纳米粒包裹氨基吡啶亚乙基双磷酸甜菜碱对巨噬细胞的选择性清除作用

背景：氨基吡啶亚乙基双磷酸甜菜碱（2-（2-aminopyrimidinio）ethylidene-1,1-bisphosphonic acid betaine,ISA）是一种新近人工合成的效力极强的双磷酸酯,将其用纳米粒包裹后通过巨噬细胞的吞噬作用而导入细胞,可以达到选择性清除巨噬细胞的目的。目的：拟验证纳米粒包裹ISA对单核/巨噬细胞选择性的清除作用。设计、时间及地点：分组设计、对比观察,于2003/2007分别在以色列希伯莱大学和解放军总医院实验室完成。材料：ISA由以色列希伯莱大学药学院合成;聚乳酸/乙醇酸共聚物（50∶50）,相对分子质量123400;聚乙烯醇,相对分子质量30000-70000。方法：采用双相乳化系统和溶剂蒸发技术制备纳米粒包裹的ISA,另以ISA溶液和等量不含ISA的纳米粒为对照。主要观察指标：①纳米粒形态、大小及纳米粒中ISA含量。②纳米粒中ISA体外释放率。③ISA对培养巨噬细胞、平滑肌细胞增殖的影响。④激光扫描共聚焦显微镜观察培养细胞对荧光标记纳米粒吞噬作用。结果：所制备的纳米粒直径500nm,表面呈负电荷（-40mV）,ISA包裹率高（17.6%-19.0%）,扫描电镜检查见其大小均匀。体外实验证实,ISA在纳米粒包裹后对巨噬细胞、平滑肌细胞增殖抑制作用明显增加,并且对巨噬细胞增殖的抑制作用尤为明显。激光扫描共聚焦显微镜观察发现荧光标记的纳米粒分别与巨噬细胞、平滑肌细胞孵育后,纳米粒可快速进入巨噬细胞内,且包裹ISA的纳米粒对巨噬细胞有明显损伤作用,而平滑肌细胞内无纳米粒。结论：ISA经纳米粒包裹后可选择性清除单核/巨噬细胞,而对非吞噬细胞影响较小。

选择性清除单核/巨噬细胞对血管损伤后内膜增生影响的研究

目的应用脂质体输送系统选择性清除单核/巨噬细胞,探讨血管损伤后抑制内膜增生的有效途径。方法采用反相蒸发技术将clodronate用脂质体包裹,在36只大鼠颈动脉损伤模型前1 d、损伤后6 d,分别尾静脉注射15 mg/kg体重的脂质体包裹clodronate(LC组,12只)、clodronate溶液(FC组,8只)、等量生理盐水(saline组,9只)或等量空脂质体(EL组,7只),14天后颈总动脉切片行HE、VG染色,用图象分析软件测定颈动脉管腔面积、增生内膜面积、中膜面积,并计算增生内膜与中膜面积比值(N/M)、管腔狭窄率(%)。另取10只大鼠尾静脉注射荧光标记的脂质体包裹clodr- onate(5只)或等量荧光标记的空脂质体(5只),颈总动脉损伤后1天下腔静脉抽血分离白细胞,并取颈总动脉、肝脏、脾脏,冰冻切片后在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光物质分布。结果包裹、未包裹clodronate的脂质体、罗丹明标记脂质体的平均直径分别为(213±20)nm、((19.8±14)nm、(209±19)nm,包裹率17.6%～19.0%,脂质体中clodronate浓度(7.6±1.1)mg/ml;各组大鼠损伤动脉内膜均有明显增生,但LC组血管内膜增生明显较其它3组明显减轻,表现为N/M、管腔狭窄率(%)明显低于其它3组相应值(P<0.01);FC组或EL组对血管内膜增生无明显影响(与saline组比,P>0.05)。各组间颈总动脉中膜面积无明显差别。尾静脉注射荧光标记脂质体48 h后,大鼠左颈总动脉、静脉血中白细胞、脾脏、肝脏中可以发现单核/巨噬细胞中有荧光标记物积聚,其中LC组大鼠上述组织中荧光标记物较EL组者明显减少,表明脂质体包裹clodronate可明显减少体内单核/巨噬细胞数量。结论通过clodronate的脂质体输送系统将巨噬细胞暂时灭活、清除,可以预防血管损伤后的血管再狭窄。