参苓白术散含药血清对脂多糖诱导的SPCA1细胞Toll受体4表达影响

目的:观察参苓白术散含药血清对脂多糖(LPS)诱导的肺腺癌细胞株SPCA1增殖及Toll受体4(TLR4)表达的影响;方法:SPCA1细胞随机分为4组:对照组,LPS组,参苓白术散组,塞莱昔布组。对照组加入含有10%对照组大鼠血清的培养基,LPS组加入含有40mmol/mL LPS的10%对照组大鼠血清的培养基;参苓白术散组加入含有40mmol/mL LPS的10%参苓白术散组大鼠血清的培养基,塞莱昔布组加入含40mmol/ml LPS的10%塞莱昔布组大鼠血清的培养基;孵育24h后,采用MTT法检测各组细胞增殖活力,采用RT-PCR法检测TLR4的mRNA表达水平变化,采用免疫印迹法测定TLR4的蛋白表达水平变化。结果:和对照组比较,LPS组细胞增殖活力显著升高(P<0.01);和LPS组比较,参苓白术散组和塞莱昔布组细胞增殖活力显著降低(P<0.01,P<0.05);和对照组比较,LPS组TLR4的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);和LPS组比较,参苓白术散组和塞莱昔布组细胞TLR4的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01);结论:参苓白术散含药血清能够降低LPS诱导的SPCA1细胞的增殖能力,其作用机制可能是通过调控TLR4信号通路实现的。

益气健脾法对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨益气健脾法对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响。方法:20只SPF级雄性大鼠随机分为对照组(n=10)、益气健脾组(n=10)。对照组每日灌胃给予生理盐水1ml/100g,益气健脾组按照每日灌胃给予四君子汤1ml/100g,1次/d,共7d,第7天灌胃给药1.5h后腹主动脉取血分离出血清;采用含15%胎牛血清、15%对照组血清以及15%益气健脾组血清的DMEM培养基分别培养MGC803细胞后,应用CCK-8试剂分别在加药处理24、48及72h时检测细胞的增殖能力;加药处理72h后采用流式细胞仪检测分析各组细胞凋亡率的改变;同时采用Real-time PCR的方法检测各组细胞中Bax-2和Caspase3 mRNA表达水平的改变。结果:与空白对照组及15%对照血清组相比较,15%益气健脾血清组细胞的增殖能力在48h及72h均明显下降(P<0.05);加药72h后,细胞的凋亡率明显增加[(16.38±0.84)%vs(8.32±2.73)%,vs(8.07±2.46)%,P<0.01],细胞中凋亡相关基因Bax和Caspase3 mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。结论:益气健脾法能够有效抑制胃癌MGC803细胞的增殖能力并促进其凋亡,这可能是其治疗胃癌的潜在机制。

大学生基础医学实验技能大赛的实践研究

为培养具备良好实践能力的综合创新型医学生,教学实验中心依托“基础医学实验技能大赛”,从参赛对象、实施方案、成绩评价、结果统计几方面分析总结了2012~2017年教学实验中心举办的历届实验技能大赛的具体实施情况.大赛的开展极大地调动了学生的学习积极性,培养了团队协作能力和实践动手能力.实践证明,该项赛事有效地促进了教与学的共同进步,培养了医学生严谨的临床思维,提升了综合科学素养,对医学院校的临床教育教学改革有着重要的指导作用.

基于网络药理学的二陈汤治疗冠心病分子机制研究

目的应用网络药理学研究二陈汤治疗冠心病的作用靶点、代谢物、信号通路等,从而揭示其从痰瘀论治冠心病的分子机制。方法应用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、中药潜在靶点数据库(TCM-PTD)、中药综合数据库(TCMID),找到二陈汤的主要成分,并通过ChemMapper数据库进行靶点预测,筛选成分靶点。通过TTD、Drugbank、DisGeNET数据库进行检索,获得冠心病相关的疾病靶点。将疾病靶点与药物靶点进行交集,筛选得到疾病-药物成分共同靶蛋白。应用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络模型。应用Metabo Analyst数据库将上述筛选出成分进行代谢物分析,筛选出主要代谢物。采用Cytoscape的MetScape及ClueGO插件分别分析二陈汤治疗冠心病相关靶点的基因功能及代谢通路,构建二陈汤主要药物成分-代谢物-靶点-信号通路拓扑网络。结果经数据库分析共筛选出二陈汤的8种主要成分及与冠心病相关的靶点56个,同时筛选出与二陈汤主要成分相关的代谢物13个及相关信号通路13个;在此基础上构建了二陈汤的成分-靶点、成分-冠心病靶点及相关代谢及信号通路的共表达网络,发现二陈汤可能通过保护血管内皮、抗氧化应激、抗炎修复等多靶点、多途径发挥对冠心病的治疗作用。结论从多角度探索了二陈汤从痰瘀论治冠心病的潜在分子机制,揭示了二陈汤的药理作用,为其后续临床疗效评价指标的筛选提供了研究方向。

基于蛋白质组学研究葛根素逆转Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞的机制

葛根素具有逆转β-淀粉样蛋白(amyloidβpeptide,Aβ)诱导的神经损伤、抑制神经元凋亡的抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)活性,然而,其潜在药效机制依然有待进一步的研究。AD的发生发展是由于体内多个代谢环节发生变化而导致平衡的破坏,而葛根素可能作用于多靶点、多代谢过程来达到治疗目的,如何尽可能全面了解其作用机制,定量蛋白质组学分析提供了新的选择。该研究采用Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型,并通过Aβ免疫荧光检测发现葛根素干预后Aβ显著减少。利用Label-free非标记定量技术,并基于生物信息学分析结果采用Western blot检测,来进一步探究葛根素逆转Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞的机制。结果表明,大部分差异蛋白与cellular component organization or biogenesis、cellular component organization、cellular component biogenesis等生物过程相关,并主要参与pathogenic Escherichia coli infection、mTOR signaling pathway、regulation of autophagy、regulation of actin cytoskeleton、spliceosome、hepatocellular carcinoma、tight junction、non-small cell lung cancer、apoptosis、gap junction等P排在前10的通路中。Annexin V/PI流式细胞仪以及TUNEL检测结果显示,葛根素干预后Aβ显著减少,凋亡率显著下降;Western blot检测发现自噬相关蛋白LC3Ⅱ蛋白表达水平在Aβ诱导后上调,其上调程度在葛根素干预组出现了进一步的增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值在各组间趋势与LC3Ⅱ蛋白表达水平相同;p62蛋白的表达水平在对照组、AD模型组及葛根素干预组依次降低。蛋白互作网络分析表明,CAP1与TUBA1B、HSP90AB2P、DNM1L、TUBA1A、ERK1/2之间的功能存在相关性,其中CAP1与ERK1/2的相关性最高。Western blot检测发现,葛根素干预后p-ERK1/2、Bax、CAP1的表达显著下调,而Bcl-2蛋白的表达水平显著上调。因此,葛根素可能在细胞内多个位置,通过多个生物学过程及通路的共同作用来改善Aβ_(1-42)对SH-SY5Y细胞的损伤,其中CAP1或许扮演着重要角色。

益糖康对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨益糖康是否通过抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)进而减轻糖尿病对肾脏的早期损伤。方法:40只SD雄性大鼠随机分成生理盐水组(1mL/100g)、益糖康组(2.10g/100g)、二甲双胍组(9.11g/100g)、二甲双胍+益糖康组(4.55g/100g二甲双胍+1.05g/100g益糖康煎剂),每组10只,分别给予相应药物灌胃,连续5d,腹主动脉取血,分离上清液。体外实验分组:NS组(10%生理盐水组血清)、YTK组(10%益糖康组血清)、Metformin组(10%二甲双胍组血清)和M+YTK组(10%二甲双胍+益糖康组血清)。高糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞24h后,分别采用划痕实验、Transwell实验、Real-time PCR和Western Blot法检测细胞迁移力、体外侵袭力以及EMT相关基因表达水平的改变。结果:YTK组细胞划痕区的未汇合率显著高于NS组(P<0.05);YTK组穿膜细胞数显著低于NS组(P<0.05);M+YTK组穿膜细胞数显著低于Metformin组(P<0.05);与NS组比较,YTK、Metformin及M+YTK组细胞中E-cadherin mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);而Vimentin和α-SMA mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),其中YTK组和Metformin组水平相当,而M+YTK组中Vimentin和α-SMA mRNA表达水平显著低于Metformin组(P<0.05)。结论:益糖康可能是通过抑制肾小管细胞发生EMT进而减轻糖尿病对肾脏的早期损伤,且中药复方益糖康联合西药二甲双胍对肾小管上皮细胞的EMT抑制效果较单独使用二甲双胍更为显著。