号的频域特性进行分析,角误差包含在角误差合成信号的包络中,频率上则表现在调制基波的谐波分量处。然后采用Morlet小波作为母小波,根据角误差合成信号的频域特性选取合适的小波尺度参数和位置参数可以有效的提取合成信号包络信息,从而解算角误差信息。在调制基波频率确定的情况下,合适的小波尺度参数和位置参数能准确对调制基波谐波分量进行提取,从而实现角误差的包络检测。该方法对±10 kHz范围内的多普勒频偏不敏感,解决载波多普勒估计不准情况下的角误差提取。最后通过计算机中的Matlab对Morlet组合小波角误差合成信号包络提取进行仿真,证明该方法的可行性和有效性。

基于DWT-SVD压缩量化的数字图像盲水印算法

为了解决奇异值分解(singular value decomposition,SVD)算法提取水印时需要原始载体图像的缺陷,以及量化索引调制(quantization index modulation,QIM)均匀量化不适用于非均匀信号的问题,通过引入μ律压缩技术,提出一种新的基于DWT-SVD压缩量化的数字图像盲水印算法。该算法对载体图像进行分块,对每一分块实施离散小波变换(discrete wavelet transform,DWT),以及对变换后的近似部分系数进行SVD分解,使用μ律压缩函数压缩分解后的最大奇异值,用QIM的方法嵌入二值水印。算法只用到了最大奇异值,可以盲提取水印,消除因传输原始载体图像产生的不安全性,μ律压缩技术也减小了嵌入水印对原始载体图像的扰乱。仿真实验结果表明,该算法保持了较高的透明性,并对高斯噪声、中值滤波、联合图像专家小组(joint photographic experts group,JPEG)压缩、缩放等常见攻击具有更强的鲁棒性。

沙库巴曲缬沙坦钠在心力衰竭患者中的临床疗效观察

目的研究沙库巴曲缬沙坦钠在心力衰竭(心衰)患者中应用的临床效果。方法连续入选2017年10月至2018年4月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的射血分数下降型心衰43例,随机分为沙库巴曲缬沙坦钠组(n=17)和依那普利组(n=26),平均随访6个月。观察指标为主要不良心脏事件(MACE)如心源性死亡和再发心衰再住院,超声心动图指标如左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期内径增加值(△-LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、左室射血分数增加值(△-LVEF)等和N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、NT-proBNP水平的增加值(△-NTproBNP)等。结果沙库巴曲缬沙坦钠组的心源性死亡率为5.9%,低于依那普利组的7.7%,但无统计学差异,沙库巴曲缬沙坦钠组的心衰再入院率为11.7%,远低于依那普利组的23.1%,差异有统计学意义;沙库巴曲缬沙坦钠组的LVEDD(a)、NT-proBNP(a)低于依那普利组,差异有统计学意义,而LVEF(a)、△-LVEDD、△-LVEF、△-NT-proBNP高于依那普利组,差异有统计学意义。结论沙库巴曲缬沙坦钠可安全有效的应用于射血分数降低型的慢性心衰患者。

沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭患者的临床研究

目的探讨沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭患者的临床效果。方法选取2017年12月至2019年1月在首都医科大学附属北京安贞医院住院或门诊就诊的慢性充血性心力衰竭患者196例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各98例。观察组在一般治疗的基础上加用沙库巴曲缬沙坦治疗,对照组在一般治疗的基础上加用雷米普利治疗。比较2组临床疗效和治疗前及治疗6个月后血浆N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、去甲肾上腺素、醛固酮、血管紧张素Ⅱ、6min步行距离(6MWD),左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF),并记录药物不良反应。结果治疗后观察组总有效率明显高于对照组[82.7%(81/98)比54.1%(53/98)],差异有统计学意义(P=0.011)。2组患者治疗期间均未发生明显不良反应。治疗6个月后,2组NT-proBNP、去甲肾上腺素、醛固酮、血管紧张素Ⅱ、LVESD、LVEDD水平明显低于治疗前,且观察组明显低于对照组[1680(211,3626)ng/L比2351(231,4346)ng/L、(1657±244)pmol/L比(2061±288)pmol/L、(247±12)ng/L比(283±18)ng/L、(99±8)ng/L比(114±8)ng/L、(33.1±0.9)mm比(37.0±1.0)mm、(51±5)mm比(56±5)mm],2组6MWD、LVEF明显高于治疗前,且观察组明显高于对照组[(199±56)m比(162±57)m、(40±5)%比(36±8)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论沙库巴曲缬沙坦治疗慢性充血性心力衰竭患者能够抑制神经内分泌激活,降低血浆NT-proBNP浓度,提高6MWD,缩小LVESD及LVESD,提高LVEF,疗效优于雷米普利。

烟草NtSKOR1基因的克隆及功能分析

该研究利用拟南芥AtSKOR蛋白序列,通过NCBI的Blast搜索获得烟草NtSKOR1基因CDS序列。设计全长CDS扩增引物,通过RT-PCR方法从栽培烟草中克隆得到NtSKOR1基因,对其进行生物信息学、表达特性等分析,并利用CRISPR/Cas9技术获得NtSKOR1的敲除材料。结果表明:(1)NtSKOR1基因CDS由2466 bp核苷酸组成,编码821个氨基酸,推测NtSKOR1蛋白等电点为6.36,分子量为94.21 kD。(2)NtSKOR1定位于细胞膜,有6个跨膜区,无信号肽序列;NtSKOR1蛋白含有孔形成区(P)及锚定蛋白区(ANK)等典型SKOR类蛋白功能域。(3)进化树分析表明,烟草NtSKOR1蛋白与番茄和马铃薯的SKOR蛋白遗传距离最近,与禾本科植物的SKOR蛋白遗传距离较远。(4)组织特异性表达分析表明,NtSKOR1基因主要在烟草根中表达,其表达模式与拟南芥一致;钾胁迫处理后,NtSKOR1基因呈先降低后升高再降低的表达模式。(5)CRISPR/Cas9敲除NtSKOR1基因,烟草叶片钾含量显著降低,表明NtSKOR1基因是控制烟叶钾离子的关键基因之一。该研究结果为解析烟草钾离子吸收转运的分子机制提供重要依据。