通过卡那霉素选择体系再生可育小麦转基因植株

使用卡那霉素作为选择剂建立起一套有效的小麦转化体系,预培养3d的未成熟胚在基因枪轰击前后进行高渗处理,轰击后于26℃、黑暗条件培养2周,然后用150mg/L硫酸卡那霉素选择培养2周,再转至含150mg/L硫酸卡那霉素的再生培养基进行光照培养。再生植株在温室中长出2～3片新叶后用2.5％硫酸卡那霉素水溶液喷洒;4周内,非转化体完全白化并枯萎,而转基因植株生长正常,用水稻Actinl启动子控制nptⅡ基因,卡那霉素选择体系的平均转化频率达到2.6％,高渗处理明显促进瞬间表达效果和稳定转化频率。目前已得到23个转基因小麦株系,大多数已经产生种子。Southern分析表明这些转基因株系均整合有不同拷贝的nptⅡ基因。

质粒DNA物理形态和其它因素对获得可育转基因小麦的影响

本工作分析了不同形态质粒DNA和未成熟胚高渗透压处理对基因枪小麦转化体系的适用性。高渗处理对瞬间表达和转基因小麦的再生均有明显的促进作用。轰击之前对质粒DNA进行变性处理导致瞬间表达反应大幅度下降,但稳定转化频率(指从100个轰击未成熟胚得到的再生可育转基因植株数)与双链DNA相差不大。使用单链质粒DNA、线性双链质粒DNA和环状双链质粒DNA均可以得到转基因小麦植株。迄今已得到26个不同的转基因冬小麦株系和4个不同的转基因春小麦株系。这些转基因小麦大多数已产生种子,几个春小麦株系已获第二代种子。