甘草查尔酮B联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨甘草查尔酮B(licochalcone B,LCB)联合顺铂(DDP)对于人非小细胞肺癌A549细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:采用CCK-8法检测LCB联合DDP对A549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞技术检测对凋亡、细胞周期的影响;Hoechest33258染色后观察对A549细胞核的影响;采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达。结果:LCB联合DDP用药在48 h、72 h对细胞增殖抑制率均高于LCB组和DDP组(P<0.05),药物相互作用系数大于1.15,为两药相互增效。联合用药组具有更强的抑制细胞克隆形成作用(P<0.05),同时将细胞阻滞在G0/G1期和S期(P<0.05);联合用药组48 h的细胞凋亡率高于两药单用组(P<0.05),细胞呈现明显的凋亡特征。联合用药组Bax/Bcl-2比值及Caspase-3蛋白表达高于单独用药组(P<0.05)。结论:甘草查尔酮B联合顺铂可促进人肺癌细胞A549凋亡,并抑制其增殖,表明联合用药可增强抗肿瘤活性,其作用机制可能与凋亡相关通路有关。

灰岩含水层定向钻孔注浆效果智能评价方法研究

基于黄河北煤田邱集煤矿现场注浆工程,通过XGboost、支持向量机、K近邻和BP人工神经网络四种算法,对灰岩定向钻孔的注浆效果进行科学分析。研究表明,XGboost、支持向量机、K近邻的模型精度均达不到0.9,而BP人工神经网络测试的拟合程度达0.93,使用现场数据测试准确度达0.9,证明了BP人工神经网络评价注浆效果的可行性和准确性;最后运用MATLAB提出了一种基于BP人工神经网络的注浆效果智能化评价方法,并根据模型制作了简单的演示平台,实现了注浆效果评价的智能化与快捷化。

慢病毒介导的CBS基因沉默对人胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探究催化产生内源性H2S的酶CBS在人胶质瘤细胞增殖中的作用。方法:以人脑胶质瘤U87细胞为实验对象,使用CBS基因shRNA慢病毒载体转染胶质瘤细胞CBS基因,利用0.5μg/mL嘌呤霉素筛选建立CBS-RNAi慢病毒的U87稳定细胞株,通过qPCR法对各组CBS基因的表达量检测,确定目标基因的沉默效果以及CBS基因沉默对于U87细胞的增殖能力的影响。结果:与空白对照组相比,CBS-RNAi 2组的CBS mRNA表达量明显降低,CBS-RNAi 1组和CBS-RNAi 3组的CBS mRNA表达量降低;证明慢病毒介导的RNAi可有效沉默人胶质瘤U87细胞的CBS基因,且CBS-RNAi组沉默人胶质瘤细胞CBS基因的效果最佳。结论:沉默CBS基因能够抑制人胶质瘤U87细胞的体外增殖,CBS基因或可成为临床治疗人脑胶质瘤的新靶点。

盐酸去氢骆驼蓬碱抗恶性黑色素瘤B16F10凋亡的实验研究

目的:探讨盐酸去氢骆驼蓬碱(HH)抗恶性黑色素瘤细胞(B16F10)的体外作用机制。方法:CCK-8检测HH对B16F10细胞的生长抑制率,普通光学显微镜检测HH作用后B16F10的细胞形态变化,流式细胞术检测HH作用于B16F10的细胞周期的改变、细胞凋亡率以及活性氧的变化,荧光显微镜检测HH作用后B16F10细胞内自噬小体染色情况。结果:与阴性对照组相比,实验组B16F10的生长抑制率、细胞凋亡率显著上升(P<0.05),G2/M期比例升高(P<0.05),细胞内活性氧含量升高(P<0.05),细胞形态呈圆形或者不规则改变,细胞内自噬小体比例升高。结论:HH能够诱导恶性黑色素瘤细胞B16F10发生凋亡及自噬,并将细胞周期阻滞在G2/M期。

利用Cas9/sgRNA体系提高猪胎儿成纤维细胞基因组编辑效率

[目的]本文旨在利用Cas9/sgRNA体系,提高猪胎儿成纤维细胞的基因组编辑效率。[方法]针对猪ROSA26位点的启动子区(包含第一外显子区)设计2条sgRNA,将其构建在PX459-cas9-puro质粒上,以获得PX459-cas9-sgRNA质粒。将sgRNA靶序列连同原间隔序列(protospacer-adjacent motif,PAM)构建在RGS-CR质粒上,以获得RGS-sgRNA质粒。使用PX459-cas9-sgRNA质粒与RGS-sgRNA质粒系统共转染,筛选打靶效率较高的一条sgRNA,并使用该sgRNA对猪胎儿成纤维细胞(PEF)进行后续基因打靶试验。分别使用PX459-cas9-sgRNA质粒和Cas9/sgRNA 2种方法对PEF的靶位点进行基因敲除,将转染后的细胞提取基因组DNA,以桑格尔测序检测打靶效率。[结果]成功构建了打靶猪ROSA26靶序列的PX459-cas9-sgRNA质粒和含PAM序列的RGS-sgRNA,质粒测序结果显示序列插入正确;RGS-sgRNA筛选结果表明,sgRNA2的打靶效率极显著高于sgRNA1(P<0.01),且sgRNA2无脱靶效应,因此后续使用PX459-cas9-sgRNA2和Cas9/sgRNA2在PEF中进行基因打靶试验,并比较两者的基因打靶效率。在猪胎儿成纤维中,PX459-cas9-sgRNA2质粒的打靶效率为15.67%,Cas9/sgRNA2体系的打靶效率为33.33%。[结论]Cas9/sgRNA体系较PX459-cas9-sgRNA质粒打靶效率提高了约1倍,这对提高猪体细胞的基因编辑效率和促进基因编辑在猪上的应用有重要意义。

甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎及抗病毒作用研究进展

甘草查尔酮B是从甘草根中提取出来的黄酮类化合物,具有多种药理学活性。本文结合近年来国内外关于甘草查尔酮B抗肿瘤、抗炎和抗病毒作用及其机制的最新研究进展进行总结,以期为今后开展相关研究提供理论依据。

褐藻胶-富里酸改性石膏对玉米根系形态及植株生长的影响

为探究褐藻胶-富里酸改性石膏(AFG)对玉米(Zea mays L.)根系形态和植株生长的调控作用,评估AFG在玉米生产上的应用价值,于2022年设置6个AFG施用量:0(T0)、20(T20)、40(T40)、60(T60)、80(T80)、100 kg·hm^(-2)(T100),分析施用AFG对玉米根系形态性状和产量的影响。结果表明:施用AFG处理较不施用处理显著提高了土壤有效硫含量;施用AFG对根系形态性状具有明显调控作用,与T0相比,根总长度、根表面积、根平均直径、根尖数、根体积和根干质量的提高幅度分别为7.6%~18.2%、14.0%~31.2%、5.1%~11.0%、11.6%~17.9%、20.9%~45.7%和7.8%~18.7%。与其他处理相比,T40处理的根系形态性状最优,进一步提高AFG施用量则调控效果有降低趋势。施用AFG处理的玉米单株籽粒产量较不施用处理增加2.6%~8.9%,并以T40处理的单株籽粒产量最高。根尖数、根表面积、根系体积、根总长度、根冠比、根干质量和根平均直径与单株籽粒产量呈显著相关,对单株籽粒产量影响最强的根系性状为根干质量、根冠比、根总长度和根尖数。综上,在合理施用量下,AFG可优化玉米根系形态性状,促进玉米丰产。

不同氮肥运筹下玉米根系特征与产量的关系

明确玉米(Zea mays L.)根系性状对氮肥的响应特征及其与产量的关系,是揭示玉米氮营养机制、优化氮肥管理策略的基础。以供试玉米品种‘安农591’为试材,于2022年设置6种氮肥处理,即:不施氮(CK)、氮肥全部基施(N10)、基肥70%+拔节肥30%(N7∶3)、基肥50%+拔节肥50%(N5∶5)、基肥30%+拔节肥50%+大喇叭口肥20%(N3∶5∶2)、基肥20%+拔节肥40%+大喇叭口肥40%(N2:4:4),研究不同氮肥运筹下玉米根系性状的变化特征,并分析根系性状与产量的关系。结果表明,与CK相比,施氮提高吐丝期玉米根总长度、根表面积、根平均直径、根尖数、根体积、根组织质量密度和根系活力,降低比根长、根比表面积和根冠比。N7:3和N5:5处理的籽粒产量和全株生物量较高,其籽粒产量比N10处理提高6.6%~7.3%。施氮降低成熟期玉米根干物质分配比例,提高籽粒干物质分配比例。适当氮肥后移有提高氮肥农学效率的趋势。玉米产量与吐丝期比根长和根冠比呈负相关,与根总长度、根表面积、根尖数、根系体积和根系活力呈正相关(P <0.05)。在10种根系性状中,根总长度、根系活力、根表面积、根尖数和根冠比对产量影响较强,根平均直径、比根长、根表面积、根组织质量密度和根比表面积对氮肥农学效率影响较强。上述性状分别反映的是玉米产量潜力和氮肥利用率的重要根系性状。

黄河北煤田定向钻孔注浆效果的全周期评价方法

含水层注浆是治理煤矿底板水害的主要方法之一。为研究定向钻分支孔注浆的实际效果,以山东省邱集煤矿现场注浆作为工程背景,基于源头保障、过程控制、科学分析的注浆效果评价原则,通过钻孔顺层率、注浆终压、浆液流量、透水率、注浆后岩层渗透系数和涌水量等参数从注浆前、注浆中和注浆后3个时期对注浆效果进行全周期综合评价。结果表明,注浆改造后灰岩的渗透系数0.000613 m/d,具备了极微透水岩体的条件,预计煤层开采时底板正常涌水量27.37 m^(3)/h,最大涌水量41.06 m^(3)/h,定向钻孔注浆对岩溶裂隙和导水通道等进行了有效封堵,满足了工作面的回采要求,表明定向钻孔注浆的全周期评价方法是科学合理的。

一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法

目的:寻找一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法。方法:在Seglen两步胶原酶灌注法的基础上加以改进,按门静脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果。采用胰酶、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,大鼠肝脏肝门部结构、肝上及肝下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离获取肝细胞,经80目和200目的筛网依次过滤细胞后,细胞悬液分别以1 000、500、300 r/min离心各5 min以纯化肝细胞,以台盼蓝排染法测定细胞活性,HE染色鉴定肝细胞纯度。结果:平均每只成年Wistar雄性大鼠可以获得(1.53±0.31)×10~8个肝细胞,平均获得肝细胞活率可达到94.63%,平均获得肝细胞纯度为96.7%。结论:本实验介绍的方法简便易行,且肝细胞产量较高,活力好,纯度高,适宜在一般条件的实验室推广和应用。

XRCC3基因多态性与西北地区妇女乳腺癌的关联性研究

目的:通过对中国西北地区妇女乳腺癌与健康人群XRCC3基因多态性位点的研究,找出基因多态性与乳腺癌发病的相关性.方法:采集西北地区的517例乳腺癌患者和1008例健康人群外周血,提取DNA后采用高通量芯片检测方法,测定XRCC3基因rs861534、rs861537、rs3212092和rs861530共4个多态性位点的基因分型.结果:Logistic回归分析发现XRCC3 rs861534位点的AG/AA基因型,病例组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01,OR=0.36;P=0.013,OR=0.08),同时,GG+AG基因型与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),XRCC3 rs861530位点的Logistic回归分析显示AG+AA基因型与对照组比较差异有统计学意义(P=0.044).相关临床病理学指标分析显示rs861537位点的GG/AG基因型在ER+与ER-患者中的分布差异有统计学意义(P=0.048,OR=1.50).rs3212092位点的CC+CT基因型在Her-2-与Her-2+患者中的分布差异具有统计学意义(P=0.027,OR=2.06).结论:在中国西北地区妇女人群中XRCC3基因rs861534和rs861530两个位点的多态性与乳腺癌的发病有相关性.在XRCC3 rs861537位点,GG/AG基因型ER+携带者可能具有较高的乳腺癌内分泌治疗风险;在rs3212092位点,携带CT和TT基因型的Her-2+表达患者具有明显的乳腺癌转移复发风险.

加味四物四藤汤乙醇提取物对高尿酸血症小鼠血尿酸的影响

目的:探讨加味四物四藤汤(MSWST)乙醇提取物对高尿酸血症模型小鼠血尿酸的影响。方法:采用次黄嘌呤联合氧嗪酸钾建立小鼠高尿酸血症模型。60只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(别嘌醇)、MSWST低、中、高剂量组,连续灌胃给药28d,检测小鼠血清中尿酸(UA)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,并剖取小鼠肾脏固定、HE染色,观察组织病理学变化。结果:MSWST各剂量组体质量与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。阳性组体质量明显低于正常组(P<0.05)。与正常组比较,模型组小鼠血清中UA浓度明显升高(P<0.01);阳性组和MSWST各剂量组UA均明显降低(P<0.01),与正常组比较无统计学意义(P>0.05),MSWST各组间无统计学意义(P>0.05)。与模型组及正常组比较,阳性组小鼠血清中Cr和BUN浓度显著升高(P<0.01),其他各组均无明显变化(P>0.05)。MSWST各剂量组肾脏外观正常,未见组织病理学改变。结论:MSWST乙醇提取物可以显著降低高尿酸血症小鼠血尿酸,同时能够保持高尿酸血症小鼠体质量的正常增长。

液体活检技术在肺癌精准医疗中的应用

肿瘤精准医疗的发展方向之一是无创诊疗,其中液体活检愈来愈受诊断业界的关注。液体活检通过无创方式检测各种体液中的循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA、外泌体等肿瘤来源的生物标志物,动态反应疾病的进展,为肿瘤的早期诊断、预后评估、疗效监测、复发转移检测和个体化诊疗等提供简便快捷手段。肺癌,特别是非小细胞肺癌对靶向治疗的响应预测取决于大量生物标志物,如EGFR、ALK、ROS-1和PD-L1。生物标志物检测最常见的是用手术切除样本完成的。但组织样本的获取尤其是重复获取较困难,液态活检恰好弥补了这一缺陷。本综述主要讨论液态活检技术及血浆来源的循环肿瘤DNA分析方法在非小细胞肺癌患者中的应用。

基于网络药理学数据挖掘新型冠状病毒肺炎中药预防治疗的 潜在靶点

目的:采用网络药理学方法分析预防和治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的中药活性成分及潜在治疗靶点。方法:采集自2019年12月8日官方通报的武汉首例不明原因肺炎发病病例至2020年2月10日国家级及省级卫生与健康委员会、中医药管理局、中医医院以及各中医专家团队根据本次疫情的发病情况确立的预防和治疗方案,纳入预防方剂55首中的高频药材,采用网络药理学在线分析系统(TCMSP)统计分析高频药物活性成分以及治疗靶点。结果:根据比对发现,共有22个化合物可能与COVID-19靶点相结合,22个化合物分别靶向CTSB1,CTSB2,CDK1,NTRK1四个靶点。其中化合物MOL005911同时靶向CTSB1,CDK1,NTRK1三个靶点。化合物MOL000098与CDK1,MOL000006 Cyclin-dependent kinase 1/cyclin B更好的靶点结合可能性。藿香同时含有化合物MOL005911和MOL000098。结论:藿香复方中药可能预防COVID-19。

甘肃地区女性乳腺导管癌患者血浆中miR-21-5p高表达

目的:研究甘肃地区乳腺导管癌妇女血浆中miR-21-5p的表达。方法:分别通过芯片法和茎环Q-PCR(Stem-loop Q-PCR)检测甘肃43名汉族乳腺导管癌患者(BC)和44名健康者(NC)血浆中的miR-21-5p水平。同时通过Stem-100P Q-PCR法测定正常乳腺上皮细胞系(HsBST-578)与四种乳腺癌细胞系中miR-21-5p的表达。结果:Q-PCR结果显示,与健康供者相比,乳腺导管癌患者血浆miR-21-5p水平显著上调(P=0.0043)。工作特征曲线(ROC)也显示了miR-21-5p对患者的显著诊断能力(AUC=0.6583,95%CI:0.5345～0.7822,P=0.0154)。miR-21-5p的血浆水平与TNM分期密切相关。乳腺癌细胞系MCF-7(5.428±1.391)中miR-21-5p的表达水平高于正常乳腺上皮细胞HsBST-578。结论:miR-21-5p在甘肃地区乳腺导管癌患者血浆中的高表达,表明miR-21-5p可以作为乳腺导管癌血浆生物标志物的潜在靶标。

加味四物四藤汤乙醇提取物对小鼠的急性毒性实验

目的:了解加味四物四藤汤全方药材乙醇提取物对小鼠的急性毒性影响。方法:通过实验确定最大灌胃给药量,按Bliss法设计试验,对小鼠单次灌胃途径给药,观察14天内小鼠的毒性反应和死亡情况,以小鼠急性死亡率为指标,测定加味四物四藤汤全方药材醇提物对小鼠的LD50和LD5095%的可信区间。结果:加味四物四藤汤乙醇提取物最大灌胃量57.2g/kg(干药膏量)。Bliss法计算加味四物四藤汤乙醇提取物对KM种小鼠的LD50为34.39g/kg,95%可信区间为30.84~38.13g/kg。小鼠灌胃给药36.6g/kg以上剂量后多出现呼吸急促、困倦、俯卧,1小时内有小鼠死亡,死亡前多出现口、足发绀,震颤。第14天实验结束后各给药组存活小鼠解剖检视主要脏器未见异常。结论:加味四物四藤汤全方药材乙醇提取物对小鼠有急性毒性,主要症状为呼吸急促,困倦,口足发绀。

唑来膦酸注射液与帕米膦酸二钠治疗晚期肺癌骨转移患者的对比分析

目的比较唑来膦酸注射液与帕米膦酸二钠治疗晚期肺癌骨转移患者的临床疗效。方法根据治疗方法的不同将84例肺癌骨转移患者分为观察组和对照组,各42例。观察组患者采用唑来膦酸注射液进行治疗,对照组患者采用帕米膦酸二钠进行治疗。比较两组患者的止痛起效时间、止痛维持时间、临床疗效、疼痛情况和不良反应发生情况。结果治疗后,两组患者的止痛起效时间、止痛维持时间及疼痛总有效率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。两组患者均未发生重度不良反应。观察组中,恶心者17例,发热者7例,肌痛者12例,头痛者6例;对照组中,恶心者16例,发热者8例,肌痛者13例,头痛者7例。两组患者的不良反应发生情况比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论唑来膦酸与帕米膦酸二钠均可有效改善晚期肺癌骨转移患者的临床症状,且安全性均较高,但唑来膦酸具有剂量小、操作简单方便的优势,可提高患者依从性,值得临床推广。

接缝处理方式对复合齿槽连接预制剪力墙抗震性能的影响

为研究水平接缝处不同处理方式对复合齿槽连接预制剪力墙抗震性能的影响,对3片足尺预制剪力墙的水平接缝分别采取普通凿毛、加设型钢抗剪键及增大穿过接缝的钢筋直径3种处理方式的复合齿槽连接预制剪力墙试件进行拟静力试验,观察各试件最终破坏形态,对比分析其滞回曲线、骨架曲线、承载力、耗能能力、延性、刚度退化和钢筋应变的差异.结果表明:所有试件破坏模式均为预制墙体两侧暗柱纵筋受压屈服或拉断、墙体两侧角部混凝土压溃剥落的压弯破坏;预制试件的位移延性系数均大于4,极限位移角为1/51~1/42;各试件齿槽处U型钢筋搭接连接锚固可靠,能有效地传递钢筋应力;增设型钢抗剪键及增大穿过接缝的钢筋直径的试件其滞回曲线更加饱满,承载力、耗能能力及初始刚度均有较大提高,有更好的抗震性能;水平缝处增设型钢抗剪键的预制试件YZW2拥有更好的墙体变形能力,墙体延性更好,能够更好地提高预制墙体抗剪能力和整体的工作性能,避免发生剪切滑移;增大钢筋直径的预制试件YZW3拥有更高的初始刚度,墙体开裂延迟,在工程中更便于施工操作.

黄腐酚和异黄腐酚对逆转耐药细胞株A549/DDP凋亡的影响

目的:探讨黄腐酚和异黄腐酚对顺铂诱导的人肺癌A549/DDP细胞活力及细胞凋亡的影响。方法:通过CCK-8法检测黄腐酚和异黄腐酚对A549/DDP细胞活力的影响;通过流式细胞术检测黄腐酚和异黄腐酚对人肺癌耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测结果显示:不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、60μmol/L和80μmol/L)的黄腐酚和异黄腐酚处理A549/DDP细胞48h后,黄腐酚和异黄腐酚对细胞生长均有抑制作用(P<0.05),IC50分别为7.14μmol/L和19.72μmol/L。流式细胞术检测结果显示,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的黄腐酚和异黄腐酚处理A549/DDP细胞48h后,黄腐酚促进细胞凋亡率分别为(13.86±0.18)%、(19.92±0.24)%、(25.05±0.12)%,异黄腐酚促进细胞凋亡率分别为(11.88±0.14)%、(15.46±0.16)%、(17.92±0.11)%,两组均与A549/DDP组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄腐酚和异黄腐酚均可抑制耐药细胞增殖和促进细胞的凋亡,黄腐酚对耐药A549/DDP细胞的抑制效果优于异黄腐酚。

非小细胞肺癌耐药机制及其逆转耐药的研究进展

化疗是肿瘤治疗的重要手段之一,多药耐药是许多肿瘤化疗失败的原因,肺癌也不例外。本文对耐药相关分子磷酸化糖蛋白、多药耐药相关蛋白、乳腺癌耐药蛋白、肺耐药蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶、拓扑异构酶Ⅱ参与调控的非小细胞肺癌耐药的机制和中西药领域有关逆转耐药的研究进展进行简单综述,旨在为进一步寻找中药逆转肿瘤多药耐药的药物奠定理论基础。