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羊口疮与绵羊痘二联重组DNA疫苗的构建及其免疫应答 被引量:1
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作者 王妍 文美龄 +4 位作者 王仁铃 王蓬琨 关继羽 宋德光 陆慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期307-314,共8页
羊口疮(Orf)和绵羊痘(SPP)是发生于羊群的高度接触性传染病,两者在临床上经常呈现混合感染,给养羊业带来严重的经济损失,因此,开发安全有效、可同时抵抗2种疫病的二联疫苗具有重要临床意义。本研究将羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因及绵羊痘... 羊口疮(Orf)和绵羊痘(SPP)是发生于羊群的高度接触性传染病,两者在临床上经常呈现混合感染,给养羊业带来严重的经济损失,因此,开发安全有效、可同时抵抗2种疫病的二联疫苗具有重要临床意义。本研究将羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因及绵羊痘病毒(SPPV)的P32基因以P2A肽序列串联,获得pcDNA3.1-B2L-P2A-P32质粒,作为候选重组DNA疫苗。将质粒转染细胞,检测抗原蛋白的胞内表达及切割;将其免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法检测特异性抗体、中和抗体效价和细胞因子的分泌水平。结果表明:该重组DNA疫苗能在真核细胞中独立表达B2L及P32抗原蛋白,同时能诱导机体产生特异性免疫应答,具有较好的免疫效果。该研究为在羊群中开展更广泛的临床研究提供了试验依据,有望成为候选疫苗。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 绵羊痘病毒 重组二联DNA疫苗
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羊传染性脓疱病毒ORF120蛋白以剂量依赖性方式抑制宿主细胞非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)的表达
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作者 于昭辉 周艳龙 +7 位作者 吕丽君 刘兴源 徐梦实 方梓煜 李卓梅 关继羽 高丰 赵魁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期979-985,共7页
羊传染性脓疱病毒(ORFV)是重要的人兽共患病病原,能够通过劫持宿主蛋白等多种策略逃避机体的抗病毒免疫反应,导致重复感染的发生。非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)是一种多功能核蛋白,参与mRNA剪切、DNA损伤修复、肿瘤发生以及炎症反... 羊传染性脓疱病毒(ORFV)是重要的人兽共患病病原,能够通过劫持宿主蛋白等多种策略逃避机体的抗病毒免疫反应,导致重复感染的发生。非POU结构域八聚体结合蛋白(NONO)是一种多功能核蛋白,参与mRNA剪切、DNA损伤修复、肿瘤发生以及炎症反应等多种生物学过程。本研究首先利用酵母双杂交、免疫共沉淀(Co-IP)等技术证实ORF120蛋白与宿主蛋白NONO存在相互作用。借助于激光共聚焦显微镜观察病毒ORF120蛋白和宿主NONO蛋白的定位分布,发现ORF120蛋白与NONO蛋白在细胞核内存在共定位,进一步证实ORF120蛋白和NONO蛋白存在互作。此外,利用Western blot方法证实ORF120蛋白和NONO蛋白之间存在相互抑制作用,且呈剂量依赖性。上述结果表明,ORF120蛋白与宿主NONO蛋白存在剂量依赖性的相互抑制作用,该结果将为更好地理解ORFV免疫逃逸分子机制及开发新的抗病毒手段提供重要依据。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 ORF120蛋白 NONO蛋白 蛋白互作 剂量依赖性抑制
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颗粒蛋白前体PGRN通过增强ORFV诱导的自噬促进病毒的复制
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作者 甄瑞雪 吕丽君 +6 位作者 陆慧君 刘兴源 徐梦实 关继羽 贺文琦 高丰 赵魁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期908-914,共7页
颗粒蛋白前体(PGRN)是一种分泌型多功能蛋白,具有多种生物学功能,在炎症反应、创伤修复、溶酶体功能、自噬、神经发育等多种生命活动过程中发挥重要作用。课题组前期研究结果证实,ORFV能够诱导OFTu细胞发生自噬,作为细胞自噬的重要调控... 颗粒蛋白前体(PGRN)是一种分泌型多功能蛋白,具有多种生物学功能,在炎症反应、创伤修复、溶酶体功能、自噬、神经发育等多种生命活动过程中发挥重要作用。课题组前期研究结果证实,ORFV能够诱导OFTu细胞发生自噬,作为细胞自噬的重要调控分子,PGRN是否参与对ORFV诱导OFTu细胞自噬的调控尚不清楚。本研究首先从转录和蛋白水平上分析PGRN在ORFV感染细胞中的表达变化规律,结果显示,PGRN发生显著上调的时间与ORFV诱导自噬发生的时间一致。进一步研究显示,敲低PGRN能够抑制LC3的型别转换,并使P62表达上调;而体外添加PGRN重组蛋白则促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转换,P62表达下调。以上结果表明,PGRN参与对ORFV诱导细胞自噬的调控。此外,病毒噬斑试验结果显示,PGRN能够促进ORFV复制,且可解除自噬抑制剂对病毒复制的抑制,该结果表明,PGRN能够通过调节ORFV激活的自噬影响病毒的复制。本研究结果将为明确PGRN对ORFV诱导自噬的调控作用及进一步揭示ORFV致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) 颗粒蛋白前体(PGRN) 自噬 复制增殖
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动物实验方法学课程教学改革的探索 被引量:3
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作者 高飞 付守鹏 +6 位作者 关继羽 袁宝 王东旭 官员 任文陟 柳巨雄 刘殿峰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期145-146,152,共3页
动物实验方法学是医学、农学、生物学等专业本科生教育的专业基础课程。该课程的教学内容包括理论和实验两个部分,其中理论部分采取传统的教师讲解方式,学生机械记忆缺乏自主学习的过程;实验部分由于课堂时间有限,学生只是简单模仿动物... 动物实验方法学是医学、农学、生物学等专业本科生教育的专业基础课程。该课程的教学内容包括理论和实验两个部分,其中理论部分采取传统的教师讲解方式,学生机械记忆缺乏自主学习的过程;实验部分由于课堂时间有限,学生只是简单模仿动物实验操作,所学的理论知识和实际操作不能有机地结合在一起;课程考核主要采取书面考试的方法检查学生的学习情况,缺乏对知识应用和综合素质的考察。笔者结合自身多年的教学经验,对该课程的教学内容、教学形式、实验操作、考核方式进行改革和探索,优化了各项教学环节,得到了学生的广泛认可,为动物科学专业相关课程改革提供了参考。 展开更多
关键词 动物实验方法学 教学模式 教学改革 教学方法 实验教学 考核方式
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羊传染性脓疱病毒通过激活PI3K/Akt通路抑制HeLa细胞凋亡 被引量:2
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作者 吕丽君 黄后双 +6 位作者 关继羽 周艳龙 王帅 贺文琦 宋德光 高丰 赵魁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期413-419,共7页
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信号通路是参与细胞增殖、分化和凋亡调控的重要通路之一,多种病毒可通过对该通路的调控而实现对宿主细胞的感染。作为一种重要的人兽共患传染病病原,羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)被证实能够诱导PI3K/Ak... 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信号通路是参与细胞增殖、分化和凋亡调控的重要通路之一,多种病毒可通过对该通路的调控而实现对宿主细胞的感染。作为一种重要的人兽共患传染病病原,羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)被证实能够诱导PI3K/Akt通路的活化。利用PI3K特异性抑制剂LY294002靶向抑制PI3K/Akt通路后,以荧光染色和流式细胞荧光分选技术(FACS)分析该通路的抑制对ORFV感染HeLa细胞凋亡的影响,结果显示抑制PI3K/Akt通路后可使ORFV感染HeLa细胞发生凋亡,该结果表明ORFV感染HeLa细胞产生的凋亡抑制可能与PI3K/Akt通路的激活相关。为进一步明确PI3K/Akt通路介导ORFV感染HeLa细胞凋亡抑制的途径,本研究利用蛋白质印迹法对PI3K/Akt通路3个关键的下游分子GSK-3β、MDM2和Bad的表达情况进行检测,在经PI3K特异性抑制剂LY294002处理后的ORFV感染HeLa细胞中,Bad表达显著上调,而GSK-3β和MDM2的表达无显著变化。结果表明,ORFV通过激活PI3K/Akt/Bad信号通路抑制受感染HeLa细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 ORFV HELA细胞 凋亡 PI3K/AKT BAD
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Predicting bruise susceptibility in apples using Vis/SWNIR technique combined with ensemble learning
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作者 Yao Jian guan jiyu Zhu Qibing 《International Journal of Agricultural and Biological Engineering》 SCIE EI CAS 2017年第5期144-153,共10页
Bruise susceptibility in fruits is an important indicator in evaluating risk factors for bruising caused by external factors.Prediction of the bruising susceptibility of fruit can provide useful information for proper... Bruise susceptibility in fruits is an important indicator in evaluating risk factors for bruising caused by external factors.Prediction of the bruising susceptibility of fruit can provide useful information for proper postharvest handling and storage operations.In this study,visible and shortwave near-infrared(Vis/SWNIR)technique was used to develop nondestructive method for predicting the bruise susceptibility of apples.Vis/SWNIR spectra covering 400-1100 nm were collected for 300‘Golden Delicious’apples over a time period of three weeks after harvest.A pendulum-like device was used to simulate impact bruise at three impact energy levels of 1.11 J,0.66 J and 0.33 J.Bruise volumes were estimated from the digital images of the bruised apples by using the bruise thickness model.Three prediction models,i.e.partial least squares model(PLS),partial least squares model combined with successful projection algorithm(SPA-PLS),and selective ensemble learning based on feature selection(SELFS),for bruise susceptibility were developed for each impact energy level as well as for the pooled data.Compared with PLS and SPA-PLS model,SELFS gave the better prediction results for bruise susceptibility,with the correlation coefficient of R_(p)=0.800-0.886 for the prediction set,the root-mean-square error of 38.7-62.1 mm^(3)/J for the prediction set(RMSEP),and the residual predictive deviation(RPD)of 1.78-2.14 for three impact energy level.For three impact energy levels,the RMSEP and RPD value obtained by SELFS model improved by 14.8%-20.0%and 15.0%-24.5%compared to PLS model,and 11.4%-21.2%and 11.5%-27.1%compared to SPA-PLS model,respectively.The SELFS model achieved relatively lower prediction accuracies for the pooled data,with the R_(p) values of 0.731,RMSEP of 85.46 mm^(3)/J,and RPD of 1.46,which were also better than that of PLS model and SPA-PLS model.This research demonstrated that Vis/SWNIR technique combined with ensemble learning is promising technique for rapid assessment of bruise susceptibility of fruit,which would be useful for postharvest handling of fruit. 展开更多
关键词 APPLE nondestructive detection bruise susceptibility visible/short-wave near-infrared technique ensemble learning
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溶酶体酸性环境促进猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制
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作者 李彩丽 王改丽 +8 位作者 柳雨竹 艾晓敏 王真真 李姿 关继羽 贺文琦 高丰 兰云刚 陆慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期626-631,642,共7页
为解析猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)复制和溶酶体酸性环境的相关性,本研究以PHEV感染神经瘤母细胞(N2a细胞)为模型,利用Western blot和间接免疫荧光方法进行检测,发现PHEV感染神经细... 为解析猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)复制和溶酶体酸性环境的相关性,本研究以PHEV感染神经瘤母细胞(N2a细胞)为模型,利用Western blot和间接免疫荧光方法进行检测,发现PHEV感染神经细胞后溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)表达显著升高,病毒能与溶酶体共定位,并使溶酶体体积增大。其次,用溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red DND-99标记活细胞溶酶体,结果发现病毒感染神经细胞后溶酶体的酸性增强。再者,用巴佛洛霉素A1(BafA1)阻止神经细胞溶酶体酸化后接种病毒,发现与未处理的细胞感染组相比,胞内病毒含量显著降低,表明抑制溶酶体酸化能够阻碍细胞内子代病毒的产生。本研究结果表明PHEV感染神经细胞后能定位于溶酶体,影响溶酶体的酸性环境,并且揭示了子代病毒的产生依赖溶酶体的酸性环境;研究结果为深入解析溶酶体与PHEV复制的相关性提供了依据。 展开更多
关键词 猪血凝性脑脊髓炎病毒 溶酶体 N2A细胞 巴佛洛霉素A1
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宿主Ncor1基因沉默对VSV复制的影响
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作者 刘飞 王仁铃 +4 位作者 孙诗惠 王蓬琨 宋德光 关继羽 陆慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1764-1768,1785,共6页
核受体共抑制因子1(NCOR1)组织分布广泛,可调节基因转录。前期研究表明,与NCOR1功能密切相关的转导蛋白(β)样1X连接受体1(TBL1XR1)在水疱性口炎病毒(VSV)复制进程中发挥促进功能。为明确NCOR1因子在VSV复制增殖过程中的作用及机制,首... 核受体共抑制因子1(NCOR1)组织分布广泛,可调节基因转录。前期研究表明,与NCOR1功能密切相关的转导蛋白(β)样1X连接受体1(TBL1XR1)在水疱性口炎病毒(VSV)复制进程中发挥促进功能。为明确NCOR1因子在VSV复制增殖过程中的作用及机制,首先设计并构建靶向Ncor1的shRNA过表达质粒shNcor1。将shNcor1质粒与骨架质粒共转染293T细胞,获得表达shNcor1的慢病毒颗粒。用慢病毒感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7)并构建Ncor1基因沉默细胞系。VSV分别感染Ncor1沉默与对照细胞系后,通过Q-PCR和TCID检测VSV的转录、复制水平。结果表明,Ncor1基因沉默能抑制VSV的转录及复制。此外,当Ncor1基因沉默时,经VSV诱导的干扰素相关基因Ifit1及Ifit2的转录水平显著升高,提示NCOR1对病毒复制的调控与干扰素信号的激活相关。本研究从宿主细胞出发为阐明VSV的致病机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 NCOR1 水疱性口炎病毒 病毒复制 RNA干扰
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